专题复习之专题十二现代生物科技专题.pptx

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1、1.基因工程的诞生()。2.基因工程的原理及技术()。3.基因工程的应用()。4.蛋白质工程()。5.植物的组织培养()。6.动物的细胞培养与体细胞克隆()。7.细胞融合与单克隆抗体()。8.动物胚胎发育的基本过程与胚胎工 程的理论基础()。直击考纲9.胚胎干细胞的移植()。10.胚胎工程的应用()。11.转基因生物的安全性()。12.生物武器对人类的威胁()。13.生物技术中的伦理问题()。14.简述生态工程的原理()。15.生态工程的实例()。直击考纲真 题 重 温知 能 回 归 典 题 特 训基因工程与蛋白质工程考点34判断下列有关基因工程和蛋白质工程的叙述判断下列有关基因工程和蛋白质工

2、程的叙述(1)限制性核酸内切酶和限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具连接酶是两类常用的工具酶，用前者可切割烟草花叶病毒的核酸酶，用前者可切割烟草花叶病毒的核酸(2009浙江，浙江，3B和和2010浙江，浙江，2A) ()(2)每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点点(2011浙江，浙江，6B) () 真 题 重 温(3)应用应用DNA探针技术可以检测转基因抗冻番茄植株探针技术可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达中目的基因的存在及其完全表达(2011四川，四川，5D)()(4)自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其

3、自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌整合到细菌DNA上，属于基因工程上，属于基因工程(2010大纲大纲全国全国，5D) ()(5)从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽抗菌性和溶血性均较强的多肽P1。目前在。目前在P1的基础的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是依据的是依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽氨基酸序列设计多条模拟肽(2013广东，广东，3C)()(6)采用蛋白质工程进一步改造采用蛋白质工程进一步改造AFB1解毒酶的基本途解毒酶的基本途

4、径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列苷酸序列(2012天津，天津，8节选节选) ()1.掌握基因工程的主干知识图解掌握基因工程的主干知识图解 知 能 回 归(1)目的基因的获目的基因的获(2)基因表达载体的构建基因表达载体的构建(目的基因启动子终止子标目的基因启动子终止子标记基因记基因)(3)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞导入植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法导入植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法导入动物：显微注射法导

5、入微生物导入动物：显微注射法导入微生物导入微生物细胞：感受态细胞法导入微生物细胞：感受态细胞法(用用Ca2处理处理)(4)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定插入检测：插入检测：DNA分子杂交分子杂交转录检测：转录检测：DNARNA分子杂交分子杂交翻译检测：抗原翻译检测：抗原抗体杂交抗体杂交个体水平检测：抗性接种个体水平检测：抗性接种实验实验2.基本工具基本工具项目项目限制酶限制酶DNA连接酶连接酶载体载体作用作用切割目的基因和切割目的基因和载体载体拼接拼接DNA片段，形片段，形成重组成重组DNA携带目的基因进携带目的基因进入受体细胞入受体细胞作用作用部位部位两个核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形

6、成两个核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键的磷酸二酯键作用作用特点特点(条件条件)识别特定的识别特定的核苷酸序列；核苷酸序列；在特定位点在特定位点上切割上切割EcoliDNA连接酶只连接酶只能连接黏性末端；能连接黏性末端；T4DNA连接酶能连连接酶能连接黏性末端和平末接黏性末端和平末端端能在宿主细胞内稳能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；定存在并大量复制；有多个限制酶切割有多个限制酶切割位点；具有特殊的位点；具有特殊的标记基因标记基因3.基因表达载体的构建过程基因表达载体的构建过程1.(2014广东，广东，25)利用基因工程技术生产羧酸酯酶利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制制剂的流程

