残留溶剂的验证.docx

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1、残留溶剂的验证我觉得应该从下面几点去做好残留溶剂检查，并应从下面几个方面展开讨论。一、首先应学习和熟练把握中国药典2005年版二部附录P残留溶剂测定法的有关要求；主要是下面几点：1、色谱柱的选择，一般如今都要选择毛细管柱，假如你们公司很有条件，那么极性和非极性的色谱柱都购买吧！我们用的是中极性的色谱柱，一般做有机溶剂残留大多数是能够了。2、供试品溶液的制备，主要是根据供试品的溶解度来选择，同时也要考虑对照品在该溶剂中的溶解性。一般首先选择溶剂水、DMF、DMSO，再考虑其它溶剂。3、测定法的选择，等温和程序升温法，进样方面主要有顶空和直接进样法，这个主要根据本身实际条件来选择。4、其它就不多讲

2、了，主要看一下该残留溶剂测定法后面的【附注】，药品中常见的残留溶剂及限度，还有相对保留时间的参考值，这个对实际做某个品种时很有用，能够提早大概知道该残留溶剂的保留时间。二、残留溶剂检查方法的选择和验证要点1、概述药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及制剂制备经过中使用的，但在工艺经过中未能完全去除的有机溶剂。按有机溶剂的毒性和对环境的危害，ICH将有机溶剂分为避免使用、限制使用、低毒和毒性根据尚缺乏四种情况。因残留溶剂会影响产品的安全性，故需对其进行研究。2、残留溶剂检查方法的选择残留溶剂的测定一般采用气相色谱法，推荐使用毛细管色谱柱-顶空进样系统，当然可以以使用普通填充柱，溶液直接

3、进样方法。对不宜采用气相色谱法测定的含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可采用其它方法，如离子色谱法等。测定残留溶剂应从下面几个方面考虑：确定被测的有机溶剂、选择适宜的色谱柱、制备供试品溶液和对照品溶液、选择适宜的进样方法和知足检测灵敏度要求的检测器，下面分别进行介绍：2.1确定被测的有机溶剂根据制备工艺确定被测有机溶剂的范围。通常应对制备工艺经过中使用的二类以上溶剂和重结晶用溶剂，以及根据工艺特点要求的其它溶剂进行残留量的研究。建议对合成最后三步使用的三类溶剂也进行研究，这样能更好地对未知峰进行归属；对制剂经过中使用的有机溶剂也建议考察其残留情况，十分是缓、控释微丸包衣经过使用的有机溶剂更应

4、引起注意。残留溶剂的限度要求同ICH的规定。2.2选择适宜的色谱柱根据类似相溶的原理选择色谱柱。毛细管柱有极性柱、非极性柱、弱极性柱和中等极性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂渍适宜固定液的填充柱。测定含氮的碱性有机溶剂时，由于普通气相色谱仪的不锈钢管路、进样器衬管等对有机胺等含氮的碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出的灵敏度降低。通常采用弱极性色谱柱或经碱处理过的色谱柱分析含氮的碱性有机溶剂，假如采用胺分析专用柱进行分析，则效果更好。2.3供试品和对照品的制备顶空进样方法通常以水为溶剂，对于非水溶性的药物，可采用DMF、DMSO或其他适宜溶剂。溶液直接进样方法用水或适宜的溶剂溶解样品。制备供

5、试品的溶剂的选择应兼顾供试品和被测有机溶剂的溶解度，且所用溶剂应不干扰被测有机溶剂的测定。水是首选溶剂，十分是顶空进样系统。由于水中不含有机溶剂，故干扰较少，且在FID检测器上，以水为溶剂时，各残留溶剂的灵敏度最高。当药物不溶于水时，可参加适当的酸或碱以增加药物的溶解度，最好选用不挥发的酸或碱。以DMSO等为溶剂时，可参加一定量的水以增加检测的灵敏度，或用盐析的方法增加灵敏度。测定含氮的碱性溶剂时，供试品溶液应不呈酸性，以免被测物与酸反响后不易汽化。对照品的制备方法应与供试品的制备方法一样。在申报资料中发现对照品溶液为直接进样，供试品则为固体直接顶空进样，供试品和对照品不但制备方法不同，而且进

6、样方法和进样量也不同，无法进行比拟。提请申报单位注意。2.4供试品溶液和对照品溶液浓度确实定配制供试品溶液的浓度应知足定量测定的需要，一般供试品取样量在0.11g之间。限度检查时对照品溶液的浓度可按规定的限度配制，定量测定时按实际残留量配制，浓度相差最好以不超过2倍为宜。2.5检测器的选择一般选用FID检测器，对含卤素的有机溶剂如氯仿等，采用ECD检测器可得到更高的灵敏度。通常可根据药物溶剂的残留情况选择适宜的检查方法。当需要检查的有机溶剂数量不多，且极性差异较小时，可选择毛细管色谱柱-顶空进样-等温法。当需要检查的有机溶剂数量较多，且极性、沸点差异较大时，可选择毛细管色谱柱-顶空进样-程序升

