临床检验基础实验指导.docx

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1、临床检验基础实验指导临床检验基础学实验指导血液常规检验一、微量吸管得使用、毛细血管采血、计数板得鉴定与使用【实验目得】:把握微量吸管得使用、毛细血管采血、计数板得鉴定、构造与使用、【实验试剂】:红细胞稀释液、75乙醇、消毒药棉。【实验器材】:一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。【实验原理】:一次性采血针刺破毛细血管后,用微量吸管汲取一定量得血液,稀释一定得倍数,冲入计数池计数一定体积内得细胞得数量。【实验方法】:一、微量吸管得使用:用抗凝血训练微量吸管得使用、二、毛细血管采血(以红细胞计数为例):准备:取清洁枯燥试管一支,加2ml红细胞稀释液。采血部

2、位选择、推拿75乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干(否则血流不成滴)自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确汲取10ul血液用无菌干棉球压住伤口止血用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液释放到稀释液底部回吸上清液2次轻轻混匀。三、计数板构造与应用1.计数板构造外观构造:每块计数板由“H型凹槽分上下两个计数室,在计数室两侧各有一条支柱,比计数室高出0、1m,将一块平整光滑得血细胞计数专用盖玻片(24.0m20、0m0、6m)覆盖其上时,盖玻片与计数室间构成0.1m得缝隙、格子构造:计数池长、宽各3m,平均分成9个大格,每个大方格得容积就是0。1m四角得四个大方格分别用单线划分成16个中方格,就是

3、白细胞计数区域;中央得大方格用双线条划分成25个中方格,每个中方格又用单线划分成6个小方格,其中四角与正中得5个中方格就是红细胞计数区域。、计数板得使用:用清洁枯燥柔软得纱布擦拭计数板及盖玻片用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上充分混匀细胞悬液充池静置观察细胞分布情况(若严重不匀,应重新充池、)【注意事项】:1.采血部位应选择皮肤完好,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2.针刺应迅速,深度适宜(约23m)、待血液自行流出,擦去第一滴血。3。微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若血流不暢,能够左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压,造成组织液混入,

4、影响结果准确性。4.计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片外表,以访油腻污染,致使充液时起泡。二、血涂片得制作,瑞氏染色【实验目得】:把握血片制作方法,瑞氏染色原理及方法。【实验试剂】:瑞-吉氏复合染液(液、液)【实验器材】:显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球【实验原理】:细胞得着色既有化学得亲与作用,又有物理得吸附作用,不同得细胞由于其所含化学成分不一样,化学性质各不一样,所以对染料得亲与力也不一样,因而将细胞染成不同得颜色、【实验方法】:一、瑞一吉氏复合染液配制液:取瑞特染粉1,吉姆萨染粉、3g,置干净研钵中,加少量甲醇(分析纯),研磨片刻,吸出上层染液,再加少量甲醇,

5、继续研磨,再吸出上层染液。如此连续几次,共用甲醇50ml、采集于棕色瓶中,天天早晚各振摇3共5天,再存放一周,将染液过滤后即可使用。液:磷酸盐缓冲液(H6、-6。8),取磷酸二氧钾(无水)6。64g,磷酸氟二钠(无水)2。5,加少量蒸馏水溶解,调整P后,加水至1000l。二、血片制作、瑞氏染色方法准备:取清洁枯燥载玻片,边缘光滑清洁推玻片各一张、制备血涂片:取载玻片取血1滴于载玻片右端(边缘留1。5cm空隙)左手持载玻片,右手持推玻片将推玻片放至血滴前沿逐步后移至血滴沿推片散开后,推玻片与载玻片成305得夹角以平稳得速度将血液向前推进枯燥(手持载玻片末端迅速在空气中挥动枯燥)。2、染色:将干透