7、如图所示，下列叙述正确的是剂的流程如图所示，下列叙述正确的是(双选双选)() 典 题 特 训A.过程需使用逆转录酶过程需使用逆转录酶B.过程需使用解旋酶和过程需使用解旋酶和PCR获取目的基因获取目的基因C.过程使用的感受态细胞可用过程使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备溶液制备D.过程可利用过程可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体受体 细胞细胞解析A项，过程项，过程是通过逆转录获取是通过逆转录获取DNA，逆转录过程需，逆转录过程需要用到逆转录酶。要用到逆转录酶。B项，过程项，过程指的是从指的是从cDNA文库中获取目的基因，不文库中获取目的基因，不需要利用

8、需要利用PCR技术，也用不到解旋酶。技术，也用不到解旋酶。C项，过程项，过程中使用的感受态细胞要用中使用的感受态细胞要用CaCl2溶液制备，溶液制备，而不是用而不是用NaCl溶液制备。溶液制备。D项，过程项，过程鉴定目的基因是否已经导入受体细胞，可以鉴定目的基因是否已经导入受体细胞，可以用标记的目的基因为探针来检测受体细胞中是否存在目用标记的目的基因为探针来检测受体细胞中是否存在目的基因，即利用的基因，即利用DNA分子杂交鉴定。分子杂交鉴定。答案AD2.(2014重庆，重庆，4)下图是利用基因工程培育抗虫植物的示下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是意图。以下相关叙述，

9、正确的是()A.的构建需要限制性核酸内切酶和的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与聚合酶参与B.侵染植物细胞后，重组侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到的染色体上质粒整合到的染色体上C.的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D.只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异解析A项，项，为重组为重组Ti质粒，其构建需要限制性核酸质粒，其构建需要限制性核酸内切酶和内切酶和DNA连接酶参与。连接酶参与。B项，含重组项，含重组Ti质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组Ti质质粒上的目

10、的基因整合到受体细胞粒上的目的基因整合到受体细胞()的染色体上，而并非的染色体上，而并非整个重组整个重组Ti质粒整合到质粒整合到的染色体上。的染色体上。答案DC项，目的基因导入受体细胞后不一定能进行表达，所以项，目的基因导入受体细胞后不一定能进行表达，所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一定具有抗抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一定具有抗虫性状。虫性状。D项，转基因抗虫植株是否培育成功，可以从个体水平上项，转基因抗虫植株是否培育成功，可以从个体水平上进行检测，即观察植株是否具有抗虫性状，如果具有抗虫进行检测，即观察植株是否具有抗虫性状，如果具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异性状

11、则说明发生了可遗传变异(基因重组基因重组)。3.(2014江苏，江苏，23)下列关于基因工程技术的叙述，错误下列关于基因工程技术的叙述，错误的是的是(多选多选)()A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6 个个核核 苷苷酸序列酸序列B.PCR反应中温度的周期性改变是为了反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合聚合酶催化酶催化 不同不同的反应的反应C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必未必 能能正常表达正

12、常表达解析A项，限制性核酸内切酶大多特异性地识别项，限制性核酸内切酶大多特异性地识别6个核苷个核苷酸序列，但也有少数限制性核酸内切酶能识别酸序列，但也有少数限制性核酸内切酶能识别4个、个、5个或个或8个核苷酸序列。个核苷酸序列。答案ABCB项，项，PCR反应中温度周期性变化是为变性、复性和延伸反应中温度周期性变化是为变性、复性和延伸创造条件。另外，耐高温的创造条件。另外，耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，变性和复性过程不需要酶的催化。挥催化作用，变性和复性过程不需要酶的催化。C项，载体质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，供重项，载体质粒上的抗生素抗性基因可

13、作为标记基因，供重组组DNA的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因。的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因。D项，目的基因导入受体细胞后不一定能正常表达。项，目的基因导入受体细胞后不一定能正常表达。4.图图1表示含有目的基因表示含有目的基因D的的DNA片段长度片段长度(bp即碱基对即碱基对)和部分碱基序列，图和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有序列。现有Msp、BamH、Mbo、Sma4种限制种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为：为：CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。下列分析

