临床微生物.doc

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1、 微生物学名词解释微生物（microorganism）是存在于自然界中的一大群形体微小、结构简单、肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电镜放大数百倍至数万倍才能观察到的微小生物。 医学微生物学（medical microbiology）：主要是研究与医学有关的病原微生物学的生物学特性、致病性与免疫性、以及特异性诊断与防治措施的一门学科，其目的是控制和消灭感染性疾病和与之有关的免疫性损伤等疾病，从而达到保障和提高人类健康水平。正常菌群（normal flora）是指寄居于正常人体内的一系列细菌。条件致病微生物(conditionalmicroorganism）：是指机体免疫力下降、寄居部位改变和微生

2、态失调时影响人类健康的微生物。病原微生物（pathogenic microorganism）：少数能引起人与动植物致病的微生物，影响人类健康，是医学微生物研究的主要对象。临床微生物学（clinical microbiology）：属医学微生物学的范畴，与临床医学密切结合，因侧重研究感染性疾病快速、准确诊断病原体的策略与方法，为临床诊断提供依据，故又名诊断微生物学（diagnostic microbiology）。临床微生物学是从事检出微生物和研究微生物与宿主相互作用的一门医学应用学科。任务：1. 研究感染性疾病的病原体特征：不仅对传统的病原体进行研究，而且要重视对新出现病原体的研究2. 为临床

3、提供快速、准确的病原学诊断3. 指导临床医师合理使用抗生素4. 对医院感染进行监控地位：临床微生物学是临床检验诊断学（clinical laboratory diagnosis）的一门重要亚专业课程。微生物分类：原核细胞型微生物：细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体和螺旋体。真核细胞型微生物：真菌.非细胞型微生物：病毒、亚病毒、朊粒.简述对临床感染性疾病的实验室诊断的要求。 （一）明确诊断的对象和诊断的要求1. 以疾病病原学诊断为目的：一般只需鉴定到种。2. 为提供治疗方案为目的：可进行临床标本的直接药敏试验，尽早电话报告药敏结果，并做进一步药敏试验，以期最终报告。3. 以作流行病学调查为目

4、的：往往要鉴定到型（血清型或基因型），并追踪传染源。4. 以了解细菌与感染的关系为目的：要了解细菌的致病性（毒力和侵袭力），必须对细菌进行详尽的鉴定。（二）对诊断试验的选择1. 选择有价值的鉴定试验：阳性率90%，阴性率10%2. 选择简易、快速、方便的试验：可简化操作，节省人力物力。3. 综合考虑试验的敏感性和特异性：试验 的敏感性和特异性成反比关系。(三) 选择常用诊断流程1.双歧索引2.表解法3.数字编码鉴定法简述对临床感染性标本采集与处理的一般原则。(一) 标本采集的一般原则1.早期采集：使用抗菌药物前、病程早期、急性期或症状典型时。2.无菌采集：局部皮肤消毒，采集标本时严格注意无菌操

5、作，空针和容器应事先严格物理灭菌。3.根据检验目的菌的特性采用不同的方法采集：如厌氧菌、需氧或兼性厌氧菌、L型细菌的采集则不同。4.采集适量标本：注意采集标本的部位和采集量。5.安全采集：防止正常菌群污染，防止传播和自身感染。(二) 标本的处理 要根据标本中细菌的特点及时处理、送检和保存标本。简述细菌形态学检查的方法和其临床意义。细菌形态学检查法可分为：不染色标本与染色标本检查法不染色标本法：悬滴法和压滴法 染色标本法：革兰染色、 抗酸染色、荧光染色、特殊染色、其他（拉丝试验）意义: 1.可以快速了解标本中有无细菌及大致菌量2.有助于对病原菌的初步认识和分类3.为进一步鉴定提供依据4.对一些形

6、态特殊的细菌可得出初步诊断，对临床早期诊治有一定的参考价值。如结核杆菌、脑膜炎双球菌、白喉棒状杆菌简述细菌染料的概念、分类与细菌染色标本的制作程序。分类： 碱性染料：电离后显色离子带正电荷，易于与带负电荷的被染物结合。由于细菌的等电点在pI 25之间，故细菌在碱性、中性、弱酸性的环境中均带负电荷，易于与带正电荷的染料结合而着色，故在细菌学上多用碱性染料。如碱性复红、结晶紫、美兰等。 酸性染料：电离后显色离子带负电荷，易于与带正电荷的被染物结合而着色。很少用于细菌染色，必要时可降低细菌悬液的pH，使细菌带正电荷，方能使细菌着色。常用的染料有伊红、刚果红等。一般用于细胞浆染色。 复合染料(中性染料

