电泳技术在临床医学的作用.docx

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1、电泳技术在临床医学的作用1CE在临床检验医学的应用1.1血清蛋白质分析血清蛋白电泳通常是临床上在无论何种原因引起的血液沉降率增加时都需要进行的常规实验检测项目，它将有助于确诊临床报告的炎症或感染的状况及提示进一步检测其他项目。采用CE可分离血清蛋白，并能准确计算各蛋白质的相对浓度，避免了凝胶电泳法染色、脱色经过中多种影响因素造成的误差，CE法的结果重复性好，可信度高11。前清蛋白在血清中的浓度可表明营养状态，且是确定恶性肿瘤、炎症、肝硬化、霍奇金病的重要指标，多数电泳法难以分辨，而用CE法很容易分离定量，检测波长为214或200nm。CE不仅增加了清蛋白部分的分辩率，对双清蛋白血症检测的灵敏度

2、也有了很大的提高。CE提供了足够的在1区的分辩率以区分1酸性糖蛋白与1抗胰蛋白酶。在2区的球蛋白区，2巨球蛋白与触球蛋白不易区分，但在-球蛋白区具有高分辩率12。CE法对肾病、慢性感染、本身免疫病和肝硬化等多种疾病的免疫球蛋白分析有较好的优势。1.2单克隆免疫球蛋白的特征鉴别单克隆免疫球蛋白是一种过度合成的单一类型或亚型的异常免疫球蛋白。它的产生是由于单一克隆的恶性或高致敏B细胞的无限增殖，进而产生同源性的单克隆免疫球蛋白。单克隆免疫球蛋白组分的检测运用了各种与免疫学、血液学和生物化学等领域相关的技术和仪器。通过用特异性抗体包被的琼脂糖凝胶球消除一个特殊的峰来指示是哪种单克隆成分，借此对免疫球

3、蛋白的型、亚型和轻链型予以鉴定和分类13。这一技术提高了对该蛋白组分的分析与研究水平。1.3血红蛋白成分的分析在地贫高发区检测出地贫高风险夫妇和预防地贫患儿出生是关系到提高我国出生人口素质和实现优生优育工作的一个重要任务。其中血红蛋白(Hb)电泳是研究和分离异常血红蛋白的有效方法，亦是诊断血红蛋白分子病和地贫不可缺少的手段之一15。毛细管电泳法是在充满电泳液的石英毛细管中进行电泳的技术，在溶血试剂中进行稀释的红细胞样品，会被注射到毛细管的负极端，在高压电的作用下竞相电泳分离，然后Hb会被靠近正极端的415nm光波检测装置检测到16。通过毛细管电泳将蛋白质分离，采用波长为200nm氘光源和CCD

4、探测器，对血红蛋白成分分析灵敏度和分辨率高17。CE是一种敏感度和准确度较高的分析方法，具有操作简便、检测时间短的优点18。通过使用碱性pH缓冲液，正常和异常(或变异体)血红蛋白按下列顺序检测出来，从阴极到阳极依次为:A2(A2变异体)，C，A2/O-阿拉伯血红蛋白(O-Arab)，E，S，D，G费城血红蛋白(G-Philadelphia)，F，A，Hope，Bart，J，N-巴尔的摩血红蛋白(N-Baltimore)和H。在CE区带中不出现碳酸酐酶，不但能够鉴别出HbA2变异体，还能够准确检测HbA、HbF、HbA2含量以及其他异常血红蛋白，可用于诊断地中海贫血及其他血红蛋白病19。1.4尿

5、蛋白质分析临床医生和生物学家关注的尿蛋白检查的概念正在逐步更新。蛋白尿的分析得益于近年来重要的方法学的进步，十分是根据分子量和所带电荷来分离蛋白质的电泳技术。当今的生物学技术主要应用电泳方法来检测游离轻链，并用免疫学技术来分析它们的特性。免疫游离轻链是肾脏损害的直接原因，最常见的是肾小管性或系统性。这一毒性的出现能够是在尿中显现沉淀，可以以在间质中沉积。在过去的几年里，有关免疫球蛋白轻链毒性因素方面的认识已有了很大的进展。电泳异常条带位于或区的病例中有三分之二的情况存在本周氏蛋白。一条或多个条带是根据尿液中单克隆免疫球蛋白存在与否进行识别，并且与典型的肾损伤或肾功能不全相关20。游离轻链经常沉