14、中正确的是下列分析中正确的是()A.若用限制酶若用限制酶Msp完全切割图完全切割图1中中DNA片段，会破坏片段，会破坏2 个个磷酸二酯键磷酸二酯键B.若图若图1所示所示DNA虚线方框内的碱基对被虚线方框内的碱基对被TA替换，替换，用用 限制酶限制酶Sma完全切割后会产生完全切割后会产生3种不同的种不同的DNA片段片段C.若切割图若切割图2中的质粒以便拼接目的基因中的质粒以便拼接目的基因D应选择限制酶应选择限制酶 BamH和和MboD.若用上述条件构建含有目的基因若用上述条件构建含有目的基因D的重组质粒并成功的重组质粒并成功导导 入入细菌体内，则此细菌在添加抗生素细菌体内，则此细菌在添加抗生素A

15、和和B的培养基的培养基中中 不能不能存活存活解析由由题意可知，图题意可知，图1中的目的基因含有中的目的基因含有2个限制酶个限制酶Msp的的切割位点，完全切割后会破坏切割位点，完全切割后会破坏4个磷酸二酯键，故个磷酸二酯键，故A错误；错误；答案D若图中碱基对被替换后，限制酶若图中碱基对被替换后，限制酶Sma的切割位点只有的切割位点只有1个，完个，完全切割后能产生全切割后能产生2种不同的种不同的DNA片段，故片段，故B错误；错误；若切割图若切割图2中的质粒，并且不能破坏目的基因，最好选择限制酶中的质粒，并且不能破坏目的基因，最好选择限制酶BamH进行切割，故进行切割，故C错误；错误；由于插入目的基

16、因后会破坏抗生素由于插入目的基因后会破坏抗生素A抗性基因，但没破坏抗生抗性基因，但没破坏抗生素素B抗性基因，故在含有抗生素抗性基因，故在含有抗生素A和抗生素和抗生素B的培养基中不能存的培养基中不能存活，活，D正确正确。5.(2014新课标新课标，40)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。旱性。回答下列问题：回答下列问题：(1)理论上，基因组文库含有生物的理论上，基因组文库含有

17、生物的_基因；而基因；而cDNA文库中含有生物的文库中含有生物的_基因。基因。解析基因组文库含有生物的全部基因，而基因组文库含有生物的全部基因，而cDNA文库文库中含有生物的部分基因。中含有生物的部分基因。答案全部全部部分部分(2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中基因组文库，再从中_出所需的耐旱基因。出所需的耐旱基因。解析植物植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关，若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立因有关，若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，包含该

18、生物的所有基因，然后该植物的基因组文库，包含该生物的所有基因，然后再从中筛选出所需的耐旱基因。再从中筛选出所需的耐旱基因。筛选筛选(3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物入植物_的体细胞中，经过一系列的过程得到再的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的应检测此再生植株中该基因的_，如果检测，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的_是是否得到提高。否得到提高。解析若若从植物

19、甲中获得该耐旱基因，并将其转移到从植物甲中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，通常采用的方法是农杆菌转化耐旱性低的植物乙中，通常采用的方法是农杆菌转化法。将耐旱基因导入植物乙的体细胞后，经过植物组法。将耐旱基因导入植物乙的体细胞后，经过植物组织培养得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生织培养得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测该耐旱基因是否合成了相应植株中正确表达，应检测该耐旱基因是否合成了相应的蛋白质，即检测此再生植株中该基因的表达产物，的蛋白质，即检测此再生植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，说明已经合成了相应的蛋白质，如果检测结果呈阳性，说

20、明已经合成了相应的蛋白质，这时再进行个体生物学检测，即在田间试验中检测植这时再进行个体生物学检测，即在田间试验中检测植株的耐旱性是否得到提高。株的耐旱性是否得到提高。答案乙表达产物耐旱性乙表达产物耐旱性(4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为耐旱与不耐旱植株的数量比为31时，则可推测该耐旱时，则可推测该耐旱基因整合到了基因整合到了_(填填“同源染色体同源染色体的一条上的一条上”或或“同源染色体的两条上同源染色体的两条上”)。解析假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱

