食品中合成着色剂的测定方法︱食品中合成着色剂的检测分析方法.doc

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1、食品中合成着色剂的测定方法食品中合成着色剂的测定方法食品中合食品中合 成着色剂的检测分析方法成着色剂的检测分析方法1 1、主题内容与适用范围、主题内容与适用范围本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。本标准适用于食品中合成着色剂的测定。第一篇第一篇 高效液相色谱法高效液相色谱法( (第一法第一法) )2 2、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 原理原理食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。最小检出量，新红 5ng、柠檬黄 4ng、苋菜红 6ng、胭脂红 8ng、日落黄 7ng、赤藓红

2、 18ng、亮蓝 26ng，当进样量相当 0.025g 时最低检出浓度分别为0.2mg/k；0.16mg/kg；0.24mg/kg；0.32mg/kg；0.28mg/k；0.72mg/k；1.04mg/k。3 3、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 试剂试剂3.1 正己烷。3.2 盐酸。3.3 乙酸。3.4 甲醇：经滤膜(0.5?m)过滤。3.5 聚酰胺粉(尼龙 6)：过 200 目筛。3.6 乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取 1.54g 乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45?m)过滤。3.7 氨水：量取氨水 2mL，加水至 100mL，混匀。3.8 氨水乙酸铵溶

3、液(0.02mol/L)：量取氨水 0.5mL，加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至 1000mL，混习。3.9 甲醇甲酸(64)溶液：量取甲醇 60mL，甲酸 40mL，混匀。3.10 柠檬酸溶液：称取 20g 柠檬酸(C6H8O7H2O)，加水至 100mL，溶解混匀。3.11 无水乙醇氨水水(721)溶液：量取无水乙醇 70mL、氨水 20mL、水 10mL，混匀。3.12 三正辛胺正丁醇溶液(5%)：量取三正辛胺 5mL，加正丁醇至100mL，混匀。3.13 饱和硫酸钠溶液。3.14 硫酸钠溶液(2g/L)。3.15 pH6 的水：水加柠檬酸溶液调 pH 值到 6。3.16 合成着色剂

4、标准溶液：准确称取按其纯度折算为 100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置 100mL 容量瓶中，加 pH6 水到刻度。配成水溶液(1.00mg/mL)。317 合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液（或将 316）加水稀释 20 倍，经滤膜（045?m）过滤。配成每毫升相当 500?g的合成着色剂。4 4、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 仪器仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm 波长。5 5、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 分析步骤分析步骤5.1 样品处理5.1.1 桔子汁、果味水、果于露汽水等：称取 2004

5、00g，放入 100mL 烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。5.1.2 配制酒类：称取 200400g，放 100mL 烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。5.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取：5001000 小粉碎样品，放入 100mL 小烧杯中，加水 30mL，温热溶解，若样品溶液 pH值较高，用柠檬酸溶液调 pH 值到 6 左右。5.1.4 巧克力豆及着色糖衣制品：称取 5001000g，放入100mL 小烧杯中，用水反复洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。5.2 色素提取5.2.1 聚酞胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调 pH 值到 6，加热至60，将

6、 1g 聚酞胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以 G3 垂融漏斗抽滤，用 60pH=4 的水洗涤 35 次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤 35 次（含赤薛红的样品用 522 法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸 35 次，每次5mL 收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至 5mL经滤膜（045?m）过滤，取 10?L 进高效液相色谱仪。 5.2.2 液-液分配法（适用于含赤蹿红的样品）：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加 2mL 盐酸、三正辛胺正丁醇溶液（5）1020mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，至到有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶

7、液洗 2 次，每次 10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至 10mL，转移至分液漏斗中，加 60mL 正己烷，混匀，加氨水提取 23 次，每次 5mL 合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用正己烷洗 2 次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至 5mL 经滤膜（045?m）过滤，取 10?L 进高效液相色谱仪。5.3 高效液相色谱参考条件5.3.1 柱：YWG-Cl8 10?m 不锈钢柱 46mm（id）250mm。5.3.2 流动相：甲醇-002 molL 乙酸铰溶液（pH=4）。5.3.3 梯度洗脱：甲醇：2035，3min；3598，9min；98继续 6min

