实验室常规试剂配制__5.docx

《实验室常规试剂配制__5.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验室常规试剂配制__5.docx（39页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验室常规试剂配制_实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制实验室常用试剂、缓冲液的配制1MTris-HCl,组份浓度1MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.按下表量参加浓盐酸调节所需要的pH值。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低个单位。1.5MTris-HCl组份浓度1.5MTris-HCl配制量1L配制方法1.称量181.7gTris置于1L烧杯中。2.参加约800m

2、l的去离子水，充分搅拌溶解。3.用浓盐酸调节pH值至。4.将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，由于Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低个单位。10TEBuffer,组份浓度100mMTris-HCl,10mMEDTA配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，均匀混合。3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。4.室温保存。3M醋酸钠组份浓度配制量实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制配制方法PBSBuffer组份浓度137mMNaCl,2.7mMKCl,10m

3、MNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加浓盐酸将pH值调节至，然后参加去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。10M醋酸铵组份浓度10M醋酸铵配制量100ml配制方法1.称量77.1g醋酸铵置于100200ml烧杯中，参加约30ml的去离子水搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。3.使用mm滤膜过滤除菌。4.密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以

4、不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因而，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3.苯酚平衡：由于在酸

5、性pH条件下DNA分配于有机相，因而使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值到达以上，苯酚平衡操作方法如下：液化苯酚应储存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其到达室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。参加羟基喹啉8-Quinolinol至终浓度%。该化合物是一种复原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。参加等体积的1MTris-HCl，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。重复操作步骤。参加等体积的0.1MTris-HCl，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分实验室常规试剂配制实验室常

6、规试剂配制层后，除去上层水相。重复操作步骤，略微残留部分上层水相。使用pH试纸确认有机相的pH值大于。将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)1.讲明：从核酸样品中除去蛋白质时经常使用苯酚/氯仿/异戊醇25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提经过中出现的气泡。2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇24:1混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10%(W/V)SDS2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100ml配制方法1.量取80ml去离子水置于100200ml塑料烧杯中NaOH溶解经过中大量放

7、热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2.称取8gNaOH小心地逐步参加到烧杯中，边加边搅拌。3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。NHCl组份浓度NHCl配制量100ml配制方法1.在ml的去离子水中参加ml的浓盐酸N，均匀混合。2.室温保存。5MNaCl组份浓度5MNaCl配制量1L配制方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，参加约800ml的去离子水后搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。3.高温高压灭菌后，4保存。20%(W/V)Glucose组份浓度20%(W/V)Glucose配制量100ml配制方法1

8、.称取20gGlucose置于100200ml烧杯中，参加约80ml的去离子水后，搅拌溶解。2.加去离子水将溶液定容至100ml。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制3.高温高压灭菌后，4保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度25mMTris-HCl,10mMEDTA,50mMGlucose配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.高温高压灭菌后，4保存。3.使用前每50ml的SolutionI中参加2ml的RNaseA20mg/ml。SolutionII(质粒提取用)组份浓度配制量配制方法SolutionIII(质粒提取用)组份浓度3MKOAc,5MCH3COOH配制量

9、500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。2.参加300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压灭菌后，4保存。0.5MEDTA组份浓度0.5MEDTA配制量1L配制方法1.称取186.1gNa2EDTA2H2O，置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至约20gNaOH)。注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后，高温高压灭菌。6.室温保存。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制1MDTT组份浓度1MDTT配制量20ml配制方法1.称取3.09gDTT，

10、参加到50ml塑料离心管内。2.加20ml的0.01MNaOAc，溶解后使用0.22mm滤膜过滤除菌。3.适量分成小份后，-20保存。10mMATP组份浓度10mMATP配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O，参加到50ml塑料离心管内。2.加20ml的25mMTris-HCl，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。组份浓度10mMATP配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O，参加到50ml塑料离心管内。2.加20ml的25mMTris-HCl，搅拌溶解。3.适量分成小份后，-20保存。蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%(W/V)Acry

11、lamide组份浓度30%W/VAcrylamide配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L，用mm滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4保存。注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应慎重操作，由于有可能含有少量的未聚合成份。40%(W/V)Acrylamide组份浓度40%W/VAcrylamide配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L，用