21、和不耐旱植株的数量比为代中耐旱和不耐旱植株的数量比为31，符合基因的，符合基因的分离定律，说明得到的二倍体转基因耐旱植株为杂合分离定律，说明得到的二倍体转基因耐旱植株为杂合子，因此可推测该耐旱基因只整合到了同源染色体的子，因此可推测该耐旱基因只整合到了同源染色体的一条上一条上。同源染色体的一条上同源染色体的一条上6.(2014山东，山东，36)人组织纤溶酶原激活物人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种是一种重要的药用蛋白，可在转重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。基因母羊的羊乳中获得。流程如下：流程如下：(1)htPA基因与载体用基因与载体用_切割切割后，通过后，通过DNA连接

22、酶连接，以构建重组表达连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用，可采用_技术技术。解析用同种限制性核酸内切酶对目的基因和载体进行用同种限制性核酸内切酶对目的基因和载体进行切割，以形成相同的黏性末端。检测目的基因是否已插切割，以形成相同的黏性末端。检测目的基因是否已插入受体细胞入受体细胞DNA，常用，常用DNA分子杂交技术。分子杂交技术。同种限制性核酸内切酶同种限制性核酸内切酶(或同种或同种限限制制酶酶)DNA分子杂交分子杂交(或核酸探针或核酸探针)(2)为获取更多的卵为获取更多的卵(母母)细胞，要对供体母羊注射促性腺细胞，

23、要对供体母羊注射促性腺激素，使其激素，使其_。采集的精子需要经过采集的精子需要经过_，才具备受精能力。，才具备受精能力。解析对供体母羊注射促性腺激素可以使其超数排卵，对供体母羊注射促性腺激素可以使其超数排卵，采集的精子需要经过获能处理后才具备受精能力。采集的精子需要经过获能处理后才具备受精能力。超数排卵超数排卵获能获能(处理处理)( 3 ) 将 重 组 表 达 载 体 导 入 受 精 卵 常 用 的 方 法 是将 重 组 表 达 载 体 导 入 受 精 卵 常 用 的 方 法 是_，为了获得母羊，移植前需对已成功转入，为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行目的基因的胚胎进行_。利

24、用胚胎分割和胚胎移。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的的_。解析将重组表达载体导入受精卵将重组表达载体导入受精卵(动物细胞动物细胞)常用的方常用的方法是显微注射法。为了获得母羊，需要对胚胎进行性别法是显微注射法。为了获得母羊，需要对胚胎进行性别鉴定。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因鉴定。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，依据的原理是早期胚胎细胞的全能性。个体，依据的原理是早期胚胎细胞的全能性。显微注射法显微注射法性别鉴定性别鉴定全能性全能性(4)若在转若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到

25、基因母羊的羊乳中检测到_，说明目的基因成功表达。，说明目的基因成功表达。解析目的基因成功表达的标志是在转基因母羊的羊乳目的基因成功表达的标志是在转基因母羊的羊乳中检测到中检测到htPA，即人组织纤溶酶原激活物，即人组织纤溶酶原激活物。htPA(或人或人组织组织纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物)7.(2014海南，海南，31)下面是将某细菌的基因下面是将某细菌的基因A导入大肠杆导入大肠杆菌内，制备菌内，制备“工程菌工程菌”的示意图。请据图回答：的示意图。请据图回答：(1)获得获得A有两条途径：一是以有两条途径：一是以A的的mRNA为模板，在为模板，在_的催化下，合成互补的单链的催化下，合成互补的单链

26、DNA，然后在，然后在_作用下合成双链作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的是根据目标蛋白质的_序列，推测出相应的序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的的_序列，再通过化学方法合成所需基因。序列，再通过化学方法合成所需基因。解析利用利用逆转录法合成目的基因的过程是：以逆转录法合成目的基因的过程是：以mRNA为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA，然后，然后在在DNA聚合酶的作用下，合成双链聚合酶的作用下，合成双链DNA分子；根据蛋白分子