6、得血涂片放在水平位置加瑞吉氏复合染液液数滴,以染液覆盖整个血膜为度静置染0、51min滴加约2倍于液量得液用洗耳球吹气混匀染色10n平持玻片用流线型水洗枯燥镜检【注意事项】:1.严格皮肤消毒。2。血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚,反之则血膜薄。3。染料放置时间越长,美兰逐步氧化为天青,染色效果越好。4.染液淡,室温低,细胞多则染色时间长,反之减少染色时间。.水洗方法为平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净,不要先倒掉染液。三、白细胞计数(WBC)【实验目得】:把握白细胞计数得原理、操作方法与结果报告、【实验原理】:用白细胞稀释液将全血稀释一定得倍数并毁坏红细胞,充入血细胞计数池,显微镜下计

7、数一定体积得白细胞数,经换算求出每升血液中得白细胞数量。【实验试剂】:白细胞稀释液【实验器材】:显微镜、改进Neubaer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒【实验方法】:准备:取清洁枯燥试管一支,加、38m白细胞稀释液。采血部位推拿5乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干(否则血流不成滴)自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确汲取0l血液用无菌干棉球压住伤口止血用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液轻轻释放到稀释液底部回吸上清液23次混匀室温静置至液体变为棕褐色即红细胞毁坏完全清洁计数板、盖玻片充池静置3min待细胞下沉低倍镜下计数四角大方格内得白细胞总数计算报告、计算:WB=四个大方格内得白细胞数

8、(N)/4102106=/29【注意事项】:1、采血部位应选择皮肤完好,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。2.针刺应迅速,深度适宜(约23mm)。待血液自行流出,擦去第一滴血。3、稀释液要过滤使用,试管、计数板均须清洁,以免混入杂质被误以为白细胞。4。加稀释液、血液量应准确,以保证稀释倍数。5.计数池内细胞分布要均匀,每个大方格间白细胞数差异不得超过均值得,否则要重新充液计数。6、严格把握计数原则,以免人为扩大或缩小计数区域。白细胞数量过高时,可加大稀释倍数,反之白细胞过低时可计数8个大方格内白细胞数或加大取血量。四、白细胞分类计数(D)【实验目得】:把握显微镜法外周血分类计数得方法、各种白

9、细胞得镜下形态。【实验原理】:将血液制备成涂片,经瑞吉氏染色后显微镜下根据白细胞得形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞,计算得出各种白细胞所占百分比。【实验试剂】:瑞吉氏复合染液【实验器材】:显微镜、外周血标本片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】:准备:血涂片制备及瑞吉氏染色待干低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好得区域转油镜按一定得规律移动视野,依次进行分类计够1个白细胞算出各种白细胞得百分比报告【注意事项】:1.涂片制备要厚薄适中、均匀、头体尾分明、2。分类时要有程序地连续进行,避免主观选择视野。、分类中如见幼红细胞,不计入100个白细胞内,以分类10个白细胞经过中见到幼红细胞多少

10、个来报告,并应注明其所属阶段,4、分类中应注意观察成熟红细胞、血小板得形态染色及其分布情况,注意有无寄生虫(如疟原虫)及其她异常所见。五、白细胞计数(WB)及分类计数(DC)【实验目得】:把握白细胞计数及分类计数原理、方法与结果报告【实验原理】:白细胞计数原理:用白细胞稀释液将全血稀释一定得倍数并毁坏红细胞,充入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积得白细胞数,经换算求出每升血液中得白细胞数量。白细胞分类计数原理:将血液制备成涂片,经瑞吉氏染色后显微镜下根据白细胞得形态特征进行分类计数。通常分类个白细胞,计算得出各种白细胞所占百分比。【实验试剂】:白细胞稀释液、瑞-吉氏复合染液【实验器材】:显微镜

