人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）试剂盒使用建议.doc

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1、人巨噬细胞炎症蛋白人巨噬细胞炎症蛋白2（MIP-2）试剂盒使用建议）试剂盒使用建议本试剂盒仅供研究使用。检测范围：检测范围： 96T15pg/ml-400pg/ml 使用目的：使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2）含量。实验原理实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2）水平。用纯化 的人巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中 依次加入巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2） ，再与 HRP 标记的巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2） 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复

2、合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值） ， 通过标准曲线计算样品中人巨噬细胞炎症蛋白 2（MIP-2）浓度。 试剂盒组成试剂盒组成 130 倍浓缩洗涤液20ml1 瓶7终止液6ml1 瓶 2酶标试剂6ml1 瓶8标准品（800pg/ml）0.5ml1 瓶 3酶标包被板12 孔8 条9标准品稀释液1.5ml1 瓶 4样品稀释液6ml1 瓶10说明书1 份5显色剂 A 液6ml1 瓶11封板膜2 张 6显

3、色剂 B 液6ml1/瓶12密封袋1 个标本要求标本要求 1 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马 上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融 2 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行 稀释。400pg/ml5 号标准品150l 的原倍标准品加入 150l 标准品稀释液200pg/ml4 号标准品150l 的 5 号标准品加入 150l 标准品稀释液100pg/ml3 号标准品150l 的 4 号标准品加入

4、 150l 标准品稀释液50pg/ml2 号标准品150l 的 3 号标准品加入 150l 标准品稀释液25pg/ml1 号标准品150l 的 2 号标准品加入 150l 标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50l，待测样品孔中先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l（样品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底 部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5.洗涤：小心

5、揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7.温育：操作同 3。 8.洗涤：操作同 5。 9.显色：每孔先加入显色剂 A50l，再加入显色剂 B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终 止液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结：操作程序总结：计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样

6、品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出 标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定， 计算时请最后乘以总稀释倍数（n5） 。 5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6底物请避光保存。 7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期保存条件及有效期 1试剂盒保存：；2-8。 2有效期：6 个月