7、)：是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料(伊红美兰)、姬姆萨染料(伊红天青)等；常用于特殊染色技术. 荧光染料；如异硫氢酸荧光素、罗丹明等,常用于免疫学技术.制作程序：涂片干燥固定简述细菌在不同培养基中的生长情况及实际细菌有哪些分离培养与接种技术？生长情况：在平板上呈菌落(colony)生长，常用于细菌分离纯培养在斜面上呈菌苔或菌落生长，可用于增菌或保存菌种。半固体中呈迁徙生长(有动力)。可用于观察动力和保种。在液体中呈表面生长，均匀混浊生长和沉淀生长。可用于增菌和鉴别细菌。细菌的接种与分离技术1. 平板划线分离接种法:连续划线分区划线2. 斜面接种法 连续蜿蜒划线，从斜面底部至斜面顶端3

8、. 液体接种法 在试管内壁与液面交接处管壁上研磨，使细菌混于液体中。4. 半固体接种法 穿刺接种法5. 倾注平板法 取一定量的稀释标本加入无菌平皿，再加入冷至45左右的定量培养基，混匀，待凝后倒置培养。6. 涂布法 把稀释定量被检菌液均匀涂布于琼脂平板表面。7. 定量接种环法 把定量接种环沾取菌液均匀涂布于琼脂平板表面。什么叫培养基?按用途与理化性状可分为哪几类?它们的基本成份有哪些?培养基(culture medium):是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。分类物理性状：液体培养基：牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨+0.5%NaCl pH7.4) 半固体培养基：液体培

9、养基+0.20.5% agar固体培养基：液体营养物+ 2% agar用途：基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉汤、 普通琼脂平板、斜面、高层营养培养基：BAP、罗琴培养基、吕氏血清斜面选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等培养基的组成成分：营养物质：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、无机盐、鸡蛋、动物血清、生长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。凝固物质：最常用的为琼脂(agar)抑菌剂和指示剂简述细菌合成代谢产物检测的内容、原理、方法、结果和临床价值。内容：内毒素、外毒素1. 细菌内毒素的检

10、测细菌内毒素的致热作用 原理：细菌内毒素(外源性致热原) 血WBC 释放出内源性致热原体温调节中枢机体发热。 方法：取待测菌或被检物注入一组家兔耳静脉内，30分钟测量家兔体温记录体温变化。同时另一组家兔用NS作为对照注意：家兔正常体温为38.540.0 分析两组家兔实验结果，得出结论。应用:用于诊断病人是否发生G- 菌感染;用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。鲎试验： 原理：内毒素+鲎试剂凝胶状态 方法： 试验管： 鲎试剂+等量待测标本 阳性对照管： 鲎试剂+等量标准内毒素 摇匀放置37温箱1h 观察结果 阴性对照管：鲎试剂+等量蒸馏水 试验管 凝固 (+) 阳性对照管 凝固(+) 阴性

11、对照管 不凝(-) 判待测标本内毒素为阳性。应用：用此种反应来检测标本中的内毒素，对G- 菌产生的内毒素具有高度特异性，灵敏度高(可检出0.0050.0005g / ml内毒素)，操作简便、快速(在24h内可出结论)，已成功用于临床，可及早判明病原菌的类型，有利于合理用药和早期治疗。2. 细菌外毒素的检测原理：外毒素(Ag)毒性强，能使机体致病，但这种毒性能被相应的抗毒素(Ab)所中和，且这种中和反应具有高度的特异性，可用体外试验来检测。方法：体内毒力试验： 于小白鼠体内做(取两只小鼠) 1只小鼠： 破伤风抗毒素小鼠腹腔注射30分钟后，小鼠后腿肌注破伤风外毒素不发病：不出现任何症状。 另1只小