11、、改进Nebauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒、载玻片、推玻片、香柏油、擦镜纸、清洁剂【实验方法】:准备:1。取清洁枯燥试管一支,加0。38l白细胞稀释液。2、取清洁枯燥载玻片,边缘光滑清洁推玻片各一张。采血部位推拿5乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒待酒精挥发干(否则血流不成滴)自指尖腹内侧迅速刺针擦去第一滴血准确汲取20ul血液用无菌干棉球擦去管尖外围余血后将血液轻轻释放到稀释液底部回吸上清液2-3次混匀另取血一滴于载玻片得右端立即推制血膜用无菌干棉球压住伤口止血清洁计数板、盖玻片充池(静置23min待细胞下沉)低倍镜下计数四角大方格内得白细胞总数将干透得血膜进行瑞-吉氏染色油镜下分类计数计

12、算报告。六、红细胞计数(BC)、Hb测定【实验目得】:把握红细胞计数,b测定原理、操作方法,规范得报告结果【实验原理】:红细胞计数原理:用等滲稀释液将血液稀释一滴倍数,充入计数池,在显微镜下计数一定体积内得红细胞数,经换算求得内升血液中得红细胞数。Hb测定(HiC法)原理:血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,后者再与氰离子结合构成稳定地氰化搞铁血红蛋白(iCN),HiN在规定波长(4nm)与液层厚度(1m)得条件下具有一定得毫摩尔消光系数。可用标准得高精度分光光度计进行直接定量测定,或用HiCN标准液进行比色法测定,根据标本得吸光度即可求出血红蛋白浓度。【实验试剂】:红细胞稀释液(甲醛枸木

13、缘酸盐稀释液),HC转化液【实验器材】:改进Nuauer计数板、显微镜、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、玻璃棒、【实验方法】:BC:取清洁枯燥试管一支加红细胞稀释液、99ml加未梢血ul于稀释液底部汲取上清液嗽洗3-次颠倒混匀清洁计数板,盖玻片充液静置23计数(中央大格中四角及正中个方各细胞数)计算RBC=5个中方格细胞数5102010=5个中方格细胞数1012/L。b测定:1。直接定量测定法:取中号试管一支加HiN转化液5ml加未梢血0ul混匀静置57比色,波长0nm,以转化液为空白对照管测其吸光度“A计算(“A37、7)报告2.标准曲线法:将血红蛋白标准液稀释成不同得三种浓度(150g/L

14、、0g/L、50g/L)分别测其吸光度“,以“A为纵坐标,血红蛋白标准液参考值(g/)为横坐标,绘制标准曲线。通过标准曲线查出待测样本得血红蛋白浓度。【注意事项】:1、取血应顺利、准确,采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症,不得过渡挤压,红细胞数量明显增高者可适当加大稀释倍数、2。HiCN转化液应置棕色瓶于4冰箱中,不能储存于白色瓶、塑料瓶及强光下,否则会使CN丢失,结果偏低。3.i转化液中有氧化钾剧毒,防止污染。测定后得比色液不能与酸性溶液混合,否则可产生剧毒得氢氰酸气体、4。所用分光光度计得波长、吸光度需要校正,带宽应小于1m,比色杯光径1。000c时,测定温度为2025。七、血液常

15、规检验【实验目得】:把握血常规得连续操作规程并规范得报告结果。【实验原理】:见实验二、三、四、六【实验试剂】:红细胞稀释液、白细胞稀释液、瑞吉氏复合染液、HiN转化液【实验器材】:改进ebauer计数板、分光光度计、玻璃试管、微量吸管、显微镜、玻棒。【实验方法】:取大、中、小号试管各一支分别加HN转化液5ml、红细胞稀释液、白细胞稀释液.38ml手指消毒针刺分别取未梢血l于红细胞稀释液中、20ul于白细胞稀释液中、0ul于HiCN转化液中并及时混匀取清洁枯燥玻片粘取1滴血液于玻片一端推制血片待干721比色瑞氏染色白细胞及红细胞计数DC计算报告(血常规结果报告)正常值:成人儿童新生儿1、WB:(