7、温法；可以选择填充柱或适宜极性的毛细管柱直接进样法。限度检查一类、部分二类溶剂时采用内标法或外标法；定量测定含量超过0.1%的二类或需要定量控制的三类溶剂时采用内标法或标准参加法。顶空进样法还要对顶空温度和顶空时间进行选择。顶空温度应根据溶解供试品溶剂的特性及供试品中残留溶剂的沸点选择。以水为溶剂及测定低沸点残留溶剂时，顶空温度不宜超过85；测定沸点较高的残留溶剂时，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物干扰测定结果。以DMSO为溶剂时，顶空温度不宜超过115。例如，在申报资料中发现，以水为溶剂，顶空温度为100，柱温60，结果高浓度的乙腈

8、比低浓度的二氯甲烷的峰面积还小，原因是顶空温度太高，大量的水被蒸发或浓度被稀释，随着水蒸汽的凝结，在水中溶解度大的乙腈的灵敏度下降，产生了与事实不符的实验结果。顶空时间是要确保供试品溶液的气-液两相到达平衡，一般通过测定顶空时间与顶空气体浓度的浓度时间曲线来确定。顶空时间不宜过长，一般为3045分钟，假如超过60min，可能引起顶空瓶的气密性变差,导致定量的准确性降低。假如平衡时间选择10分钟，就不能保证气-液两相到达平衡。注意对照品溶液与供试品溶液必须使用一样的顶空条件。甲酰胺、2甲氧基乙醇、2乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不适宜用顶空法测定。3、残留溶剂检查方法的验证我以为必做用红

9、色标识3.1系统适用性试验柱效：用被测物的色谱峰计算，填充柱法的理论板数应大于1000，毛细管色谱柱的理论板数应大于5000。分离度：色谱图中被测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。重复性：以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得被测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD)应不大于5%；以外标法测定时，所得被测物峰面积的相对标准偏差(RSD)应不大于10%。3.2准确度在规定的范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定，计算回收率和相对标准偏差，含量测定的回收率应大于98%。进行回收率试验时，由于采用顶空进样系统，供试品与对照品处于不完全一样的基质中，此时应考虑气-液

10、平衡经过中的基质效应。标准参加法能够消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准参加法验证定量方法的准确性。当标准参加法与其它定量方法的结果不一致时，应以标准参加法的结果为准。标准参加法为精细称量取被测定的残留溶剂对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量精细参加到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定残留留剂的含量，再扣除参加的对照品溶液的含量，即得供试液溶液中残留溶剂的含量；或按下式计算残留溶剂的量。Cx=Cx/Ais/Ax-1，式中Cx为供试品中组分X的浓度；Ax为供试品中组分X的色谱峰面积；Cx为所参加的已知浓度的被测组分对照品；Ais为参加对照品后组

11、分X的色谱峰面积。3.3专属性对各种残留溶剂定位和进行混合溶剂的分离度试验，并附代表性图谱。供试品中的未知杂质或其挥发性热降解产物易对残留溶剂的测定产生干扰。假如未知杂质或其挥发性热降解产物与被测物的保留值一样共出峰，或热降解产物与被测物的构造一样如甲氧基热裂解产生甲醇时，应通过试验排除干扰。对第一类干扰，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对一样样品进行测定，比拟不同色谱系统的测定结果的方法。如二者结果一致，则能够排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判定。3.4其它可根据是限度检查还是定量测定选择

12、详细的验证内容。精细度：重复性和重现性，在规定范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定。一般保留时间的RSD1%，峰面积的RSD5%。线性：至少制备5个浓度，R=0.99。附回归方程、相关系数和线性图。检测限和定量限：检测限为信噪比3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量。定量测定时需验证定量限，其限度为信噪比10：1时相应浓度或注入仪器的量。同时讲明测试的经过和结果，并附图谱。网友aland：残留溶剂是药品质量控制中一个重要的内容。残留溶剂检查方法选择能否合理直接关系到结果的准确性。下面我就有机残留溶剂检查方法合理性的几点考虑及重点关注的问题进行分析和讨论。原料药或制剂中有机溶剂的