27、；根据蛋白质工程合成目的基因的过程是：根据目标蛋白质的氨基质工程合成目的基因的过程是：根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测相应的酸序列，推测相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配序列，然后按照碱基互补配对原则，推测对原则，推测DNA中脱氧核苷酸的排列顺序，通过化学中脱氧核苷酸的排列顺序，通过化学方法合成。方法合成。答案逆转录酶逆转录酶DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷酸聚合酶氨基酸脱氧核苷酸(2)利用利用PCR技术扩增技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加时，需要在反应体系中添加的有机物质有的有机物质有_、_、4种脱氧核苷酸和耐热性的种脱氧核苷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以聚合酶，扩增过程可以在在

28、PCR扩增仪中完成。扩增仪中完成。解析PCR过程中需要酶、底物、模板、引物和能量过程中需要酶、底物、模板、引物和能量等条件。等条件。引物引物(目的基因或目的基因或A基因基因)模板模板( 3 ) 由由 A 和 载 体和 载 体 B 拼 接 形 成 的拼 接 形 成 的 C 通 常 称 为通 常 称 为_。解析目的基因和载体结合，形成基因表达载体。目的基因和载体结合，形成基因表达载体。基因表达载体基因表达载体(4)在基因工程中，常用在基因工程中，常用Ca2处理处理D，其目的是，其目的是_。解析在利用大肠杆菌做受体细胞时，需要先用在利用大肠杆菌做受体细胞时，需要先用Ca2处处理，使之成为感受态细胞，

29、有利于其吸收重组理，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子。分子。使其使其成为成为感受态感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子分子真 题 重 温知 能 回 归 典 题 特 训细胞工程考点35判断下列有关细胞工程的叙述判断下列有关细胞工程的叙述(1)在在“羊胎儿皮肤组织块羊胎儿皮肤组织块成纤维细胞成纤维细胞”过程中，需过程中，需要用胰蛋白酶处理，在培养过程中，将成纤维细胞置于要用胰蛋白酶处理，在培养过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，的气体环境中，CO2的作用是维持培养基的的作用是维持培养基的pH稳定，另外为便于清除代谢产物，防止细胞产物

30、积累对稳定，另外为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换培养液细胞自身造成危害，应定期更换培养液(2012山东，山东，35(2)和和2010福建，福建，32(3)整合整合) () 真 题 重 温(2)不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过不同种植物原生质体融合的过程属于植物体细胞杂交过程，该技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种程，该技术可克服生殖隔离的限制，培育远缘杂种(2009全全国卷国卷，4AB) ()(3)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞，培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞，克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变

31、克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变(2010浙江，浙江，4AB) ()(4)二倍体细胞和恶性细胞系一样传代培养次数通常是无限二倍体细胞和恶性细胞系一样传代培养次数通常是无限的的(2010浙江，浙江，4CD) ()(5)二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株，若用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成植株，若用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子人工种子(2011江苏，江苏，16BC) ()1.植物体细胞杂交与单克隆抗体制备过程比较植物体细胞杂交与单克隆抗体制备过程比较 知 能 回 归步骤步骤植物体细胞杂

32、交过程植物体细胞杂交过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程第一步第一步原生质体原生质体的制备的制备(酶解法酶解法)正常小鼠免疫处理正常小鼠免疫处理第二步第二步原生质体融合原生质体融合(物、化法物、化法)动物细胞融合动物细胞融合(物、化、物、化、生物法生物法)第三步第三步杂种植株的筛选与培养杂种植株的筛选与培养杂交瘤细胞筛选与培养杂交瘤细胞筛选与培养第四步第四步杂种植株的诱导与鉴定杂种植株的诱导与鉴定单克隆抗体的提纯单克隆抗体的提纯相同点相同点两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称为克隆，都不涉及减数分裂；都不涉

