空气消毒效果鉴定试验.docx

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1、 空气消毒效果鉴定试验空气消毒效果鉴定试验2.1.3.1 目的检测消毒器械或消毒剂对空气中细菌的杀灭和(或)清除作用，以验证其对 空气的消毒效果。其他方法对空气的消毒效果，亦可参照本试验的有关原则进 行。2.1.3.2 试验设备和器材(1) 试验菌为白色葡萄球菌 8032，其菌悬液的制备方法见 2.1.1.2。(2) 采样液用于液体撞击式采样器采样。非化学因子杀菌试验时，用含抗泡沫 剂（辛醇或橄榄油）的营养肉汤培养基；消毒剂杀菌试验时，用含相应中和剂 的营养肉汤培养基（同样加入辛醇或橄榄油）。(3) 中和剂( 按 2.1.1.5 方法鉴定合格者)。(4) 磷酸盐缓冲液( PBS，0.03 mo

2、l/L，pH 7.2 )。(5) 普通营养肉汤培养基。(6) 普通营养琼脂培养基。消毒剂杀菌试验时，尚需在其中加入相应的中和剂。(7) 相邻的一对气雾柜或气雾室，一个用于消毒试验，一个用于试验对照。一 对气雾柜或气雾室所处环境(包括温度、湿度、光照、密闭性、和通风条件等) 应一致。柜(或室)宜以铝合金和玻璃构建。应安装温度和湿度调节装置以及通 风机过滤除菌或其它消毒装置和相应管道，此外，还应开设供喷雾染菌、给消 毒剂、采样等的袖套操作和样本传递等窗口。(8) 喷雾染菌装置，包括空气压缩机、压力表、气体流量计和气溶胶喷雾器等。 喷出细菌气溶胶微粒的直径 90% 以上应在 1m10m 之间。(9)

3、 空气微生物采样装置，包括六级筛孔空气撞击式采样器、液体撞击式采样 器、抽气设备、气体流量计等。(10) 环境监测器材，如温度计、湿度计等。2.1.3.3 试验阶段空气消毒试验分为实验室试验、模拟现场试验与现场试验。三个阶段试验的特 点见表 2-5。2.1.3.4 实验室试验与模拟现场试验操作程序(1) 取试验菌菌悬液，用无菌脱脂棉过滤后，再用营养肉汤培养基稀释成所需 浓度。(2) 同时调节两个气雾柜(或室)的温度、相对湿度至试验要求的温度和相对湿 度。(3) 将使用的器材一次放入气雾柜(或室)内，将门关闭。此后，一切操作和仪 器设备的操纵均在柜(或室)外通过带有密封袖套的窗口或摇控器进行。直

4、至试 验结束，始可将门打开。(4) 按设定的压力、气体流量及喷雾时间喷雾染菌。边喷雾染菌，边用风扇搅 拌。喷雾染菌完毕，继续搅拌 5 min，而后静置 5 min。（5）同时对对照组和试验组气雾柜(或室)分别进行消毒前采样，作为对照组试 验开始前和试验组消毒处理前的阳性对照(即污染菌量)。气雾柜(或室)内空气 中各阳性对照菌数应达 5104 cfu/m35106 cfu/m3 。表 2-5 各阶段空气消毒试验的特点项 目 实验室试验 模拟现场试验 现场试验 目 的 测定最低有效剂量 测定最低有效剂量 验证 实用消毒效果试验柜(室) 1m3柜 10m320m3室20m3房间采样器 液体撞击式 六

5、级筛孔空气撞击式 六级筛孔空气撞击式菌 株 白色葡萄球菌 白色葡萄球菌 空气中自然菌试验菌雾粒 10m 10m 不 定温 度 2025 2025 自然条件相对湿度 50%70% 50%70% 自 然条件中和剂 加于采样液中 加于采样培养基中 加于采样培养基中对 照 需有自然消亡对照 需有自然消亡对照 不需自然消亡对照结果计算 杀灭率 杀灭率 消 亡率 在模拟现场试验时，用六级筛孔空气撞击式采样器采样，采样时，将六级筛孔 空气撞击式采样器放在柜室中央 1m 高处(采样方法按采样器使用说明书进行)。 在实验室试验时，用液体撞击式采样器采样，采样器置柜内中央处。(6) 按产品说明书规定的方法，在试验

