无果枸杞芽水提物促眠效果研究.docx

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1、无果枸杞芽水提物促眠效果研究 摘要目的观察无果枸杞芽水提物FLSAE促眠效果。方法选取成年2月龄C57BL/6J小鼠，采用戊巴比妥钠协同FLSAE致小鼠睡眠的方法。将FLSAE根据5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg的浓度溶解在蒸馏水中，0.2mL/10gd，灌胃给药，持续11d，对照组给予等量蒸馏水，观察小鼠入睡潜伏时间和睡眠持续时间。在上述研究的基础上，找出最佳药物浓度，检测各时间点小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间，挑选出最佳起效时间点。结果与对照组比拟，FLSAE各浓度组小鼠睡眠潜伏期均缩短P0.05，睡眠时间均延长P0.01；以中浓度组10mg/kg延长小鼠睡眠时间最为显著P0.05

2、。以10mg/kg给药，给药第1d，与对照组比拟，小鼠睡眠潜伏期有缩短P0.05、睡眠时间有延长P0.05；至灌胃给药5d时小鼠睡眠时间延长最显著，与对照组比拟，P0.01，与其它给药时间点比拟，P0.05；至灌胃11d小鼠的睡眠潜伏期和睡眠时间与对照组比拟，P0.05。结论FLSAE能够促进小鼠的睡眠，其中10mg/kg组灌胃5d促进小鼠睡眠效果最佳。关键词睡眠；无果枸杞芽；量效；时效随着工作节拍的加快和生活压力的增加，失眠的人数逐年增加。探寻毒副作用小，效果稳定可靠的、改善和治疗失眠的药材是研究者关注的热门，国内关于中药材改善睡眠研究报道较多1-5。枸杞为传统中药材，其叶和果都具有安神成效

3、。课题组前期研究发现宁夏枸杞类新产品无果枸杞芽茶可改善中老年人睡眠，为进一步研究其改善睡眠的量效、时效及可能机制，本研究采用戊巴比妥钠协同无果枸杞芽水提物FruitlessLyciumSproutAqueousExtract，FLSAE所致小鼠睡眠的方法，对FLSAE影响小鼠睡眠的量效和时效关系进行研究，明确FLSAE改善睡眠的最佳剂量和作用时间，以期为FLSAE改善睡眠作用的机制研究提供理论根据。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物：两月龄SPF级C57BL/6J小鼠由宁夏医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK宁2005-0001，雌雄各半，喂养于昼夜12h交替、室温242环境

4、中，自由进食。1.2.2主要试剂：无果枸杞芽干品由宁夏杞芽食品科技有限公司提供，无果枸杞芽水提取物由宁夏回族自治区中医医院制剂室制备，制备方法如下。1.2方法1.2.1FLSAE的制备：将无果枸杞芽干品浸泡12h，煎煮5h之后，过滤取出药液，药渣加冷水再煎，反复三次，将药液合并，静置沉淀，再用4层纱布过滤3次，煎出的药液放到小火上煎煮蒸发浓缩，使之逐步构成稠膏状。采用水提法制作无果枸杞芽浸膏，每克无果枸杞叶浸膏含生药量约3.17g。以小鼠体重20g相当于成人体重60kg为参考进行中草药的剂量换算2005版（中国药典）。1.2.2FLSAE改善小鼠睡眠的量效关系研究：将40只小鼠随机分为：低剂量

5、5mg/kg，FLSAE1组、中剂量10mg/kg，FLSAE2组、高剂量20mg/kg，FLSAE3组和对照组，每组10只。将FLSAE根据不同浓度溶解在蒸馏水中，按0.2mL/10g体重，1次/d，灌胃给药，对照组灌胃等量蒸馏水。天天定时灌胃给药，30min后，腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg，将小鼠腹部朝上放在37C温热板上，以翻正反射消失时间记为睡眠潜伏时间，以翻正反射消失的持续时间记为睡眠时间即翻正反射消失时间至翻正反射重复出现时间，持续11d，观察小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间。1.2.3FLSAE改善小鼠睡眠的时效关系研究：在FLSAE改善小鼠睡眠的量效关系研究的基础上，选取最佳促眠药

