各种因素对消毒剂杀菌作用影响的测定.docx

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1、各种因素对消毒剂杀菌作用影响的测定2.1.1.12.1 目 的了解有机物、温度和 pH 对消毒剂杀菌作用的影响规律，为制定消毒剂的实用剂量提供参考。2.1.1.12.2 试验器材（1）菌片与菌悬液（按 2.1.1.2 要求和方法制备）。（2）恒温水浴箱。（3）冷水浴装置（可放入试管架的容器，以冰水调节水温）（4）温度计。（5）pH 计。（6）有机物，根据消毒剂的使用对象选择，如酵母粉、血清、蛋白胨。（7）中和剂（经中和剂试验鉴定合格）。（8）盐酸（用无菌蒸馏水配制）。（9）氢氧化钠（用无菌蒸馏水配制）。2.1.1.12.3 试验微生物的选择 根据所测消毒剂鉴定需要决定。一般情况下，除需用于特定

2、微生物者外，对细菌繁殖体应选择大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，作为革兰阳性与阴性细菌的代表即可；用作灭菌剂，可使用枯草杆菌黑色变种芽孢。2.1.1.12.4 消毒液浓度和作用时间的设定各种因素影响的测定，均用杀灭相应微生物试验所得最低有效浓度，和 3 个4 个作用时间进行杀灭试验。在 3 个4 个作用时间中，以该最低有效浓度所需的最短有效时间为第 1 时间（T），其后的第 2 时间为第 1 时间的一倍（2T）。依此，第 3 时间为 3T，第 4 时间为 4T。试验结果应根据需要测出杀灭对数值达 5.00（消毒用）的最低有效剂量。必要时，可根据需要调整消毒剂浓度或作用时间，若第 1 时间较长（ 30m

3、in），可根据情况适当缩短作用时间的组距。对第 1 时间较短者（5min），可根据情况适当延长作用时间的组距。2.1.1.12.5 有机物对杀灭微生物效果影响的测定（1）如以小牛血清为有机物代表，应设置无小牛血清对照组；含25% 小牛血清组；含 50% 小牛血清组等 3 组。各组所用消毒液浓度和作用时间，见 2.1.1.12.4。（2）以稀释液配制的微生物悬液与无菌小牛血清，按 1：1 与3：1 比例混合，分别配成含 50%与 25%小牛血清的微生物悬液。此含小牛血清的微生物悬液，可用于悬液定量杀菌试验，亦可滴染菌片进行载体定量试验。（3）试验中根据需要，选择悬液定量杀灭试验或载体浸泡定量杀灭

4、试验之一进行测定即可。具体试验程序根据微生物种类可参见2.1.1.7。（4）其它有机物按此设计类推。各组试验应重复 3 次，按相应微生物杀灭试验计算杀灭对数值。2.1.1.12.6 温度对杀灭微生物效果影响的测定（1）设置 101、201、301等，以 10为间隔。各组所用消毒液浓度和作用时间，见 2.1.1.12.4。（2）对要求试验温度高于室温者，用恒温水浴箱（电热）调节；低于室温者用冷水浴装置（加适量冰水）调节。当上述温度调节装置到达要求温度后，放入装有试验样液的试管，同时放入一含与试验样液等量蒸馏水并插有温度计的试管。待试管内温度计指示到达试验所需温度时，开始随后的试验。（3）根据需要

5、，选择悬液定量杀灭试验或载体浸泡定量杀灭试验之一进行测定即可。具体试验程序根据微生物种类可分别参见2.1.1.7。（4）试验重复 3 次，按相应微生物杀灭试验计算杀灭对数值。2.1.1.12.7 pH 对杀灭微生物效果影响的测定（1）本项试验根据所测消毒剂使用溶液的 pH 值，分为以下 3 组进行：第 1 组 pH 值 x - 2第 2 组 pH 值 x第 3 组 pH 值 x + 2例如，所测消毒剂使用溶液的 pH 值为 7.8，则 3 组的 pH 值应为：第 1 组 5.8，第 2 组 7.8，第 3 组 9.8。各 pH 组所用消毒液浓度和作用时间，见 2.1.1.12.4。（2）对消毒

6、液 pH 的调节，先用 pH 计测定原消毒剂的 pH，在偏酸时慢慢滴加氢氧化钠溶液，偏碱时慢慢滴加盐酸溶液以调整。随时用 pH 计测定消毒液的 pH。当达到所要求的 pH 后，停止调整，进行随后的试验。必要时，在 pH 调整后可测定有效成分含量以观察是否受到 pH 变化的影响。（3）根据需要，选择悬液定量杀灭试验或载体浸泡定量杀灭试验之一进行测定即可。具体试验程序见 2.1.1.7。（4）试验重复 3 次，按相应微生物杀灭试验计算杀灭对数值。2.1.1.12.8 评价规定评价时，有机物影响试验应以不含外加有机物组（直接用稀释液配制微生物）的结果为对照；温度影响试验应以 201 组的结果为对照；

7、pH 影响试验应以消毒剂使用溶液 pH 组的结果为对照。（1）该组第 1 个4 个作用时间的试验，对所试微生物杀灭效果均合格，判为该组所试因素无影响。（2）该组第 2 个4 个作用时间的试验，对所试微生物杀灭效果合格，判为该组所试因素有轻度影响。（3）该组第 3 个4 个作用时间的试验，对所试微生物杀灭效果合格，判为该组所试因素有中度影响。（4）该组只第 4 个作用时间的试验， 对所试微生物杀灭效果合格，判为该组所试因素有重度影响。（5）全部试验对所试微生物杀灭效果均不合格，判为本试验所试因素有严重影响。为取得消毒或灭菌的有效剂量，需增加消毒液浓度或作用时间，重新进行试验。2.1.1.12.9 注意事项（1）本试验目的是为制定消毒剂实用剂量提供必要的参考数据，系统研究各种因素对消毒剂杀灭微生物效果的影响，尚需作更多系统的观察。（2）为加强各组结果的可比性和可重复性，非观察因素应保持稳定不变。例如，在观察有机物的影响时，除有机物浓度根据需要改变外，其他如温度和 pH 等因素均应先后一致。