免疫组化与免疫荧光的区别讲解学习.docx

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1、免疫组化与免疫荧光的区别讲解学习免疫组化与免疫荧光一、两者都是蛋白定位的检测也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜。二、区别是：1、概念和基本原理免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反响和组织化学的呈色反响，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反响的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的现像和放大作用，在细胞，亚细胞水平检测各种抗原物质，并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织细胞化学技术、免疫酶组织细胞化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。免疫荧光组织

2、细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体或抗原作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原或抗体，构成的抗原抗体复合物上带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出亮堂的荧光，这样就能够分辨出抗原或抗体的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以到达对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。2、标本制作：免疫荧光一般用冰冻切片，减少杂质干扰；而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均能够。3、实验步骤：免疫荧光染色步骤简单，而酶免疫组化方法较为复杂，多了DAB显色经过。4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退；而酶免疫组化染色标本能

3、够长期保存。5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些，还能够用软件做相对定量分析。6、免疫荧光得到的图片是彩色的，漂亮些，能够发高档次文章。免疫学三大工具：免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。免疫组化：是融合了免疫学原理抗原抗体特异性结合和组织学技术组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等，通过化学反响使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。Elisa酶联免疫吸附试验：用到了免疫学原理和化学反响显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因此没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开场需要将抗原或抗体结合到固相载体外表，进而使后来构成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附的含义。免疫组化和elisa所用到的原理大致一样，只是由于所检测的样品不同，进而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。westernbolt：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，能够用于定性和半定量。