33、及减数分裂；均为无菌操作，需要适宜的温度、均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件等条件(1)诱导融合的方法分别有哪些？融合的细胞类型有哪诱导融合的方法分别有哪些？融合的细胞类型有哪几种几种？提示提示诱导植物体细胞的原生质体融合的方法主要诱导植物体细胞的原生质体融合的方法主要有离心、振动、电激或用聚乙二醇作为诱导剂。有离心、振动、电激或用聚乙二醇作为诱导剂。动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒病毒(诱导动物细胞融合的特有因素诱导动物细胞融合的特有因素)、电激等。、电激等。融合的细胞类型：前者融合的细胞类型：前者AA、BB、AB。后者。后者

34、瘤瘤、瘤瘤、B瘤、瘤、BB。(2)各自的原理分别有哪些？各自的原理分别有哪些？提示提示前者有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，后前者有细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，后者有细胞膜的流动性和细胞增殖者有细胞膜的流动性和细胞增殖。2.掌握克隆动物培育掌握克隆动物培育流程图流程图D个体的性别、性状与哪个个体相同？个体的性别、性状与哪个个体相同？提示提示根据发育成新个体根据发育成新个体D的重组细胞核由动物的重组细胞核由动物B提供，提供，而性别及大多数遗传性状是由核内遗传物质决定的，故而性别及大多数遗传性状是由核内遗传物质决定的，故B、D两者的性别及大多数遗传性状相同。两者的性别及大多数遗传性状相同。

35、1.(2014浙江，浙江，3)下列关于动物细胞培养的叙述，正确的下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是是()A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状 典 题 特 训解析A项，连续细胞系的细胞一般都培养了多次，二倍项，连续细胞系的细胞一般都培养了多次，二倍体核型发生了改变，大多数细胞具有异倍体核型。体核型发生了改变，大多数细胞

36、具有异倍体核型。答案BB项，细胞癌变是由基因突变引起的，如果癌细胞在一定项，细胞癌变是由基因突变引起的，如果癌细胞在一定条件下条件下(如用秋水仙胺等药物治疗如用秋水仙胺等药物治疗)，则有可能恢复成正常，则有可能恢复成正常细胞。细胞。C项，细胞克隆的最基本的要求是：必须确定所建立的克项，细胞克隆的最基本的要求是：必须确定所建立的克隆来源于单个细胞。隆来源于单个细胞。D项，未经克隆化培养的细胞系具有异质性。项，未经克隆化培养的细胞系具有异质性。2.下图表示四倍体兰花叶片通过植物组织培养成植株的过程，下图表示四倍体兰花叶片通过植物组织培养成植株的过程，下列相关叙述中正确的是下列相关叙述中正确的是(双

37、选双选)()A.过程中发生了有丝分裂和减数分裂过程中发生了有丝分裂和减数分裂B.阶段需要生长素而阶段仅需要细胞分裂素阶段需要生长素而阶段仅需要细胞分裂素C.阶段为脱分化过程阶段为脱分化过程D.此兰花的花药离体培养所得的植株体细胞有两个染色体组此兰花的花药离体培养所得的植株体细胞有两个染色体组解析过程均发生了有丝分裂。植物组织培养的过程均发生了有丝分裂。植物组织培养的各个阶段均需要生长素和细胞分裂素刺激。各个阶段均需要生长素和细胞分裂素刺激。阶段细胞阶段细胞失去分化状态变成愈伤组织，为脱分化过程。兰花是四失去分化状态变成愈伤组织，为脱分化过程。兰花是四倍体，花粉细胞含两个染色体组，经离体培养所得