12、鼠：后腿肌注破伤风外毒素发病：尾部直立，后肢痉挛僵直，全身痉挛死亡。体外毒力试验：Ag、Ab在体外进行特异性反应。如利用Elek平板毒力试验来检测白喉棒状杆菌的外毒素；利用ELISA法来测定葡萄球菌的肠毒素等。简述细菌常用分解代谢产物（生化反应）的原理、方法、结果及临床应用。生化反应：不同菌体内具有不同的独特酶系统，故对各底物(糖、蛋白等)的分解产物也不一样，用此方法来鉴别细菌叫生化反应。 碳水化合物的代谢试验 糖(醇、苷)类发酵试验 产酸(+)：丙酮酸、乳酸、甲酸等原理：细菌 糖类 产酸产气：CO2、H2 不分解：(-)方法：把分纯的细菌1%糖(醇、苷)类培养基，35 1824h 观察结果。

13、 产酸产气： 如大肠埃希菌GS 结果 + 产酸不产气：如伤寒b、痢疾b GS + - 培养基不变色 ：如莫拉莫拉菌应用：是鉴别细菌最主要和最基本的试验，特别是肠杆菌科鉴定的主要试验。 氧化-发酵试验(O/F试验)原理： 分解GS 氧化型细菌，如微球菌、绿脓b 细菌 糖类 分解GS 发酵型细菌，如葡萄c、肠杆菌科 不分解GS 产碱型细菌，如莫拉莫拉菌 培养基： HL培养基 (蛋白胨2g、NaCl 5g、GS 10g、agar 2.5g、K2HPO412H2O 0.3g、0.2%溴麝香草酚兰12ml、加蒸馏水至1000ml，调pH 7.2，碱性时为绿色，酸性时为黄色。方法：将待测菌同时穿刺接种两支

14、HL培养基，其中一支滴加无菌液体石蜡(高度不少于1cm)，35培养48h。结果：两支试管都变黄 发酵型 开管变黄，闭管不变 氧化型 两支试管都不变 产碱型应用：检测细菌的代谢类型，进而鉴别细菌。如肠杆菌科细菌为发酵型，而非发酵菌为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌(发酵型)和微球菌(氧化型)的区别。-半乳糖苷(ONPG)酶试验原理： ONPG 邻-硝基酚(黄色）+-D-半乳糖试剂：0.75M ONPG溶液，为无色，若出现黄色，则不应再用。方法：从KIA斜面上刮取菌苔，加入0.25ml无菌NS制成菌悬液，加入1滴甲苯充分振摇，使-半乳糖苷酶释放，置37水浴5分钟，加入0.25ml ONPG试剂，水

15、浴(3537)20min3h，观察结果。结果：菌悬液呈现黄色为阳性。应用： 本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。因为快速分解乳糖的菌株同时具有半乳糖苷渗透酶(胞外酶)和-半乳糖苷酶(胞内酶)，而迟缓分解乳糖的细菌(宋内志贺菌等)只有-半乳糖苷酶，缺乏半乳糖苷渗透酶或活性很低，不能将乳糖迅速送到细胞内，故需几天才能将乳糖分解，若采用ONPG试验则可迅速(2030min)得出结果。因为ONPG与乳糖十分相似，且分子较小，它不需半乳糖苷渗透酶则可进入细胞内，而被细胞内的-半乳糖苷酶分解为半乳糖和黄色的邻-硝基酚。 ONPG试验结果不一定与分解乳糖相一致，这主要取决于细菌产生的酶及其活性。若无O

16、NPG，可采用5%的乳糖代替，同时减少蛋白胨的含量。 七叶苷水解试验原理：七叶苷(esculin)+H2O 七叶素 + GS 七叶素 + Fe 2+ (培养基中) 黑色化合物培养基： 七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。方法：把待测菌接种于七叶苷培养基，3537，1824h。结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于D群链球菌(+)与其它链球菌(-)的鉴别。也可用于革兰阴性菌(-)和厌氧菌(+)的鉴别。 甲基红试验(methyl red test)原理：GS 丙酮酸乳酸、甲酸、乙酸，pH 本试验以甲基红为指示剂，因此：当pH5.4时呈黄色，为阴性 当pH4.5时呈红色，为阳性 当pH在4

17、.55.4时呈桔红色，为弱阳性培养基：葡萄糖蛋白胨水方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 24天，加入甲基红指示剂，立即观察结果。结果：呈红色为阳性，桔红色为弱阳性，黄色为阴性。应用：用于鉴别大肠埃希菌(+)和产气肠杆菌(-)，其他肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属均为阳性，而肠杆菌属和哈夫尼亚属均为阴性。 V-P试验(Voges-Proskauer test)原理：细菌GS 丙酮酸 乙酰甲基甲醇+CO2 乙酰甲基甲醇 丁二酮(二乙酰) 丁二酮 + 胍基(培养基中精氨酸中含有胍基) 红色化合物培养基：葡萄糖蛋白胨水方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 48h后，加入甲液