16、410)109/L(512)109/L(1520)109/L成年男性成年女性儿童2.RC:(4-5。5)1012/(。55)101/L(6-)012/3.H:12016g/L-150g/L1720gL:20M:38E:0.5%B:01【注意事项】:。取血应顺利、准确,采血部位不得有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症,不得过度挤压。2.Hi转化液中有氧化钾巨毒,防止污染、测定后得比色液不能与酸性溶液混合,否则可产生剧毒得氢氰酸气体。3.细胞计数混合不易过分震摇。4。瑞氏染色时加染液与缓冲液得比例为1:或:。5。采取标本得顺序:红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血片制作八、血小板计数(BPC或PL)

17、【实验目得】:把握血小板得计数原理、方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】:用稀释液将血液稀释一定倍数后混匀,充入计数池中,于显微镜下计数一定体积得血小板数,经换算求得每升血液内得血小板数。【实验试剂】:1g/L草酸铵液【实验器材】:显微镜、:改进Nebauer计数板【实验方法】:准备:取清洁枯燥得小试管一支,加1g/L草酸铵液0、8m准确取自然流出得外周血20l轻轻放入到上述稀释液底部回吸上清液漱洗吸管23次混匀室温静置10i清洁计数板、盖玻片混匀细胞悬液后充池静置1in15min于高倍镜下计数中央大方格内四角与中央5个中方格内血小板总数计算报告计算:血小板数L=个中方格内血小板总数09/【

18、注意事项】:1、。所用试剂、器材应10/L草酸铵液稀释液中无尘埃、细菌等污染。2、毛细血管采血时,针刺深度应达3m。采血要快避免血液凝固。若遇血小板成簇分布时,应重采标本计数.3、细胞悬液充入计数池中静置时,应注意保持湿度,避免水分蒸发。4。计数光阴线不可太强,注意微有折光性得血小板与尘埃得鉴别。血小板为轻度折光性得园形、椭园形。5.血小板计数应在1h内完成,否则结果可降低。九、网织红细胞计数(RC)【实验目得】:把握网织红细胞计数原理、测定方法、镜下形态、结果报告、【实验原理】:网织红细胞为晚幼红细胞脱核后,但尙未完全成熟得红细胞。其胞质中尙残存核糖体、核糖核酸等碱性物质,经活体染色后于胞质

19、中可见蓝绿色网点状或点粒状构造。【实验试剂】:1/L黄焦油篮生理盐水溶液【实验器材】:显微镜、试管、载玻片、推玻片【实验方法】:准备:取清洁枯燥小试管一支,加10g黄焦油篮生理盐水溶液2滴取外周血23滴于上述试管中立即混匀37下染色52in取试管里得混合血液一滴于载玻片一端推制成薄血膜待枯燥油镜下计数(于目镜筒中放一缩小视野得硬纸片)至少00个红细胞中得网织红细胞数计算报告计算:网织红细胞百分比计数得网织红细胞数/10【注意事项】:。网织红细胞必须在活体染色下才能显示。2、染色时血液与染料得比例约为1:1,贫血时适当增加血量,室温较低时适当延长染色时间或置7温箱。3、涂片应厚薄适宜,以红细胞不

20、重叠为度,涂片后应及时计数,否则网状构造消失、4。计数区域一般选择血膜得体部,自体部向尾部迂回检查。十、嗜酸性粒细胞计数【实验目得】:把握嗜酸性粒细胞直接计数得原理、操作方法、镜下形态及结果报告。【实验原理】:用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定得倍数,毁坏红细胞与其她大部分白细胞并使嗜酸性粒细胞着色,滴入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积内得嗜酸性粒细胞,经换算得出每升血液中嗜酸性粒细胞数。【实验试剂】:2%伊红-丙酮嗜酸性粒细胞稀释液【实验器材】:显微镜、改进Nubuer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒【实验方法】:准备:取清洁枯燥试管一支,加0。38ml嗜酸性粒细胞稀释液。准确汲取外周血20u轻轻放入到上述稀释液底部回吸上清液漱洗吸管23次混匀室温静置清洁计数板、盖玻片混匀细胞悬液后充池静置minmin于低倍镜下计数两侧计数池中10大方格(每侧计数池得四角与中央大方格)内得嗜酸性粒细胞数计算报告