8、。5.3.4 流速：lmLmin。5.3.5 紫外检测器，254nm 波长。5.4 测定取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。5.5 计算式中：X1样品中着色剂的含量，g/kg；m1样液中着色剂的质量，?g；V2进样体积，mL；V1样品稀释总体积，mL；m2样品质量，g。结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。5.6 允许差相对相差10%。5.7 其他第二篇第二篇 薄层色谱法薄层色谱法( (第二法第二法) )6 6、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 原理原理水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，

9、再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。最低检出量为 50?g，点样量为 1g，样品最低检出浓度约为 50mg/kg。7 7、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 试剂试剂7.1 石油醚：沸程 6090。7.2 甲醇。7.3 聚酰胺粉(尼龙 6)：200 目。7.4 硅胶 G。7.5 硫酸：(110)。7.6 甲醇甲酸溶液：(64)。7.7 氢氧化钠溶液(50g/L)。7.8 海沙：先用盐酸(110)煮沸 15min，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液(50g/L)煮沸 15min，用水洗至中性，再于 105干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。7.9 乙醇(50%)。7.10

10、 乙醇氨溶液：取 1mL 氨水，加乙醇(70%)至 100mL。7.11 pH6 的水：用柠檬酸溶液(20%)调节至 pH6。7.12 盐酸(110)。7.13 柠檬酸溶液(200g/L)。7.14 钨酸钠溶液(100g/L)。7.15 碎瓷片：处理方法同 7.8。7.16 展开剂7.16.1 正丁醇无水乙醇氨水(1%)(623)：供纸色谱用。7.16.2 正丁醇吡啶氨水(1%)(634)：供纸色谱用。7.16.3 甲乙酮丙酮水(733)：供纸色谱用。7.16.4 甲醇乙二胺氨水(1032)：供薄层色谱用。7.16.5 甲醇氨水乙醇(5110)：供薄层色谱用。7.16.6 柠檬酸钠溶液(25g

11、/L)氨水乙醇(812)：供薄层色谱用。7.17 合成着色剂标准溶液：按 3.16 方法，分别配制着色剂的标准溶液浓度为每毫升相当于 1.0mg。7.18 着色剂标准使用液：临用时吸取色素标准溶液各 5.0mL，分别置于 50mL 容量瓶中，加 pH6 的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.10mg 着色剂。8 8、食品中合成着色剂的测定食品中合成着色剂的测定 仪器仪器8.1 可见分光光度计。8.2 微量注射器或血色素吸管。8.3 展开槽，25cm6cm4cm。8.4 层析缸。8.5 滤纸：中速滤纸，纸色谱用。8.6 薄层板：5cm20cm。8.7 电吹风机。8.8 水泵。9 9、食品中合成着

12、色剂的测定食品中合成着色剂的测定 分析步骤分析步骤9.1 样品处理9.1.1 果味水、果子露、汽水：称取 50.0g 样品于 100mL 烧杯中。汽水需加热驱除二氧化碳。9.1.2 配制酒：称取 100.0g 样品于 100mL 烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。9.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖：称取 5.00 或 10.0g 粉碎的样品，加 30mL 水，温热溶解，若样液 pH 值较高，用柠檬酸溶液(200g/L)调至 pH4 左右。9.1.4.1 奶糖：称取 10.0g 粉碎均匀的样品，加 30mL 乙醇氨溶液溶解，置水浴上浓缩至约 20mL，立即用硫酸溶液(110)调至微酸性再加 1

13、.0mL 硫酸(110)，加 1mL 钨酸钠溶液(100g/L)，使蛋白质沉淀、过滤，用少量水洗涤，收集滤液。9.1.4.2 蛋糕类：称取 10.0g 粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干用品(用手摸已干燥即可以)，加入 30mL 石油醚搅拌。放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以除去脂肪，吹干后研细，全部倒入 G3 垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇氨溶液提取色素，直至着色剂全部提完，以下按 9.1.4.1 自“置水浴上浓缩至约20mL”起依法操作。9.2 吸附分离将处理后所得的溶液加热至 70，加入 0.51.0g 聚酰胺粉充分搅拌，用柠檬酸溶液(200g/L)调 pH 至 4，使着