18、(6%-萘酚酒精溶液)和乙液(40% KOH)，振摇。结果：在数分钟内出现红色者为阳性，若无红色出现且置于35 4h后仍如故者为阴性。应用：本试验与甲基红试验往往同时使用，一般前者为阳性，后者为阴性，反之亦然。2. 蛋白质和氨基酸的代谢试验 明胶液化试验：原理：某些细菌 半固体明胶 氨基酸 变成流动的液体。方法：待测菌穿刺接种于明胶培养基，22 7天，观察结果。35中明胶自动液化，若在35培养，观察前先置于4中30分钟后，再看结果。结果：培养基呈液化状态为阳性。应用：肠杆菌科细菌的鉴别。某些厌氧菌和多数假单胞菌也能液化明胶。 吲哚试验(Indole Test)原理： 色氨酸 吲哚 + 丙酮酸

19、吲哚+吲哚试剂(对二甲氨基苯甲醛) 玫瑰吲哚培养基：蛋白胨水方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 2448h，加入吲哚试剂，观察结果结果：于两者液面交界处出现红色为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴别，如大肠埃希菌为(+)，产气肠杆菌(-)。 硫化氢试验原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸产生H2S，当它与培养基中的Fe2+或铅离子相遇时，则形成黑褐色的FeS或PbS沉淀。此试验可间接用于检测是否产生H2S。培养基：醋酸铁(铅)培养基。方法：将待测菌接种于醋酸铁(铅)培养基中，35培养12天，观察结果。结果：培养基变黑为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于肠杆菌科中细菌属和

20、种细菌的鉴别。 尿素分解试验原理：某些细菌具有尿素酶，使尿素分解产生大量氨，使培养基呈碱性(酚红为指示剂)，培养基变红。培养基：尿素培养基方法：将待测菌接种于上述培养基中，35培养1824h，观察结果。结果：培养基变红为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于变形杆菌属的鉴定，另外雷氏普罗威登菌和莫根菌也为阳性。 苯丙氨酸脱羧酶试验原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱羧酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入FeCl3试剂后呈绿色反应。培养基：苯丙氨酸琼脂培养基方法：将待测菌接种于上述斜面培养基中，35培养1824h，滴加3滴FeCl3试剂，自上流下，立即观察结果。若延长时间观察会引起褪色。结果：出现绿

21、色为阳性。应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。 氨基酸脱羧酶试验原理：氨基酸 胺 + CO2，胺使培养基变碱，指示剂则变色。培养基：氨基酸脱羧酶和氨基酸对照培养基。方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 14天，观察结果。结果：对照管呈黄色，测定管呈紫色(溴甲酚紫为指示剂)为阳性，若测定管也为黄色为阴性。若对照管呈紫色则试验毫无价值，不能作出判定。应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。3. 碳源和氮源利用试验 枸橼酸盐利用试验(citrate test)原理：某些细菌能分解枸橼酸盐(获得碳源)，使培养基变碱 (原pH6.8pH)，培养基(溴麝香草酚兰为指示剂)由淡绿变为深蓝色。培养基：枸橼酸盐斜面培

22、养基方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 14天，观察结果。结果：由淡绿变为深蓝色为阳性，不变色为阴性。应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。如沙门菌属、克雷伯菌属一般为阳性，其他菌属一般为阴性。 丙二酸盐利用试验原理：某些细菌能将丙二酸盐分解成碳酸钠，使培养基变碱 (原pH6.8pH)，培养基(溴麝香草酚兰为指示剂)由淡绿变为深蓝色。培养基：丙二酸盐培养基方法：将待测菌接种于上述培养基中，35 12天，观察结果。结果：培养基由淡绿变为深蓝色为阳性(指示剂同上)，不变色为阴性。应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。I MViC试验*：是鉴别细菌常用的一组生化试验。 I M V C如：大肠埃希菌 +

23、+ - - 产气肠杆菌 - - + +4. 各种酶类试验 氧化酶试验(kovac test)原理：还原型细胞色素C 氧化型细胞色素C氧化型细胞色素C + 1%四甲基对苯二胺有色的醌类化合物方法：滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后滴加试剂。 试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸片上。 菌落法：直接滴加试剂于被检菌落上。结果：10秒钟内呈深紫色为阳性。同时应以铜绿假单胞菌(+)与大肠埃希菌(-)做对照。应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，另外奈瑟菌属和莫拉菌属也呈阳性反应。 触酶试验(H2O2酶试验)原理：具有触酶的细菌，能催化H2O2生成水和新生态氧，继而

