动物疫病监测抽样数量考虑.docx

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1、动物疫病监测抽样数量考虑（广东畜牧兽医科技杂志）2014年第三期1定量监测样品数量确实定当前定量监测主要以血凝抑制HI或间接血凝检测方法，结果能反映某一畜禽群体抗体水平的高低。当前需开展的病种包括H5、H7、H9亚型禽流感抗体、新城疫抗体、减蛋综合征抗体，O型口蹄疫抗体、猪瘟抗体正向间接血凝方法。抽样数量由下面公式计算。式2中，各符号含义与式1同。以当前检测量较大的H5亚型禽流感抗体检测为例。HI检测方法本身的误差允许范围为1Log2，在进行HI抗体水平评估时，1个Log2的误差，对结果的评估影响能够接受，故将允许误差定为1Log2。查正态分布的双侧分位数表，置信度为95%=0.05时，Z/2

2、为1.96；置信度为99%=0.01时，Z/2为2.58。总体方差2根据以往有关资料计算或进行小规模调查后估算。本例以广东省动物卫生监督总所对全省使用的4个厂家的Re-6禽流感疫苗比对试验的结果，计算得到免疫程序为14天龄首免，0.4mL,35天龄二免，0.5mL。免疫后不同时期抗体水平的标准差不同。不同免疫时间的样品数量如表1。由表1能够看出，免疫抗体定量监测时，免疫前期由于个体差异等因素的影响，产生抗体的速度有所不同，抗体水平一致性差，标准差较大，抽样所需样本数多。随着抗体到达高峰，抗体水平的一致性较趋好，抽样所需样本数少。免疫后期抗体水平有所下降，差异有所增高，抽样数量有所增加。从表中能

3、够看出，在本次实验条件下置信度为95%=0.05，需采310份样本。即便在置信度要求较高的情况下=0.01,也只需采518份样本。由于该实验模型中免疫效果很好，若考虑到生产实际中，会受各种因素的影响，采集18份样品，可得到较准确的结果。2定性监测样品数量确实定定性监测包括病原学监测，以及血清学检测中的以阴、阳性进行结果断定的监测。当前各种病原学监测均属于定性监测，主要用于断定群体的感染率。血清学检测方法中琼扩、凝集、ELISA等检测方法也属于定性监测，主要用于免疫群体的免疫合格率，不免疫群体的感染率。当前监测中，口蹄疫O型、亚洲型、A型抗体和非构造蛋白抗体的定性ELISA检测，高致病性猪蓝耳病

4、、猪瘟、新城疫、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病、禽白血病、布鲁氏菌病、结核病、鸡白痢、猪甲型H1N1流感、血吸虫、狂犬病、马传贫、马鼻疽等疫病的抗体检测均属于这监测。抽样数量用下面公式进行计算。在置信度为95%，允许误差为0.1%15%时，不同合格阳性率下，监测所需样品数见表2。从表2能够看出，当合格率或阳性率为50%所需样本数最多，由于此时一半合格，一半不合格，抽中两者的机率一样，需大的样本量才能确保被抽中样本对结果的影响权重。在允许误差一样时，样本数随着合格率升高或降低呈对称性降低，如合格率为40%时所需样本数与合格率为60%时同；合格率为10%、90%两者所需样本数一样。常见重大动物疫病的阳性

5、率一般低于5%，取允许误差为1%时，所需样本量为1000多份。常见免疫抗体的免疫合格率在50%以上，取允许误差为15%时，所需样本数最多为43份。3发现监测时采样数量确实定发现监测用于证实某一地区或某一畜禽群体内，能否存在感染。只要检测到1例感染动物，即可证实存在感染。对新发病进行调查，或确认畜禽群体内能否存在某种病原时适用。尼帕病毒病、牛海绵状脑病和羊痒病，H7N9亚型禽流感等监测属于该类型。但结果可讲明有无该病原存在，若想了解该病原的感染率，则需用3式进一步进行调查，确定感染率的高低。发现样品数量计算公式如下：4式n为样本量，为犯错误的概率，N为目的动物总数，d为估计的感染动物数量(可由估