6、组气雾柜(或室)内进行消毒。对照 组气雾柜室同时作相应(不含消毒剂)处理。(7) 作用至规定时间，对试验组和对照气雾柜(或室)按前述方法同时进行 采样。继续作用至第二个预定消毒时间，再次按前述方法进行采样。如此按作 用时间分段采样，直至规定的最终作用时间为止。(8) 在实验室试验阶段，用液体撞击式采样器采集的样本，按 2.1.1.3 所 示方法进行活菌培养计数，在 37 培养箱内培养 48h，观察最后结果。(9) 在模拟现场试验阶段，用六级筛孔空气撞击式采样器采样时， 采样平 板直接放入 37 培养箱中培养 48 h，观察最后结果，计数生长菌落数。(10) 全程试验完毕，对气雾柜（室）表面和空

7、气中残留的细菌做最终消毒 后，打开通风机，过滤除菌排风，排除柜(或室)内滞留的污染空气，为下一次 试验作好准备。(11) 在完成试验组与阳性对照组采样和样本接种后，应将未用的同批培养 基、采样液和 PBS 等(各取 1 份2 份)，与上述两组样本同时进行培养或接种 后培养，作为阴性对照。若阴性对照组有菌生长，说明所用培养基或试剂有污 染，试验无效，更换无菌器材重新进行。(12) 同一条件试验重复 3 次，每次均分别计算其杀灭率。3 次结果的杀灭 率均 99.90% 时，可判为消毒合格。杀灭率的计算方法如下:Nt:空气中细菌的自然消亡率; V0 与 Vt:分别为对照组试验开始前和试验过程中不同时

8、间的空气含菌量;Kt:消毒处理对空气中细菌的杀灭率;V0与 Vt:分别为试验组消毒处理前、和消毒过程中不同时间的空气含菌量。消毒前后空气中的含菌量按下列公式计算： 举例:用某消毒剂对气雾柜内空气消毒 10 min，试验组消毒前空气含菌量为 100 000 cfu/m3，消毒后为 50 cfu/m3; 对照组处理前空气含菌量为 90 000 cfu/m3，处理后为 50 000 cfu/m3。该消毒剂作用 10 min 对空气中微生物的 杀灭率按下法计算: 细菌在空气中 10 min 的自然消亡率为： 对空气中微生物的杀灭率为: 该次试验，消毒剂作用 10min，可将空气中细菌杀灭 99.91%

9、。2.1.3.5 现场试验(1) 根据使用时的实际情况， 选择有代表性的房间并在室内无人情况下进 行消毒效果观察。观察时，在消毒处理前用六级筛孔空气撞击式采样器进行空 气中自然菌采样，作为消毒前样本 (阳性对照)。消毒处理后，再作一次采样， 作为消毒后的试验样本。(2) 采样时，采样器置室内中央 1.0m 高处。房间大于 10m2 者，每增加 10m2 增设一个采样点。(3) 因现场试验环境条件变化较多，难以统一，无法测定准确的自然沉降 率，故只按所得消亡率(自然衰亡和消毒处理中杀菌的综合效果)做出验证结论。 消亡率的计算按下式进行:举例:一无人手术室，消毒前采样，空气中的平均含菌量为 500

10、0 cfu/m3。用 某消毒剂喷雾对室内空气消毒 30 min 后采样，含菌量减至 50cfu/m3。该消毒 剂处理 30 min 后，室内空气中自然菌的消亡率可按下法计算:该消毒剂作用 30 min，可使房间内空气中自然菌的消亡率达 99.00%。(4) 试验采样完成后，应将未用的同批培养基，与上述试验样本同时进行 培养或接种后培养，作为阴性对照。阴性对照组若有菌生长，说明所用培养基 有污染，试验无效，更换后重新进行。(5) 试验重复 3 次或以上。计算出每次的消亡率。除有特殊要求者外，对 无人室内进行的空气消毒，每次的自然菌消亡率均90% 者为合格。2.1.3.6 注意事项(1) 试验中，

11、因控制统一的条件较难，故每次均需同时设置试验组与对照 组。两组条件尽量保持一致。消毒前、后及不同次数间的环境条件亦应尽量保 持一致。(2) 注意记录试验过程中的温度和相对湿度，以便分析对比。(3) 所采样本应尽快进行微生物检验，以免影响结果的准确性。(4) 每次试验完毕，气雾柜、气雾室应充分通风。必要时消毒冲洗，间隔 4 h 后始可做第二次试验。(5) 试验时，气雾柜(室)必须保持密闭，设有空气过滤装置，以防染菌空 气外逸，污染环境。(6) 试验时，气雾柜、气雾室或现场房间应防止日光直射，以免造成杀菌 作用不稳定。(7) 气雾柜排风过滤装置中的滤材应定期更换，换下的滤材应经灭菌后再 作其他处理。(8) 在气雾柜或密闭房间内进行消毒剂喷雾消毒时，用悬挂染菌样片法观察的 消毒效果， 不能代表对空气的消毒效果。