24、形成分子氧出现气泡。即： H2O2 H20 + O2(出现气泡)试剂：3%过氧化氢溶液方法：玻片法和试管法结果：产生气泡为阳性，不产生气泡为阴性应用：常用于G+C的初步鉴定，如葡萄球菌(+)，而链球菌为(-)。 硝酸盐还原试验(nitrate reductive test)原理：硝酸盐 亚硝酸盐 + 氨 亚硝酸盐 + 试剂 颜色反应(红色)培养基：硝酸盐培养基试剂：甲液(对氨基苯磺酸溶液)；乙液(萘胺醋酸溶液)方法：将待测菌接种于硝酸盐培养基中，35 14天，加入0.1ml甲、乙等量混合液，摇匀，立即观察结果。结果：呈红色为阳性，若加入试剂后无颜色反应可能为：硝酸盐没有被还原，试验为阴性。 若

25、再加入少许锌粉，呈红色者则表明试验确为阴性，若仍不产生红色者为假阴性。应用：广泛应用于细菌鉴定中。如肠杆菌科细菌均为阳性，铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌可产生氨(放入一倒管检测)，而韦荣球菌也为阳性。 凝固酶试验(coagulase test)原理：致病性葡萄球菌 凝固酶 血浆中纤维蛋白原(液态) 纤维蛋白(固态) 血浆凝固方法： 玻片法：检测结合凝固酶； 试管法：检测游离凝固酶应用：作为鉴别葡萄球菌致病性的重要指标。 DNA酶试验原理：DNA 寡核苷酸链 溶于盐酸 菌落周围形成透明环 培养基：0.2%DNA琼脂平板方法：把被检菌点种于上述平板，35 1824h，加入1N HCl 观察结果，同

26、时设阳性和阴性对照。结果：菌落周围有透明环为(+)；菌落周围无透明环为(-)用途：可用于鉴别细菌：金黄色葡萄球菌为阳性，沙雷菌和变形杆菌也为阳性。 胆汁溶菌试验原理：胆汁或胆盐能促使自溶酶的活化，从而加速肺炎链球菌的溶解。试剂：10%的去氧胆酸钠或纯牛胆汁。方法：平板法：平板菌落加一环10%的去氧胆酸钠 35 30分钟，菌落消失，为阳性。 试管法：试管中菌液0.9ml + 10%去氧胆酸钠0.1ml 35水浴1030分钟，观察结果，变清亮为(+)，仍混浊为(-)。同时用NS设阴性对照(混浊)。应用：主要用于链球菌(-)和肺炎链球菌(+)的鉴别。5. 其他：抑菌试验，类似于药敏试验K-B法简述细

27、菌血清学检验的原理、方法与应用。血清学鉴定1.凝集反应 (1) 玻片法：已知Ab待测菌肉眼可见的颗粒或凝集块。 该试验简单易行、特异性强，主要用于鉴定菌种及分型。如沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、布鲁菌等的鉴定。（2）反向间接血凝试验 Ab-RBC(Ab致敏RBC) 待测菌(Ag) RBC凝集 试验敏感性高，反应快，结果易观察。常用于霍乱弧菌、布鲁菌、脑膜炎奈瑟菌、炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森等菌的快速诊断，也可用于金葡肠毒素和肉毒毒素等的测定。常在微量滴定孔板中做。（3）乳胶凝集试验 Ab-聚苯乙烯颗粒(致敏颗粒) 待测菌(Ag) 凝集

28、该试验敏感度不及反向间接凝集，但操作简便，反应快，故被临床广泛应用。(4) 协同凝集试验 原理：金葡细胞壁中的A蛋白(stapylococcal protein A SPA)能与IgG的Fc段非特异结合，Fab段暴露，并保持原有Ab的活性，当与相应Ag相遇时，Ag则与Fab段的Ag结合位点结合，从而使含A蛋白的葡萄球菌相互联结而协同凝集。 方法：SPA- IgG待测标本 SPA- IgGNS SPA- IgG阳性标本应用：该法快速、简便，灵敏性高，易于观察结果。已广泛用于肺双、沙门菌、志贺菌、脑双及链球菌的快速鉴定和分群(型)。 2.免疫荧光原理：利用免疫学特异性反应与荧光示踪技术相结合的显微

