2021注射氨基酸【医学论文：动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素】.doc

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1、2021注射氨基酸【医学论文：动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素】医学论文：动态比浊法定量检测复方氨基酸注射液中的细菌内毒素 材料与方法 材料与试剂 细菌内毒素检查用水(BET水)(批号030510，规格10支，厦门鲎试剂厂)；鲎试剂(动态浊度法鲎试仪专用，批号030725，规格015支，厦门鲎试剂厂)；细菌内毒素工作品(批号030610，规格10 EU支，厦门鲎试剂厂)；复方氨基酸注射液(3AA)批号200304012，200304121，200305093，200305161，200306222，规格250 瓶，湖北峰江)；BET型细菌内毒素测定仪(天津大学无线电厂)；ZH自

2、动漩涡混合器(天津药典标准仪器厂)；实验所用玻璃器皿经铬酸洗液处理后，再经250干烤1h以上，除去外源性内毒素。 方法与结果 实验条件：检测温度为37；检测波长为660；最长检测时间为8400。 细菌内毒素限值(L)的确定：按公式，为静脉注射给药的细菌内毒素阈剂量 ・，为病人每千克体重每小时最大给药剂量。本文采用家兔热原剂量M・・，则复方氨基酸注射液(3AA)细菌内毒素限值(L)为05U・。 标准曲线制备及可靠性：取细菌内毒素工作品1支加BET水10，用封口膜封口，置漩涡混合器上混合15，进行10倍稀释，然后2倍稀释，且各步置漩涡混合器上

3、混合30，使其最终内毒素浓度为10， ・稀释系列，各取015分别加到预先加有015鲎试剂的反应管内，混合均匀，插入浊度仪进行检测。每一浓度平行3管，同时用BET水做2管阴性对照(NC)，结果见表1。表1 标准曲线的可靠性内毒素浓度（略） 供试品溶液配制及干扰试验：供试品最大有效稀释倍数(MVD)计算：按公式，为复方氨基酸注射液(3AA)的内毒素限值05 EU・，为标准曲线最低浓度00156 EU・，为供试液浓度。当L以EU・表示时，C为10 ml・mL-1得样品试验时最大有效稀释倍数(MVD)为32倍。干扰预试验：将3批复方

4、氨基酸注射液(3AA)用BET水稀释为2、4、6、8倍溶液，每个浓度分别取015加015鲎试剂作为样品检查(E）；同时另取5管，进行同样倍数稀释，并在各浓度溶液中强化0125 ・的内毒素作为样品阳性对照液(Es)，分别取上述各液015l加入预先加有015l鲎试剂的反应管内进行检测，每个浓度重复3管，并设阴性对照，分别测定各浓度样品液及阳性样品的内毒素含量Et和Es，按下式计算回收率(R)。R=(Est)，结果见表2。表2 供试品干扰预实验样品批号稀释倍数Et(略） 根据中国药典2000年版规定，如果内毒素的回收率在50之间时，则供试品在该试验条件下不存在干扰因素。表2结果表明，3

5、批供试品在各倍稀释时均无干扰作用，4倍时回收率较好，可作为定量检测的浓度。 5 供试品干扰试验与家兔法检查：取5批复方氨基酸注射液用BET水稀释4倍，并制备样品阳性对照，每个浓度重复3管，并做阴性对照，放入检测仪检测，同时进行家兔法检查，结果阴性对照阴性，其他数据见表3。表3 干扰试验样品批号稀释倍数Et(略） 2 讨论实验结果表明，各倍稀释液对鲎试剂不存在干扰作用，4倍可以得到很好的回收率，且动态浊度法进行细菌内毒素定量检测，使用计算机全过程监控，样品反映情况能在显示屏上直观地反映出来，与传统的家兔法相比，避免了动物个体差异及人为判断误差所造成的假阳性或假阴性结果，具有灵敏、简便、结果准确等优点，其检测结果与家兔热原检查结果一致。因此，用动态浊度法检测复方氨基酸注射液(3AA)中细菌内毒素含量是可行的。 参 考 文 献 夏振民药品细菌内毒素检查的限值药物分析杂志，（）： 中国药典二部（附录）. 204 第 4 页 共 4 页