12、0.45mm滤膜滤去杂质。4.于棕色瓶中4保存。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应慎重操作，由于有可能含有少量的未聚合成份。10%(W/V)过硫酸铵组份浓度配制量配制方法5Tris-GlycineBuffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)组份浓度0.125MTris,1.25MGlycine,%W/VSDS配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。5SDS-PAGELoadingBuffe

13、r组份浓度配制量5ml配制方法1.量取下列试剂，置于10ml塑料离心管中。2.加去离子水溶解后定容至5ml。3.小份500ml/份分装后，于室温保存。4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中。5.参加2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。考马斯亮蓝R-250染液组份浓度%W/V考马斯亮蓝R-250,25%V/V异丙醇,10%V/V冰醋酸配制量1L配制方法1.称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。2.量取250ml的异丙醇参加上述烧杯中，搅拌溶解。3.参加100ml的冰醋酸，搅拌均匀。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制4.参加650ml的去离子水，搅拌均匀。5

14、.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。考马斯亮蓝染色脱色液组份浓度10%V/V醋酸,5%V/V乙醇配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.充分混合后使用。凝胶固定液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度50%V/V甲醇,10%V/V醋酸配制量1L配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。2.均匀混合后室温保存。凝胶处理液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度配制量配制方法凝胶染色液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度%W/VAgNO3,1%V/V浓NH3H2O,%W/VNaOH配制量100ml配制方法1.量取下列试剂，参加100200ml的试剂瓶中。2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水

15、浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。3.本染色液应现用现配，不宜保存。显影液SDS-PAGE银氨染色用组份浓度%W/V柠檬酸,%V/V甲醛实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L试剂瓶中。2.参加1L去离子水后，摇动混合溶解。3.室温保存。核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50TAEBuffer组份浓度2MTris-醋酸,100mMEDTA配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.参加ml的醋酸，充分搅拌。4.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。10TBEBuffe

16、r组份浓度配制量配制方法10MOPSBuffer组份浓度200mMMOPS,20mMNaOAc,10mMEDTA配制量1L配制方法1.称量41.8gMOPS，置于1L烧杯中。2.加约700mlDEPC处理水，搅拌溶解。3.使用2NNaOH调节pH值至。4.再向溶液中参加下列试剂。5.用DEPC处理水将溶液定容至1L。6.用um滤膜过滤除去杂质。7.室温避光保存。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时可以使用，但变黑时不要使用。溴乙锭10mg/ml组份浓度10mg/ml溴乙锭配制量100ml配制方法1.称量1g溴乙锭，参加到100ml容器中。2.参加去离子水1

17、00ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。4.溴乙锭的工作浓度为mg/ml。注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。Agarose凝胶1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液通常是TBE或1TAE)。2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，参加适当的锥形瓶中。3.参加一定量的电泳缓冲液总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。4.在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热经过中,当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔

18、化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。5.使溶液冷却至60左右，如需要可在此时参加溴乙锭溶液终浓度mg/ml)，并充分混匀。注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在35mm之间。7.在室温下使胶凝固大约30分钟1小时)，然后放置于电泳槽中进行电泳。注：凝胶不立即便用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4下保存，一般可保存25天。琼脂糖凝胶浓度与

19、线形DNA的最佳分辨范围6LoadingBuffer(DNA电泳用)组份浓度配制量配制方法实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制10LoadingBuffer(RNA电泳用)组份浓度配制量10ml配制方法1.称量下列试剂，置于10ml离心管中。2.向离心管中参加约4ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。3.参加5ml的甘油Glycerol后，充分混匀。4.用DEPC处理水定容至10ml后，室温保存。核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20SSC组份浓度3.0MNaCl,0.3M柠檬酸钠配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

20、。3.滴加14NHCl，调节pH值至后，加去离子水将溶液定容至1L。4.高温高压灭菌后，室温保存。20SSPEBuffer组份浓度3.0MNaCl,0.2MNaH2PO4,0.02MEDTA配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加NaOH调节pH值至约ml的10NNaOH)。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。50Denhardts溶液实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制组份浓度配制量500ml配制方法1.称量下列试剂，置于500ml烧杯中。2.加去离子水约400ml，充分搅拌溶解3.加去离子水将