29、镜检查手段。方法：常用的有直接法、间接法和免疫荧光菌球法。应用：该法快速、简便，特异性强，已广泛用于临床标本的细菌学检验。3.酶联免疫吸附试验(ELISA) 有双抗夹心法和竞争法，临床上常用成套的ELISA商品试剂盒。该法具有高度的特异性和灵敏度。既可检测细菌Ag，也可检测血清中的Ab。4.其它免疫方法：对流免疫电泳、免疫印迹试验、发光免疫技术。血清学诊断原理：用已知细菌或其特异性Ag检测病人血清中的Ab及其效价的动态变化。结果：若Ab效价明显高于正常人水平或患者恢复期Ab效价比急性期4倍，则有意义。应用：主要用于Ag性较强的致病菌和病程较长的感染性疾病的辅助诊断。如伤寒和副伤寒的肥达试验，炭

30、疽病的Ascoli试验简述实验动物的用途、分类和选择原则。主要用途1.分离、鉴定病原微生物；2.测定细菌的毒力；3.制备免疫血清或诊断血清等生物制品；4.建立致病动物模型；5.动物血液或血清是制备细菌培养基的必须材料；6.用于生物制品或一些药物的安全、毒性及疗效的检验。分类：1.遗传学控制分类：近交系动物、突变系动物、杂种动物、封闭群动物和杂交一代动物。2.微生物控制分类：无菌动物、悉生动物、无特殊病原体动物、清洁动物或最低限度疾病动物、普通动物。选择动物时应考虑以下几点:1.选择对测试菌敏感的动物:如肺双小鼠，TB 或研究变态反映 GP，金葡肠毒素幼猫，制备Ab家兔；2.据试验目的、性质和要

31、求选用不同品系的动物；3.选用动物的数量必须满足统计学要求；4.由于个体差异，应考虑动物的年龄、性别、体型、生理状态和健康情况等；5.在满足试验要求的前提下，一般选用小动物。简述L型菌的概念、与一般细菌的生物学性状及检验有何不同？L型是细菌、真菌等微生物的细胞壁缺陷型。形态、染色、生化、抗药性、Ag性、致病性等生物学性状都与原菌不同，对作用细胞壁的抗生素均有抵抗力。L型的检验1.采集合格的标本：穿污染标本应用0.45 mm的滤膜过滤除菌，取滤液接种。若不能及时接种，应置高渗培养基中保存。2. 分离培养诱导：标本高渗培养基肉汤，351-7天肉汤混浊，有沉淀物粘附管壁革兰染色：着色不均，多形态。大

32、多为油煎蛋样或颗粒型菌落，少数为丝状菌落。回复：肉汤培养物等渗平板，352-7天菌落鉴定要点：(1)形态染色性：革兰染色着色不定，明显多态性，CW染色可见缺壁浓染细菌； (2)生长情况：在液体高渗培养基中呈微混、颗粒沉淀和沿管壁生长，在高渗琼脂平板上呈三种菌落形态； (3)返祖试验：L型菌在等渗(回复)培养基中可返祖为原菌，再进行鉴定：染色、药敏、生化等。简述细菌感染分子生物学检测的方法及其优点。核酸杂交技术特异、灵敏、快速、定位等优点。PCR的特异、灵敏、快速、操作简便等优点。生物芯片技术能对细胞、蛋白质、DNA以及其他生物组分的准确、快速、大信息量的检测。简述细菌的分类与命名原则,并举例说

33、明. 细菌的分类方法（一）生理学与生物化学分类法 目前，以生理生化作细菌分类广泛采用方法有两种： 、传统分类法生物的基本性质（主要的、次要的）。、数值分类法与传统主次原则不同，而是根据“等重要原则”进行分类。（二）遗传学分类法 、Cmol%测定 、核酸同源值（杂交）测定 、核蛋白体碱基序列的测定命名：常采用拉丁文双命名法（林奈双命法），即两个拉丁字组成，前一字为属名，用名词，首字母大写；后一字为种名，用形容词,首字母小写用斜体字，中文译名则种名在前,属名在后。Staphylococcus epidermidis；Mycobacterium tuberculosis；Salmonella typ