38、的植倍体，花粉细胞含两个染色体组，经离体培养所得的植株体细胞含两个染色体组。株体细胞含两个染色体组。答案CD3.如图为小白鼠的胚胎干细胞分化示意图。如图为小白鼠的胚胎干细胞分化示意图。直到今天也不能用类似直到今天也不能用类似_(某种植物细某种植物细胞工程的技术手段胞工程的技术手段)的方法直接获得完整的动物个体。的方法直接获得完整的动物个体。因此，培育因此，培育“克隆鼠克隆鼠”的过程，实际是通过的过程，实际是通过_来来实现的。实现的。请回答：请回答：(1)图中分化程度最低的是图中分化程度最低的是_。在体外培养条。在体外培养条件下，培养液中加入件下，培养液中加入_因子，可诱导胚胎干细胞因子，可诱导

39、胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。科学家将小鼠已分化体细向不同类型的组织细胞分化。科学家将小鼠已分化体细胞的细胞核移入卵母细胞的细胞质中，培育出胞的细胞核移入卵母细胞的细胞质中，培育出“克隆克隆鼠鼠”，这里用卵母细胞的原因，这里用卵母细胞的原因是是_。解析图中分化程度最低的是胚胎干细胞。在体外培养条图中分化程度最低的是胚胎干细胞。在体外培养条件下，培养液中加入分化诱导因子，可诱导胚胎干细胞向件下，培养液中加入分化诱导因子，可诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。科学家将小鼠已分化体细胞的不同类型的组织细胞分化。科学家将小鼠已分化体细胞的细胞核移入卵母细胞的细胞质中，培育出细胞核移入卵母细胞

40、的细胞质中，培育出“克隆鼠克隆鼠”，这，这里用卵母细胞的原因是：卵母细胞可以给它提供表达全能里用卵母细胞的原因是：卵母细胞可以给它提供表达全能性的环境。直到今天也不能用类似植物组织培养性的环境。直到今天也不能用类似植物组织培养(某种植某种植物细胞工程的技术手段物细胞工程的技术手段)的方法直接获得完整的动物个体。的方法直接获得完整的动物个体。因此，培育因此，培育“克隆鼠克隆鼠”的过程，实际是通过的过程，实际是通过(动物体细胞动物体细胞)核移植来实现的。核移植来实现的。答案胚胎干细胞分化诱导卵母细胞可以给它提供表胚胎干细胞分化诱导卵母细胞可以给它提供表达全能性的环境植物组织培养达全能性的环境植物组

41、织培养(动物体细胞动物体细胞)核移植核移植(2)在培育转基因鼠的过程中，人们将关键基因通过逆转在培育转基因鼠的过程中，人们将关键基因通过逆转录病毒转入小白鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细录病毒转入小白鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞。在该技术中，逆转录病毒是关键基因进入成纤维细胞。在该技术中，逆转录病毒是关键基因进入成纤维细胞的胞的_，它能够携带外源基因进入受体细胞，它能够携带外源基因进入受体细胞。解析在培育转基因鼠的过程中，人们将关键基因通过在培育转基因鼠的过程中，人们将关键基因通过逆转录病毒转入小白鼠的成纤维细胞，使其变成多功能逆转录病毒转入小白鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞。

42、在该技术中，逆转录病毒是关键基因进入成纤干细胞。在该技术中，逆转录病毒是关键基因进入成纤维细胞的载体，它能够携带外源基因进入受体细胞。维细胞的载体，它能够携带外源基因进入受体细胞。载体载体(3)在制取单克隆抗体过程中，用在制取单克隆抗体过程中，用_细胞细胞与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌_的的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞。解析在制取单克隆抗体过程中，用效应在制取单克隆抗体过程中，用效应B淋巴细胞淋巴细胞(浆浆细胞细胞)与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌与骨髓瘤细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。特异性抗体的杂交瘤细胞。

43、效应效应B淋巴淋巴(浆浆)特异性抗体特异性抗体4.(2014新课标新课标，40)某研究者用抗原某研究者用抗原(A)分别免疫分别免疫3只只同种小鼠同种小鼠(X、Y和和Z)，每只小鼠免疫，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数的血清最大稀释倍数)，结果如图所示。，结果如图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞淋巴细胞(染染色体数目为色体数目为40条条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞瘤细胞(染