13、残留量一般要求控制在几个至几千个ppm之间，属于微量或痕量测定，与常量测定有着不同的特点。残留溶剂检查方法的选择对测定结果有着重要的影响，有时采用不同的方法测定同一个样品会得到截然不同的结果。通过近期观察一段时间情况，经常发如今残留溶剂的检查方法尚不合理的情况下，若样品的色谱图中未出现溶剂峰，也未经其它系统验证，就简单地作出样品无该溶剂残留的结论，进而不将其残留定入质量标准，药检所也不再进行复核。针对这种情况，就怎样评价残留溶剂检查方法的合理性谈本人的一些认识，与各位业内同仁沟通。有机残留溶剂检查一般采用气相色谱法，评价色谱系统的适用性和方法学验证资料遵循与液相色谱方法评价一样的原则，不再赘述

14、。与液相方法不同的是，气相色谱有多种进样方式，残留溶剂检查常用直接进样法或顶空进样法。针对这两种进样方法不同的特点，评价方法合理性的要点应有所不同。对于直接进样法，应着重评价方法的灵敏度和重复性。目前已普遍用毛细管柱取代填充柱，由于毛细管柱的柱效高，其灵敏度也较填充柱大为提高。但由于毛细管柱直接进样的体积小，一般仅几微升，即便提高供试溶液的浓度，对于测定限量极低的溶剂如：苯、四氯化碳、1，2-二氯乙烷等及对FID检测器响应低的溶剂如：含氯的溶剂，其检测限一般接近或高于限量，灵敏度难以知足测定的需要。测定此类溶剂最好采用顶空进样法，对含卤素的溶剂可改用电子捕获检测器ECD。进样量小也易造成进样重

15、复性差，采用内标法较外标法的结果更为准确。顶空进样法是将大量样品中的残留溶剂富集在顶空瓶上层的气体中，对绝大多数有机溶剂而言，灵敏度较直接进样法大为提高，但顶空进样系统中存在气液两相的平衡问题，对结果准确性的影响因素增加。评价方法能否合理，应着重关注下面三个方面：1顶空条件：顶空瓶的平衡温度和时间是最重要的参数，根据溶解样品的溶剂和待测溶剂的不同性质，到达气液平衡所需的温度和时间可能不同，应有试验数据作为选择的根据，但在申报资料中一般都未提及。判定顶空条件能否适用，一般的规律是：顶空瓶的平衡温度应低于溶解样品所用溶剂的沸点10下面，能知足检测灵敏度即可；对于沸点过高的溶剂，如DMF、DMSO、

16、聚乙二醇等，用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，不适宜采用顶空法；顶空瓶的平衡时间一般应为30至60分钟，才能保证气液两相到达稳态平衡。2供试品和对照品能否平行：由于供试品和对照品的液体部分状态不完全一致而造成的基质效应会直接影响到结果的准确性。采用标准参加法能够消除基质效应，但目前在国内的申报资料中较少见到，其原因可能是方法较为繁琐，且需要消耗大量的样品，对新药研发初期样品量较少的情况或一些贵重的药品不太适用。假如申报资料中提供了回收率数据，就容易判定基质效应的大小，但由于目前对此没有强迫要求，大多数资料都未对回收率进行研究。因而在评价方法时，至少应要求对照品和供试品采用一样的溶剂溶解，且液

17、体部分的体积应完全一致。3重复性：由于顶空进样法存在气液平衡和气体进样的问题，粗放度较大，中国药典2005年版的要求是：内标法连续五次进样的相对标准偏差小于5，外标法的相对标准偏差小于10；欧洲药典则要求相对标准偏差小于15，因而重复性应密切关注。此外，无论是直接进样或顶空进样，都应尽量使供试液中的样品完全溶解，否则当残留溶剂被包裹在样品晶格中时就不能被检测出来，可能造成结果与实际情况完全不符。对溶解性差的样品，可采用不挥发性酸或碱的溶液、高沸点的有机溶剂、混合溶剂等来溶解样品，即便样品在加热的条件下可能被毁坏，只要待测的残留溶剂不被毁坏如：测定酯类溶剂不能采用酸或碱溶液，以免发生分解且样品的

18、热分解产物不影响测定，那么方法也是能够认可的。假如确实有一些药物采用上述条件都不能到达溶解，则可考虑采用充分研磨或超声的方法毁坏药物的构造，使其中的残留有机溶剂释放出来，当然，这种情况下一般应注意进行相应的方法学验证以确定方法的可行性。在国外药典中，对残留溶剂检查的规定有所不同，其中以欧洲药典对残溶检查的要求最为严格，它建立了两个极性不同的色谱系统，对色谱系统的选择、色谱条件、溶液的配制方法、系统适用性试验、方法学验证等都作了具体的规定，以保证样品中所有的残留溶剂都能被逐一的、准确的检测出来，避免发生遗漏的情况；根据样品的详细情况选用其中一个系统测定后，还必须用另一系统加以验证，以保证结果的正