6、物浓度组，分析1、3、5、7、9、11d小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间，挑选出最佳给药时间。1.3统计学方法：采用SPSS19.0统计软件进行实验数据统计分析。计量资料以sx表示，比拟采用单因素方差分析，两两之间比拟采用LSD检验，以P0.05差异有统计学意义。2.1无果枸杞芽提取物促眠作用的量效关系研究：与对照组比拟，无果枸杞芽提取物各浓度均可缩短小鼠睡眠潜伏时间P0.05，并延长各组小鼠睡眠时间P0.05。其中以中浓度组10mg/kg效果最显著，与其它浓度组比拟，有显著差异P0.05。2.2无果枸杞芽提取物促眠作用的时效关系研究：无果枸杞芽提取物以10mg/kg灌胃，给药1d时开场起效，与对照组

7、比拟，对小鼠入睡的潜伏时间有缩短作用，对小鼠睡眠持续时间有延长作用，有显著性差异P0.05；至给药3d时，对小鼠睡眠潜伏期缩短最显著，至连续给药5d时，对小鼠睡眠持续时间延长作用最显著，与其它时间点FLSAE组比拟，有显著性差异P0.01；至给药11d，小鼠睡眠持续时间的延长作用及对入睡潜伏时间的缩短作用仍然保持，与对照组比拟差异显著P0.05。睡眠不仅是维持个体生存所必需的经过，并促进机体生长，促进脑功能发育、发展、保持脑的能量、稳固记忆及保证大脑发挥最佳功能，加强免疫力，延缓衰老等多方面功能。随着生活节拍的加快及生活压力的增加，失眠的人数逐年增加,据调查约33的美国人、37.2的法国和意大

8、利人、38.2的中国城市居民患有失眠1-4。目前临床常用镇静催眠药可缓解患者入睡困难、増加睡眠时间，但常引起次日头晕、嗜睡等现象，且长期使用会产生药物耐受性、依靠性和成癖性1。中医中药治疗失眠效果显著，近年来，国内很多学者致力于中药促眠作用研究，如酸枣仁总皂苷枣仁颗粒、人参益智胶囊等都有较好的促眠作用，但煎药、药味、方便性等方面限制其使用和发展5-13，故探寻药食同源、毒副作用小、效果稳定可靠的促眠中药材是研究者关注的焦点。枸杞和枸杞叶的安神作用早在唐代甄权的（药性论）中就有记载：臣，子叶同讲，味甘，平。能补益精诸缺乏，易颜色，变白，明目，安神，令人长寿。宁夏枸杞类新产品无果枸杞芽多种有效成分

9、和生物活性物质明显高于枸杞果有果枸杞叶，本课题组前期研究发现泡服无果枸杞芽叶茶可改善失眠患者的睡眠。为进一步研究宁夏无果枸杞芽促眠成效，本实验观察了FLSAE促眠的最佳浓度和最佳起效时间，以期为FLSAE促眠作用机制研究提供先期准备。结果在宁夏FLSAE促眠作用的量效关系研究中，在本实验所设的3个浓度中，各浓度组均有促眠作用，其中10mg/kg浓度组效果最佳，此结果提示在10mg/kg浓度范围内，随着药物浓度的增加，促眠作用加强，当大于10mg/kg浓度范围后，随着药物浓度的增加，促眠不再加强。在FLSAE促眠作用的时效关系研究中，以10mg/kg灌胃，给药1d时对小鼠入睡的潜伏时间有缩短作用，对小鼠睡眠持续时间有延长作用；至连续给药5d时，对小鼠睡眠持续时间延长作用最显著，至给药11d，小鼠睡眠持续时间的延长作用及对入睡潜伏时间的缩短作用仍然保持，此结果提示FLSAE用药5d促眠作用最佳，至用药11d仍有促眠作用，课题组也曾观察至灌药21dFLSAE促眠作用仍然保持，讲明无药物耐受性。本研究结果表明宁夏无果枸杞芽具有促眠作用，因宁夏无果枸杞芽中含有多种营养成分和生物活性物质如黄酮类、萜类化合物、微量元素、维生素E/C、生物碱等，到底哪些成分、通过哪些途径起促眠作用有待进一步深化研究。