21、溶液定容至500ml。4.用0.45mm滤膜过滤后，分装成每份25ml。5.-20保存。0.5M磷酸盐Buffer组份浓度0.5MNa2HPO4配制量1L配制方法1.称量134gNa2HPO47H2O置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水充分搅拌溶解。3.参加85%的H3PO4浓磷酸调节溶液pH值至。4.加去离子水定容至1L。5.高温高压灭菌后，室温保存。组份浓度10mg/mlSalmonDNA配制量约100ml配制方法1.称取鲑鱼精DNA2g置于500ml烧杯中，参加约200ml的TEBuffer。2.用磁力搅拌器室温搅拌24小时，溶解后参加4ml的5MNaCl，使其终浓度为0.1M

22、。3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4.回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA。5.参加2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。6.离心回收DNA后，溶解于100ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。7.计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10mg/ml。8.煮沸10分钟后，分装成小份1ml/份。-20保存。9.使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。此页面能否是列表页或首页？未找到适宜正文内容。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制2.充分混匀后，使用um滤膜滤去杂质后使用。组份浓度39mMGlycine,48mMTris,%(W/V)SDS,20%(V/

23、V)甲醇配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至800ml后，参加200ml的甲醇。4.室温保存。组份浓度20mMTris-HCl,150mMNaCl,%V/VTween20配制量1L配制方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。2.向烧杯中参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.参加mlTween20后充分混匀。4.加去离子水将溶液定容至1L后，4保存。组份浓度5%W/V脱脂奶粉/TBSTBuffer配制量100ml配制方法1.称量5g脱脂奶粉参加到100ml的TBSTBuffer中，充分搅拌溶解。

24、1.4保存待用本封闭液应该现配现用。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(100mg/ml)组份浓度100mg/mlAmpicillin配制量50ml配制方法1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中。2.参加40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。4.小份分装1ml/份后，-20保存。IPTG(24mg/ml)组份浓度24mg/mlIPTG配制量50ml配制方法1.称量1.2gIPTG置于50ml离心管中。2.参加40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。

25、4.小份分装1ml/份后，-20保存。X-Gal(20mg/ml)组份浓度配制量配制方法-20避光保存。组份浓度配制量配制方法实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制组份浓度配制量1L配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH约ml)，调节pH值至。4.加去离子水将培养基定容至1L。5.高温高压灭菌后，冷却至室温。6.参加1mlAmpicillin100mg/ml后均匀混合。7.4保存。组份浓度配制量1L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4100ml。溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2

26、HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。3.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。5.待溶液冷却至60下面时，参加100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。此页面能否是列表页或首页？未找到适宜正文内容。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。4.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。5.量取10ml250mMKCl溶液，参加到烧杯中。6.滴加5NNaOH溶液约ml)，调节pH值至。7.参加去离子水将培养基定容至1L。8.高温高压灭菌后，

27、4保存。9.使用前参加5ml灭菌的2MMgCl2溶液。组份浓度配制量100ml配制方法1.配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90ml去离子水中，充分溶解后定容至100ml，用0.22mm滤膜过滤除菌。2.向100mlSOB培养基中参加除菌的1M葡萄糖溶液2ml，均匀混合。3.4保存。组份浓度配制量配制方法此页面能否是列表页或首页？未找到适宜正文内容。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制配制方法NZYM培养基除不含CasaminoAcid酪蛋白氨基酸外，其他成份与NZCYM培养基一样。组份浓度配制方法NZM培养基除不含YeastExtract酵母提取物外，其他成份与NZYM培养基一样。1.根

28、据液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，参加下列试剂中的一种。2.高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀此时培养基温度很高，小心烫伤)。3.待培养基冷却至5060时，参加热不稳定物质如抗生素等，摇动容器充分混匀。组份浓度配制量1L配制方法1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。实验室常规试剂配制实验室常规试剂配制2.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加5NNaOH约ml)，调节pH值至。4.加去离子水将培养基定容至1L后，参加15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至60左右。6.参加1mlAmpicillin100mg/ml)、1mlIPTG2

29、4mg/ml)、2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合。8.4避光保存。组份浓度配制量1L配制方法1.配制磷酸盐缓冲液0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4100ml。溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，高温高压灭菌。2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。3.参加约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至1L后，参加15gAgar。5.高温高压灭菌后，冷却至60左右。6.参加100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mlAmpicillin100mg/ml)、1mlIPTG24mg/ml)、2mlX-Gal20mg/ml后均匀混合。8.4避光保存。