34、hi。 亚种的名称是由三名组成；如S.aureus subsp.anaerobius,译名金黄色葡萄球菌厌氧亚种.有时泛指某一属细菌，而不特指其中某个菌种，则可在属名之后加上sp.复数用spp. sp代表菌种（species)，如Staphylococcus sp、Mycobacterium sp、 Salmonella sp。常见病原性球菌有哪些?它们有何共性?常见的病原性球菌（pathogenic coccus）包括葡萄球菌、链球菌、肠球菌、脑膜炎球菌和淋球菌。因它们均能引起化脓性感染，故又名化脓性球菌（pyogenic coccus）。均为球菌。 病原性球菌的微生物学诊断的主要依据?举例

35、说明。它们均有一定的形态、排列方式、染色性和菌落特点，故病原性球菌的形态学检查和培养特性是细菌学鉴定的主要依据。如葡萄球菌属，葡萄球菌为革兰阳性球菌，平均直径1m，无特殊构造，常排列成堆，似葡萄状，故名葡萄球菌。也可呈单个、成双或不规则排列。本菌对营养要求不高，需氧和兼性厌氧，最适生长温度为37，最适pH为7.47.6。在普通肉汤中迅速呈均匀混浊生长，在普通琼脂平板上18 24h可形成12mm圆形凸起、表面光滑湿润、呈金黄色、白色、柠檬色脂溶性不透明的菌落。在血平板上金黄色葡萄球菌的菌落周围可形成完全透明的溶血环（溶血）。在高盐甘露醇琼脂平板上金黄色葡萄球菌的菌落呈淡橙黄色，而其他凝固酶试验阴

36、性的葡萄球菌的菌落多为白色。在高盐卵黄琼脂平板上，致病菌株因能产生卵磷脂酶，故菌落周围形成白色沉淀环，可用于筛选葡萄球菌。 甲链与肺炎链球菌的鉴别依据？肺炎链球菌的胆汁溶菌试验、Optochin敏感试验、菊糖发酵试验、荚膜肿胀试验和小白鼠毒力试验均为阳性，而链链球菌均为阴性 。名词解释：SPA、MRSA、胆汁溶菌试验、血浆凝固酶试验。SPA：为葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分，称为葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A，SPA），是一种具有种属特异性的完全抗原，从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPAMRSA：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，能产生内酰胺酶而破坏青霉素的内

37、酰胺环而使青霉素失效。胆汁溶菌试验：肺炎链球菌能产生自溶酶，而胆汁或胆盐能促使自溶酶的活化，从而加速肺炎链球菌的溶解。血浆凝固酶试验：血浆凝固酶能使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。名词解释：肥达反应: 用已知伤寒、副伤寒沙门菌O、H抗原，检测受检者血清中有无相应的Ab的半定量试管凝集试验称为肥达反应。外斐试验:因变形菌属中某些菌株OX19、OX2、OXK的菌体Ag与某些立克次体有共同Ag成分，故可用这些变形杆菌代替立克次体Ag与患者血清作凝集试验来协助立克次体病的诊断的一种试管交叉凝集试验。Vi-Ag:为酸性多糖聚合物，不耐热（6030min破坏）或经石碳酸处理即被破坏，人工传代也易丧失，新分离

38、的伤寒及副伤寒丙沙门菌带有此抗原。 带菌者:简述肠杆菌科中常见的病原菌有哪些？分别引起哪些疾病及其细菌学检验方法？埃希均属、沙门菌属、志贺菌属、耶尔森菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属试比较肠道杆菌与化脓性球菌的细菌学诊断原则有何不同？为什么？请举例说明。简述非发酵菌的概念与常见菌。概念：是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼氧的无芽胞革兰阴性杆菌.常见菌：假单胞菌属（铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌）不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、莫拉菌属和军团菌属简述非发酵菌的微生物学诊断原则。革兰染色、分离培养、生化试验名词解释X因子：是一种耐热的存在于血红蛋白中的一种

39、血红素及其衍生物，是一种含铁卟啉，是细菌合成过氧化氢酶，过氧化物酶与细胞色素氧化酶的辅基。V因子：是一种对热不稳定的vitB类物质，存在于血液和某些植物中，是脱氢酶的辅酶，在细菌的呼吸中起传递氢的作用 卫星现象（Satellite phenomenon)：把金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌一起培养时，可见到邻近金葡菌的流感杆菌的菌落较大，而远离金葡的流感杆菌菌落较小，这种现象称“卫星现象”。疑为流感嗜血杆菌引起的婴幼儿脑膜炎或肺炎，你应如何进行病原学诊断？无菌操作取脑脊液，标本的直接镜检：显微镜直接镜检 、检测抗原、检测核酸，鉴定：分离培养时需X、V因子，菌落形态、卫星现象、生化特性一幼儿园疑有百

