PCR实验室管理制度培训讲学.docx

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1、PCR实验室管理制度培训讲学PCR实验室管理制度1.0目的建立PCR实验室的工作规范，确保分子诊断室正常工作。2.0范围PCR实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。3.0职责PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。4.0内容4.1在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服。4.2试剂准备间4.2.1配电房先打开风机先开送风机，再开排风机，再把空调系统打开。关闭时的顺序相反。4.2.2其它室的用品不得带入本室。4.2.3从PCR实验室1号入口门进入实验室，到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作服，挂在缓冲间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服蓝色，进入

2、试剂准备间，实验中须戴一次性手套，手套常更换。4.2.4打开已灭菌的超净台，通风一段时间，排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。4.2.5操作应在冰上进行。Taq酶尽量在配液的最后一步参加。应减少dNTP反复冻融的次数。每次实验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子。4.2.6实验作业完成时，应及时清理工作台，做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。使用过的离心管、吸头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.2.7打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗

3、门。4.2.8在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.3标本制备间4.3.1在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服粉红色，进入标本制备间。4.3.2打开传递窗的门，取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。4.3.3实验作业完成时，应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置于3%的HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.3.4做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。4.3.5打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。4.3.6提取基因组模板，提取经过中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃

4、圾袋并于实验结束后立即将垃圾袋扎口丢弃。提取质粒可先提取野生型质粒再提取突变型质粒。每次提取工作完成后擦拭台面。4.3.7在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.4扩增间4.4.1在扩增间的缓冲间，脱下白色工作服，换上扩增间专用工作服绿色。4.4.2打开传递窗门，取出配好的试剂，关上传递窗门。4.4.3打开PCR仪预热20min。4.4.4将反响管放入PCR仪中，关好门。4.4.5脱掉手套，设定程序，并命名。4.4.6结束后需待仪器冷却后方可取出PCR仪里的试剂，取出时用镊子将试剂条夹出，注意勿要使管盖打开，用三个PE手套包好方可弃之。机器上不允许存放PCR扩增产物，每次实验后请自行及时清理PCR扩增产物。4.4.7结束实验后，到配电房先把空调系统关掉，再关掉排风机，之后关掉送风机。4.4.8文件的处理：当天所做的实验结果，当天拷到部门电脑上处理，复制一份将文件名改为记录本上的命名。可将试验结果导到PPT上，并标记。4.5传递窗的使用4.5.1传递窗天天早上灭菌20分钟一次。当天使用可不用再次灭菌。将试剂放到传递窗时，在底下垫上一层手套。4.6压力监控4.6.1天天早上空调运行半小时后，记录各PCR实验室的压力差：试剂准备间：510；标本制备间：-5-10；扩增间：-10。各缓冲间的压力为+5.4.7超净台的摆放