222动物细胞融合与单克隆抗体(上课）.ppt

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1、有梦想，才会有创造！ 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、人兔、人鸡、鼠鸡、鼠兔、鸡兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌功完成了酵母菌鸡鸡 、人、人胡萝卜胡萝卜 等细胞的融合。等细胞的融合。一、动物细胞融合1.1 概念：概念： 动物细胞融合（动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。过程。 融合和形成的具有融合和形成的具有原来两个或多个细胞原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，遗传物质的单

2、核细胞，称为称为杂交细胞杂交细胞。细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？有什么特点？三种三种AAAA、ABAB、BBBB（A A、B B）含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程原理？原理？1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程 为什么灭活的病为什么灭活的病毒能作诱导剂毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性

3、保留融合活性保留融合活性1.31.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用比较项比较项目目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合的细胞融合的方法方法诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性流动性纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁后诱细胞壁后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和，获得和，获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合细胞膜的细胞膜的流动性流动性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植物细胞杂交

4、手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂种获得杂种细胞、细胞、制制备单克隆备单克隆抗体抗体1.4 1.4 比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ）A.离心离心 B.灭活的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ）A. 具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中

5、最重要的是（动物细胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA抗体：能够与抗原发生特抗体：能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的

6、特异性差、灵敏度低。低。一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞诊断疾病诊断疾病（识别作用，如同位素（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）心血管畸形等）优点：优点：单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用用于治疗疾病和运载药物（用于治疗疾病和运载药物（主要用于主要用于癌症治疗，如

7、单克隆抗体（瞄准装置）癌症治疗，如单克隆抗体（瞄准装置）+药物（弹头）药物（弹头）= “生物导弹生物导弹”）优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速位置准确、疗效高、副作用小位置准确、疗效高、副作用小 阅读教材阅读教材P54相关内容，试说明单克隆抗体有何应用？相关内容，试说明单克隆抗体有何应用？优点是什么？优点是什么？单克隆抗体单克隆抗体B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合选择选择培养培养杂交瘤杂交瘤细胞细胞克隆化克隆化培养培养抗体抗体检测检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体多

8、种杂多种杂交细胞交细胞1、该过程中用到了两种技术、该过程中用到了两种技术单克隆抗体的制备过程：单克隆抗体的制备过程：动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术2、单克隆抗体的制备过程的三个、单克隆抗体的制备过程的三个“一一”：一种一种诱导细胞融合的新方法，产生了诱导细胞融合的新方法，产生了一种一种新细胞，得到了新细胞，得到了一种一种优势优势抗体。抗体。灭活病毒诱导融合灭活病毒诱导融合杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体优势：特异性强、灵敏度高，优势：特异性强、灵敏度高，可大量制备可大量制备单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗请用箭头把

9、以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？序是？ 【例例4 4】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴淋巴细胞细胞B.B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋淋巴细胞巴细胞【例例5 5】单克隆抗体是由下列哪种

10、细胞产生的单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ）A.A. B B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 D D杂交瘤细胞杂交瘤细胞AD【例例6】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列错误错误的是的是A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴细胞与小鼠骨髓淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合瘤细胞融

11、合D D筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体提取单克隆抗体B5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是增殖的细胞是 淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞A. B.C. D. C C(1)(1)

12、若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自小鼠细胞是取自小鼠体内的体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程过程是一个是一个_过程，该过程的进过程，该过程的进行常用行常用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种种类型的类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出D D细细胞用于培养，胞用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是 ，其特点，其特点是是_。效应效应B抗原抗原细胞融合细胞

13、融合聚乙二醇聚乙二醇 灭活的病毒灭活的病毒选择性选择性 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细细胞体外培养需要注意的条件是（要求答胞体外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是，与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气体环境适宜的气体环境