40、日咳流行，你应如何确诊病人，并采取哪些防治措施？临床症状（三期）、感染早期采患者标本，标本直接检查：直接显微镜检查，G小杆菌、抗原检测、抗体检测、核酸检测、分离培养（鲍金培养基）、生化鉴定、药敏试验防治措施：以注射“百、白、破”三联菌苗预防为主。某地疑有霍乱流行，你应如何进行微生物确诊并采取哪些防治措施？应尽可能在发病早期，使用抗生素之前进行采集患者米泔样水样便、呕吐物、尸体肠内容物，一般就地接种或用卡布运送培养基或碱性蛋白胨水，37，68h增菌菌膜。（1）直接镜检：涂片2张，干后乙醇或甲醇固定，G-弧菌，呈鱼群样排列。（2）动力和制动试验：动力，呈穿梭状似流星状运动，阳性菌，再用霍乱多价诊断

41、血清（效价1：64），其活泼的运动停止并发生凝集。（3）分离培养：接种TCBS平板，挑选可疑菌落（较大黄色菌落），进一步鉴定。1）初步鉴定：血清凝集（O1群和O139群抗血清，多价至单价）。菌体形态、菌落特征、氧化酶试验等进行初步鉴定。2）最后鉴定：全面生化、血清学与分型。初筛试验：霍乱红试验、粘丝试验、O/129敏感试验鉴定试验多粘B敏感试验鸡RBC凝集试验第组phage裂解试验古典生物型敏感裂解EITor生物型不敏感不裂解防治措施：疑为弯曲菌引起的腹泻或败血症，你应如何进行微生物学诊断？1、直接镜检：为G- 无芽胞弯曲短杆菌，菌体弯曲呈S状或海欧展翅状等。有端鞭毛，运动活泼，暗视野镜下呈“

42、投标样”运动2、分离培养：培养基 CampyBAP等 培养方法微需氧培养3、鉴定：（1）形态学鉴定：革兰染色，形态，排列动力及培养条件（2）生化鉴定：马尿酸水解试验。 疑为HP引起的消化性胃溃汤，你应如何进行微生物学检验？标本采集：胃粘膜活检标本检验方法：（1）直接镜检：（2）分离培养：培养基 CampyBAP等 培养方法微需氧培养（3）快速诊断：尿素酶快速强阳性、核素标记试验，PCR、抗原检测（现有商品ELISA试剂盒检测HP菌体Ag)。某幼儿园疑有白喉病流行，你应如何进行微生物学诊断？并采取哪些防治措施？标本采集：双份鼻咽拭子或扁桃体分泌物。检验方法与鉴定：（1）直接检查：直接涂片，分别作

43、革兰染色和异染颗粒染色。（2）分离培养：标本接种于 吕氏血清斜面、亚蹄酸钾血平板和血平板。 （3 ）鉴定：根据镜下形态，菌落特征即可诊断。但还需进行毒力试验，以确定细菌的毒性。常用的有ELeK 平板法，小白鼠毒力试验。预防措施：以注射“百、白、破”三联菌苗预防为主名词解释抗酸染色：结核菌素试验：是利用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否产生迟发性变态反应的一种试验。原理：结核分枝杆菌的传染、免疫、变态反应三者同时存在，所以可用PPD来做皮肤试验，看局部皮肤有无变态反应，从而推测机体是否有传染和免疫。 方法与结果判断： 取0.1mlPPD(含5u)前臂皮内注射，4872小时后，局部红肿硬结5mm者为阳性。表明机体可能感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗，但不一定患结核病；局部红肿硬结15mm为强阳性，表明机体可能有活动性结核，应进一步检查；局部红肿硬结5mm为阴性，表明未感染过结核分枝杆菌，但应排除原发性结核病的早期、老年人、严重结核病(如粟粒性TB、结脑)或有其它严重疾病(如麻疹、淋巴瘤、白血病、AIDS)以及免疫抑制剂应用者。用途：可作流行病学调查,了解人群对结核分枝杆菌的感染率。 选择