44、色体数目为染色体数目为60条条)按一定比例加入试管中，再按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：回答下列问题：(1)制备融合所需的制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过以上，则小鼠最少需要经过_次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这这3只免疫小鼠中，最适合用于制备只免疫小鼠中，最适合用于制

45、备B淋巴细胞的是淋巴细胞的是_小小鼠，理由是鼠，理由是_。解析据图分析可知，第四次注射后据图分析可知，第四次注射后X、Y、Z小鼠的血小鼠的血清抗体效价几乎都达到清抗体效价几乎都达到16 000以上，小鼠以上，小鼠Y的血清抗体的血清抗体的效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。的效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。4YY小鼠的血清抗体效价最高小鼠的血清抗体效价最高(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能胞和杂交瘤细胞外，可能还有还有_，体系中出体系中出现多种类型细胞的原因是现多种类型细胞的原因是_。解析融合体系中除了未融

46、合的细胞和杂交瘤细胞之外，融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和B淋巴细胞的自身融淋巴细胞的自身融合细胞。细胞的融合是随机的，并且不可能所有细胞都合细胞。细胞的融合是随机的，并且不可能所有细胞都融合，故体系中会出现多种类型的细胞。融合，故体系中会出现多种类型的细胞。B淋巴细胞相互融合淋巴细胞相互融合形成形成的的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，细胞融合是随机的，且且融合融合率率达不到达不到100%(3)杂交瘤细胞中有杂交瘤细胞中有_个个细胞核，染色体数目最多是细胞核，染色体数目

47、最多是_条条。解析动物细胞融合后形成的是具有原来两个或多个细动物细胞融合后形成的是具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。杂交瘤细胞的细胞核中的染色胞遗传信息的单核细胞。杂交瘤细胞的细胞核中的染色体数目最多为体数目最多为4060100(条条)。1100(4)未融合的未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是原因是_。解析正常细胞的分裂次数是有限的，且经过免疫的正常细胞的分裂次数是有限的，且经过免疫的B淋巴细胞高度分化，不能无限增殖，而是经多次传代培淋巴细胞高度分化，不能无限增殖，而是经多次传代培养后逐渐衰老死亡。养后逐渐衰老死亡。不能无限增殖不能

48、无限增殖5.科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：(1)利用利用_技术制备单克隆抗体，技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、常用聚乙二醇、_、电激等诱导因素诱、电激等诱导因素诱导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的能分泌所需抗体的_细胞。细胞。解析在利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程在利用动

49、物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程中，常用聚乙二醇、灭活的病毒、电激等方法诱导细胞中，常用聚乙二醇、灭活的病毒、电激等方法诱导细胞融合，融合后的细胞经多次筛选和细胞培养，最终获得融合，融合后的细胞经多次筛选和细胞培养，最终获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。答案动物细胞融合灭活的病毒杂交瘤动物细胞融合灭活的病毒杂交瘤(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：体，请完成设计方案：取取_细胞的细胞核，移植到去核的能细胞的细胞核，移植到去核的能够够_的细胞中，构成重组细胞。的细胞中

50、，构成重组细胞。(假定移植后细假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响胞核中基因的表达状态不受影响)将重组细胞在将重组细胞在_条件下做大规模培养或注射到条件下做大规模培养或注射到小鼠小鼠_内增殖，以获得大量单克隆抗体内增殖，以获得大量单克隆抗体。解析产生单克隆抗体的细胞应具有两个特点：能无限产生单克隆抗体的细胞应具有两个特点：能无限增殖和产生特定抗体。若用核移植技术构建重组细胞首增殖和产生特定抗体。若用核移植技术构建重组细胞首先取特定抗原刺激的先取特定抗原刺激的B淋巴细胞的细胞核，移植到去核淋巴细胞的细胞核，移植到去核的能够无限增殖的细胞中，构成重组细胞；然后将重组的能够无限增殖的细胞中，构成