蛋白质含量测定方法的比较.doc
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1、第 卷第 期 年 月 蛋白质含量测定方法的比较 郭 颖娜 , 孙 ( 华北制药股份有限公司,河北 卫 石家庄 ) 摘 要 蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关,蛋白质含量测定涉及到生产和科研的众多领域。目前常用的方法有 凯氏定氮法、双缩脲法()、紫外吸收法、考马斯亮蓝法 )。本文总结各种方法的特点及适用条件,针对不同的待测 样品以及对测定结果准确性的要求不同,我们可以采用不同的方法来测定样品中蛋白质的含量。 关键词 蛋 白质;凯氏定氮法;双缩脲法;紫外吸收法;考马斯亮蓝法 中图分类号 文献标识码 文章编号 () 蛋白质含量测定方法,是生物化学研究中最常 ;与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方
2、法对 用、最基本的分析之一。目前常用的方法有凯氏定氮 比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实 法、双缩脲法()、紫外吸收法、考马斯亮蓝法 验成 本,也降低了对环境的污染。 ( )。其中 法灵敏度最高,比紫外 凯氏定氮法适用范围广泛,测定结果准确,重现 吸收法灵敏 倍,比 法灵敏 倍以 性好,但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式 上。 凯氏定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定 消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品, 氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。这 节省时间,提高了工作效率,适用于批量蛋白质的测 种方法并不能在任何条 件下适用于任何形式的蛋白 定,具有准确
3、、快速、简便、低耗、稳定的优点。 质,每种方法都有其优缺点,在选择方法时应考虑: 双缩脲法 ( ) 实验对测定所要求的灵敏度和精确度;蛋白质的性 原理 质;溶液中存在的干扰物质;测定所要花费的时 双缩脲( )是两个分子脲经 间。 左右加热,放出 个分子氨后得到的产物。在 强碱性 凯 氏定氮法 溶液中,双缩脲与 形成紫色络合物,称为双缩 原理 脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键, 凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸 或能够以 个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都 收和滴定 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物 有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度 与浓硫酸在催化剂作用
4、下共热消化,含氮有机物分解 成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可 产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏 用来测定蛋白质含量。 放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶 特点 液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。 双缩脲法中样品的取用量对测定结果的准确性 特点 有显著影响, 采用 样品, 双缩脲试剂的 凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用 比例具有较高的检测精度。双缩脲法对不同的蛋白质 的方法,是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方 产生颜色的深浅相近,不受温度的影响。可快速测定 法之一,被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏 蛋白质含量,试剂单一,方法简便,但灵
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