吡罗红甲基绿染色剂染色的原理.docx

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1、吡罗红甲基绿染色剂染色的原理吡罗红甲基绿染色剂染色的原理吡罗红甲基绿染色剂染色的原理吡罗红甲基绿染色剂染色的原理1、原理与解析(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。(3)盐酸的作用盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。吡罗红G甲基绿染色剂methylgreen-py

2、ronin为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色。即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。注意事项1.材料的选择选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱

3、鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)2.取材要点取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现过多的杂质；取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。4.安全要点用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)1.取材滴：在干净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；刮：用消毒

4、牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。2.水解解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；保：将小烧杯放入装有30温水的大烧杯中保温5分钟。3.冲洗涂片吡罗红甲基绿染色剂染色的原理吡罗红甲基绿染色剂染色的原理冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。4.染色染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；吸：吸去多余染色剂；盖：盖上盖玻片。5.观察低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节明晰；高：转到

5、高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。6.关于吡罗红甲基绿染色剂的问题1试剂质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。假如化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，能够分别购买甲基绿和吡罗红G不能为吡罗红B，然后按A液的第二种方法配制见下文。2染色剂的配制染色剂A液的两种配制方法第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1g，参加到100mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。第二种方法：取甲基绿2g溶于98mL蒸馏水中，取吡罗红G5g溶于95mL蒸馏水中。取6mL甲基绿溶液和2mL吡罗红溶液参加到16mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL备用；再取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL备用。取配好的乙酸钠溶液30mL和稀释的乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的B液缓冲液。染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。