红细胞补体受体I型基因遗传研究.docx

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1、红细胞补体受体I型基因遗传研究（临床检验杂志）2014年第六期1对象与方法11TaqMan探针荧光定量PC分型技术根据TaqMan探针试剂盒(上海天昊公司)讲明书操作，检测C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点多态性。PC反响体系为6L，包括Mastermix3L，TaqMan探针(40)005L，模板DNA2L，灭菌ddH2O补足至6L。循环参数:95预变性10min;9510s，655515s(每个循环下降05)，6015s，共20个循环;9510s，6030s，共25个循环;从60开场以006/s缓慢升温到61，用7500荧光定量PC仪及

2、自带软件(ABI公司)进行熔解曲线分析并判读野生纯合子、突变纯合子和杂合子。12DNA测序PC扩增反响体系为10L，包括10PC缓冲液10L，上、下游引物各10L，模板DNA10L，02UTaqDNA聚合酶，用灭菌ddH2O补足至10L。循环参数:95预变性10min;9515s，6060s，7245s，共40个循环;72延伸5min。PC产物经虾碱酶(SAP，Promega公司)和外切核酸酶(Exo，Epicentre公司)纯化后用ABI3130测序仪(ABI公司)测序。SNP分型用GeneMapper40软件(AppliedBiosystems公司)进行分析。13统计学分析用SPSS115

3、统计软件进行。基因型和等位基因频率用直接计数法计算，各组间基因型及等位基因频率比拟用2检验，以P005为有统计学意义。2结果21C1基因型检测结果经TaqMan探针实时荧光PC检测，C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点多态性的SNP分型结果显示，rs2296160C/T位点检测到CC、CT和TT3种基因型;rs2274567G/A和rs4844600G/A位点均检测到GG、GA和AA3种基因型;DNA基因测序进一步证明本实验结果。见图1。22C1基因多态性在广西百色地区壮族健康人群中的分布计算本研究对象中C1基因型和等位基因频率，经2检验，C

4、1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点的基因型及等位基因频率均符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P005)，讲明所选的研究样本具有群体代表性(表1)。其中rs2296160C/T位点基因型以CC型和CT型最为常见，其等位基因以C型频率最高，占673%;rs2274567G/A位点基因型以GA型多见，其次为AA型和GG型，其等位基因以A型频率最高，占531%;rs4844600G/A位点基因型以GA型多见，占479%，其等位基因以G型频率最高，占616%。C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A3

5、种多态性基因型频率在男、女性别间差异无统计学意义(P=0591、0293和0525);而等位基因频率在男、女间差异亦无统计学意义(P=0310、0122和0268)。表明广西百色地区壮族人群中C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点存在多态性，而这种多态性的基因型或者等位基因频率在男、女性别间比拟差异无统计学意义(P005)。见表1。23C1基因多态性在不同种族人群间的比拟广西壮族人群C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A多态性分布频率与人类基因组计划(wwwncbinlmnihgov/project

6、s/SNP/)公布4个人群(欧洲人、非洲人、日本人和北京人)的SNP分型数据进行比拟，结果显示C1基因rs2296160C/T多态性的基因型与欧洲人、非洲人、日本人和北京人比拟，P分别为0018、0000、0582和0767，而等位基因的分布频率在与欧洲人、非洲人、日本人和北京人群比拟，P分别为0015、0000、0408和0475;C1基因rs2274567G/A多态性的基因型频率与欧洲人、非洲人、日本人和北京人群比拟，P分别为0000、0000、0264和0433，而等位基因的分布频率与欧洲人、非洲人、日本人和北京人群比拟，P分别为0000、0000、0323和0219;C1基因rs484

7、4600G/A多态性的基因型频率与欧洲人、非洲人、日本人和北京人群比拟，P分别为0000、0000、0153和0409，而等位基因的分布频率与欧洲人、非洲人、日本人和北京人群比拟，P分别为0000、0000、0054和0245。广西壮族人群C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A3种多态性基因型和等位基因的分布频率与欧洲人和非洲人群比拟差异有统计学意义(P005)，而与日本人、北京人群比拟差异无统计学意义(P005)。见表2、3、4。3讨论红细胞C1是补体受体家族中的重要一员，具有广泛的生物学功能，包括分子识别、黏附和储存抗原、抑制补体的激活、去除循

8、环血中免疫复合物、免疫调理吞噬等多种生物学效应。不同疾病情况下，机体红细胞C1数量及活性存在不同程度的变化，其基因多态性分布与不同疾病的易感性存在密切相关。C1基因位于1号染色体长臂上，C1基因存在多个位点的SNP，这种基因多态性与疟疾、阿耳茨海默病、大脑淀粉样血管病、胆囊癌、冠状动脉疾病、特发性肺纤维化、肉状瘤病等疾病的相关性已成为国内外学者研究的热门。因而，正确分析和说明C1基因多态性在不同种族和地域人群中的分布特点，能为其在不同人群中与某些疾病发生、发展间的关系提供分子遗传学基础。本研究用TaqMan探针荧光定量PC分型技术和DNA测序法检测广西壮族人的C1基因rs2296160C/T、

9、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点多态性的分布情况，结果显示，在所观察的人群中，rs2296160C/T位点表现出CC、CT和TT3种基因型，以CC型(449%)最为常见，其等位基因以C(673%)最为常见;rs2274567G/A位点也表现出GG、GA和AA3种基因型，以GA型(497%)最为常见，其等位基因以A(531%)多见;rs4844600G/A位点也表现出GG、GA和AA3种基因型，以GA型(477%)最为常见，其等位基因以G(616%)多见。以上3种位点基因多态性的基因型和等位基因频率在男、女性别间比拟均无统计学差异(P005)。将本研究结果与欧洲、非洲等人群

10、基因多态性研究结果比拟显示，广西百色地区壮族人群中C1基因rs2296160C/T位点T等位基因频率为327%，显著高于欧洲人的246%(P005)和非洲人的142%(P005);rs2274567G/A位点A等位基因频率为531%，显著高于欧洲人的128%P005)和非洲人的235%(P005);rs4844600G/A位点G等位基因频率为616%，显著低于欧洲人的750%(P005)和非洲人的978%(P005)。本研究结果与日本及北京等亚洲人群比拟差异无统计学意义(P005)。可见C1基因型分布及等位基因频率在不同种族间存在着明显的差异。这一结果符合遗传学规律，即亲缘关系越近，其基因型分布越类似，反之则差异越显著。综上所述，对广西百色地区壮族人群C1基因rs2296160C/T、rs2274567G/A和rs4844600G/A位点的多态性研究，不仅有利于认识临床上与C1基因相关的多种疾病在不同种族和地域表现出来的差异，而且为进一步的人类学及群体遗传学的研究和基因多态性普查奠定了实验基础，并为进行疾病前瞻性研究提供了重要的分子遗传学数据。