19、确性。欧洲药典的残溶检查方法看似繁琐、呆板，但在其严谨、严格的框架下，结果的可信度、准确度、专属性、耐用性大大提高，值得我们研发者借鉴。编辑：7100网友eagleast：1、专属性。应该是各种测定的成分之间都到达基线分离或者讲分离度到达1.5以上，并且溶剂系统、内标物质之间应该没有互相干扰的现象。这个应该没有什么难处吧？详细施行和一般的含量测定没有什么不同。对于残留溶剂的专属性，一般的理解起来是比拟容易，毕竟一个样品中的残留溶剂的种类是有限的。不太象中药、生物样品等等的HPLC分析，会在色谱图中产生太多的干扰。但是也有例外的，后面再谈。原料药在生产经过中用到过的溶剂都会有残留的可能，它们有的

20、来自投入的反响的原料，有的是原料在最后精制经过中用到的重结晶步骤中的溶剂，有的是物料在喷雾枯燥经过中用到的有机溶剂。这些一般都需要进行控制，选定后进行相关的检测。是不是在原料生产经过中用过的有机溶剂都需要进行控制呢？当然不是。例如，很多原料在最后的精制经过中都有重结晶步骤，为了提高产品的纯度，有时候会用大量的水、乙醇等等溶剂将样品进行洗涤，除去样品中残留的其他溶剂、杂质等等。假如我们先前使用的有机溶剂在最后用的洗涤的溶剂中有比拟强的溶解性，其实，是能够保证最后的产品中含有量在ICH指导原则限度以内的。这时候，我们能够用经过验证的生产工艺条件下生产出来的原料多批次310批次进行检查，假如都远远低

21、于ICH的限度，我们就能够有充足的理由在最后的质量标准中不对该溶剂进行控制了。那么，会有哪些因素会导致干扰检测成分的现象发生呢？a、上面提到的在制造经过中使用到的溶剂。b、样品在分析经过中的降解产生的。对于这点，尤其需要注意。有的样品在分析条件下会降解产生一些成分，而这些成分假如在分析条件下有相应，那么，就特别可能出现干扰测定的情况。但是，不要害怕，这种情况一般产生的干扰峰都会随试验条件、参数的变化而呈现一定的规律：增加，或者减少！例如，假如采用顶空试验，随着样品顶空加温的时间延长，降解产生的杂质峰就会不短增加；假如一般的进样方式，可以以通过改变进样口温度、柱温、检测器温度等等参数，假如是在分

22、析经过中产生的干扰成分，它的量也随着这些条件的改变而出现增加或者减少的。c、还有个别的干扰会来自于分析经过中的配制样品阶段。有的有机溶剂会在配液经过中从环境中溶解到样品中、或者对照品溶液中，这些我也碰到过的。d、至于进样垫、顶空瓶上面的“胶垫等产生的鬼峰，可以以通过空白试验来进行挑选。2、线性。一般都采用测定成分在限度值的1150范围内的线性。假如线性测定的结果表明线性良好，并且为基本通过原点的直线，那么，该方法的线性就不错了。不过，针对线性评估的时候，还应该就回归性、残差等参数进行分析就是我们讲的方差分析，一般对于残留溶剂项目选择的显著水平为5。国内很多人在作资料的时候都仅仅谈到相关系数r，

23、这是特别缺乏的。3、准确度。一般选用测定成分限度的1150选用50150居多范围内的回收率进行评价。对于残留溶剂的回收率在80120范围内就到达要求了。4、精细度。重复性，在限度值的50150范围内，测定成分的回收率的相对标准差为“15下面就能够了。中间精细度，多个试验者、多根试验用色谱柱、改变试验日期等各种因素进行6次以上的试验，从不同试验日的方差分析结果来评价中间精细度。一般采用断定标准为“各测定值平均值的偏差在15%以内。重现性，在不同的实验室进行试验，看测定结果的偏差，用上面两者一样的断定标准即可。5、检测限。主要考察各待测成分在仪器上面相应的最低量甲醇，人们一般用浓度式和质量式。我个人倾向于采用质量式，由于浓度式的弊端在进样量不同时就会暴露出来的。6、定量限。简单，采用回收率到达50150的最小进样量进行确定即可。7、范围。选用限度值的1150即可。8、耐用性。将试验条件中各参数进行变化，就能够得到耐用性评价的结果了。例如，顶空进样时，使将样品气化温度改变10、样品气化时间改变5分钟、色谱柱温度改变10、进样口温度改变20、检测器温度改变20、载气流量改变20、分流比改变10，假如此时各测定组分之间的分离状态良好，各溶剂的定量值与在标准中设定的条件下得到的数值没有统计学差异，就讲明该试验方法耐用性良好。