14、色剂完全被吸附，如溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附着色剂的聚酰胺全部转入 G3 垂融漏斗中过滤(如用 G3 垂融漏斗过滤可以用水泵慢慢地抽滤)。用 pH4 的 70水反复洗涤，每次 20mL，边洗边搅拌。若含有天然着色剂，再用甲醇甲酸溶液洗涤 13 次，每次 20mL，至洗液无色为止。再用 70水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇氨溶液分次解吸全部着色剂，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至50mL，用分光光度法进行测定。如果为多种着色剂混合液，则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定，即将上述溶液置水浴上浓缩至2mL 后移入 5mL 容量

15、瓶中，用乙醇(50%)洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。9.3 定性9.3.1 纸色谱取色谱用纸，在距底边 2cm 的起始线上分别点 310?L 样品溶液、12?L 着色剂标准溶液，挂于分别盛有 7.16.1、7.16.2 的展开剂的层析缸中，用上行法展开，待溶剂前沿展至 15cm 处，将滤纸取出于空气中晾干，与标准斑比较定性。也可取 0.5mL 样液，在起始线上从左到右点成条状，纸的左边点着色剂标准溶液，依法展开，晾干后先定性后再供定量用。靛蓝在碱性条件下易褪色，可用 7.16.3 展开剂。9.3.2 薄层色谱9.3.2.1 薄层板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉、0.4g 可溶性淀粉及

16、 2g 硅胶 G，置于合适的研钵中，加 15mL 水研匀后，立即置涂布器中铺成厚度为 0.3mm 的板。在室温晾干后，于 80干燥 1h，置干燥器中备用。9.3.2.2 点样离板底边 2cm 处将 0.5mL 样液从左到右点成与底边平行的条状，板的左边点 2?L 色素标准溶液。9.3.2.3 展开苋菜红与胭脂红用 7.16.4 展开剂，靛蓝与亮蓝用 7.16.5 展开剂，柠檬黄与其他着色剂用 7.16.6 展开剂。取适量展开剂倒入展开槽中，将薄层板放入展开，待着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑比较，如 Rf值相同即为同一色素。9.4 定量9.4.1 样品测定将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水

17、洗涤数次，洗液移入 10mL 比色管中，并加水稀释至刻度，作比色测定用。将薄层色谱的条状色斑包括有扩散的部分，分别用刮刀刮下，移入漏斗中，用乙醇氨溶液解吸着色剂，少量反复多次至解吸液于蒸发皿中，于水浴上挥去氨，移入 10mL 比色管中，加水至刻度，作比色用。9.4.2 标准曲线制备分别吸取 0、0.50、1.0、2.0、3.0、4.0mL 胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄色素标准使用溶液，或 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL亮蓝、靛蓝色素标准使用溶液，分别置于 10mL 比色管中，各加水稀释至刻度。上述样品与标准管分别用 1cm 比色杯，以零管调节零点，于一定波长下(胭脂红 510

18、nm，苋菜红 520nm，柠檬黄 430nm，日落黄 482nm，亮蓝 627nm，靛蓝 620nm)，测定吸光度，分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。9.5 计算式中：X2样品中着色剂的含量，g/kg；m3测定用样液中色素的质量，mg；m4样品质量(体积)，g(mL)；V3样品解吸后总体积，mL；V4样液点板(纸)体积，mL。结果的表述：报告算术平均值的二位有效数。附加说明：附加说明：GB/T 5009.35-1996（国家标准） 本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由天津市食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、宁夏回族自治区卫生防疫站、西安市卫生防疫站负责起草，第二法由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。 相关食品分析相关食品分析：食品分析食品添加剂分析食品中脂肪酸分析食品包装材料分析香精香料分析白酒香精成分分析酒分析农药残留分析三聚氰胺分析相关食品检测相关食品检测：食品中山梨酸苯甲酸的测定食品中合成着色剂的食品中合成着色剂的测定测定食品中糖精钠的测定食品中环乙基氨基磺酸钠的测定(1.4气相 , 2.3 液相)