6、积在肾小管中，导致肾小管中毒。由于蛋白尿定量与肾脏损害相关，构成蛋白尿的特定蛋白性质就反映了肾单位病变所在的位置和肾功能异常的发病机理。尿中特定蛋白的分析能够以为是好像一个真正的生化活检，它可即刻提供肾单位内部的状况21。1.5肌红蛋白分析肌红蛋白异常增高常在急性心梗后患者的血液和尿液中出现，而免疫比浊法难以测定低浓度的肌红蛋白。但是，CE可在8min内快速分离尿中低浓度肌红蛋白并与血红蛋白相鉴别。1.6脂蛋白分析CE可将血浆脂蛋白分离出14个亚组分，如在分离缓冲液中参加外表活性剂，可在短时间内对2个主要组分:高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)进行定量，对LDL进一步分离为3个亚组

7、分:LDL、中密度脂蛋白(IDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)，并对各组分的比例进行推算，进而对脂蛋白异常提供不同脂肪代谢的信息。1.7糖化血红蛋白(HbA1c)分析血红细胞中的血红蛋白糖基化部分即为糖化血红蛋白(HbA1c)。HbA1c的水平与测定前数周内的血糖水平呈正线性相关，因而对糖尿病患者测定糖化血红蛋白可了解过去一段较长时间内的血糖水平。此测定并不能作为糖尿病的诊断，但可用于作为控制血糖的指标，糖化血红蛋白的量还可作为评价各种治疗措施效果的标准。应用CE进行HbA1c电泳能分离几种糖蛋白的糖基构型，可鉴别糖化血红蛋白A1、A1c和其他异构体，对糖尿病的监控具有重要意义。1.8同工酶的

8、分离应用CE技术对多种同工酶进行了成功的分离。其方法是先使用CE法分离样品构成同工酶区带后，切断电源，并参加含底物的缓冲液，酶催化底物显色，进一步构成可被检测区带，又接通电源，再次电泳，使被检测的同工酶染色区带先后通过检测器，测定最大吸收峰值即测定和分析被分离的同工酶。如检测淀粉酶P(胰)和S(唾液)型等，均可采用HPCE技术分离其同工酶。1.9免疫复合物分析CE可将免疫复合物从结合的抗原抗体中迅速分离出来，应用荧光标记单克隆抗体，经LIF-CE检测，检测限可达毫克级，可用于混合液体中低浓度的免疫复合物鉴定。1.10DN段和染色体分析CE分离DNA分子需多聚物交联剂如聚丙烯酰胺、聚乙二醇、甲基

9、纤维素等材料添加到缓冲液中作为分子筛，可对相差一个甚至几个碱基DNA高效分离。有作者22应用CE做X连锁隐性遗传病研究，成功地对DNA限制片段进行了基因多态性分析。研究表明CE可用于分析拾携带者及胎儿产前诊断。1.11在治疗药物监测中的应用CE可简便快速分析生物样品中各种有形的药物成分。在药理学研究、法医学检查及临床毒理等方面也有广泛应用23。在糖尿病的治疗监测中，可检测血中格列本脲的浓度以防止药物使用不当导致低血糖。1.12其他小分子/离子的检测CE能在34min分离血和尿样品中的血管造影剂含量、草酸盐等弱阴离子，检测尿样中十几种卟啉物质和维生素C异构体。在新生儿遗传性有机酸尿症筛查用CE可

10、检测到时多种有机酸标志物。2瞻望随着CE技术在临床检验医学方面的广泛应用，也必将带来更多的挑战，将来的CE技术在细胞和组织等复杂生物样品体系中的临床检验分析将成为主要的的发展趋势。生物样品分析必然要求进一步发展复杂样品前处理富集技术和更灵敏的检测技术。电泳方法的创新性研究主要体如今新分离形式的建立和电泳技术的联用上，例如微乳液毛细管电动色谱(MEEKC)、亲和毛细管电泳(ACE)和芯片毛细管电泳等;还有将分子信标技术与CE技术相结合进行可变长度寡聚核苷酸识别和基因检测24;探索利用CE对PC产物作DNA单链构象多态性分析筛查点突变等。近年来我国在电泳技术的临床应用上有了迅猛发展，尤其是阵列毛细管电泳仪已经问世，这将克制目前大多数商品化毛细管电泳仪只能进行单根毛细管电泳的缺陷，这种高通量的新方法将会给后基因组时代的基因分析带来革命性的变化。CE技术作为一种重要的分析手段，随着它的快速发展，必将在临床检验医学方面有着更广泛的应用前景并在各种分析分离领域发挥宏大的发展潜力。