6、计感染率乘N获得)。不同感染率和不同畜禽群大小的抽样数量如表3。从表3能够看出，在发现监测采样中，即便感染率低致0.1%，群体数量庞大到10亿，采样数量不超过3000，但其前题条件是随机抽样。假设某地区猪瘟的感染率为2%，对于10000头的猪场只要采148头，即能够确认场内能否存在猪瘟病原；若在该地区范围内随机采样150份，即能够确认地区能否存在猪瘟病原。对于禽白血病，在未采取净化措施的情况下，黄羽种鸡的阳性率在10%20%，对于10000羽的种鸡，只要采1429个样品，即可确定该鸡群有无感染。4免疫抗体水平与免疫合格率监测相关性讨论比照表2和表3可知，对确定免疫合格率的样本数要比评估抗体平均

7、水平常的数量要大很多。例如评估某禽群平均禽流感抗体水平常，置信度为95%=0.05，采集310个样本即能得到相对准确的结果；而对禽群免疫合格率进行评估时，则需要较大的样本，即便是允许误差大到15%时，所需样本数也需1643份，在免疫合格率为80%时，需要28份。其原因是评估抗体平均值时，每个样本与平均值相对较近，也就是讲各个样本值对平均值的影响相对较小；评估免疫合格率时，每个样本不是合格，就是不合格，是两个截然相反的结果，每个样本对合格率的影响较大，所以需要较大的样本数才能保证评估的准确性。在进行免疫抗体评估时，除平均抗体水平外，群体合格率也是一个重要的指标，不可或缺，故需要相对较多的样本数。

8、但平均抗体水与免疫合格率之间有着较强的内在关联，研究二者内在的相关性，通过平均抗体水平来评估免疫合格率，可作为减少样本数的一种策略。本文对本所最近监测的90个禽群的H5亚型抗体和免疫合格率的相关性进行分析，相关系数达0.856，拟合的通过抗体滴度估算免疫合格率的方程为y=-1.5486x2+26.468x-12.439，详见图1。根据公式，当抗体滴度高于4.1log2时(实际4.6log2时)，抗体滴度均高于70%的要求；抗体滴度5.4log2时(实际5.5log2)，免疫合格率高于85%；抗体滴度8log2时(实际8.35log2)，免疫合格率到达100%。由于免疫合格率群体安全水平的标准是

9、70%，故定量检测中，按公式2抽取样本，再通过相关性分析，可对阳性率进行有效评估。5当前常用监测项目的样本数量为便于读者应用以上公式确定所需监测项目的样品数量，对常用监测项目的参数设定进行例举见表4。根据全省2012年监测数据，列出当前各监测项目的样本数计算公式见表5，供读者考参考。6讨论6.1以上为简单随机抽样样本数确实定，既适用于一个群体，也适用于一个场，一个县或一个市范围内的抽样数量。但考虑到对较大范围采样时，每个动物个体均需纳入抽样框，不易完成，对于市县的监测需采用分层或多级采样方式。在条件相近的，范围不是很大的区域或某一动物群体中抽样更适宜。另在一个大区域内，某病种的易感动物种类较多

10、，日龄不一，免疫程序不同，差异大，了解详细某一场或一流行病学单元的水平，将更有利于有的放矢地采取相应的措施。6.2定量监测经过中，总体标准差一般不知道，可根据以往监测结果计算获得，或采用少量抽样监测预调查获得。定性监测中病原的阳性率或免疫抗体的合格率可根据往年的平均阳性率或合格率，本级没有数据的可参照上一级的数据，如可参照市、省或全国的数据。允许误差的病原的阳性率一般较低，要小于阳性率；免疫抗体合格率一般较高，由于公认的群体安全标准为70%，监测目的是确认能否到达这一标准，当总体合格率低于这一标准时，可根据精度的需要给定一个值作为，当总体合格率高于这一标准时，能够将总体合格率与70%的差作为，以确保调查结果落在70%以上的区间内。参数的设定需视监测精度要求和实际情况而定。