茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响-武政华.pdf

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1、 分类号： R698+.2 学校代码： 10114 密 级： 公开 学 号： 2012200762 茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响 Effects of tea polyphenols on germ cell apoptosis in rats with experimental varicocele 研 究 生：武政华 指导教师：张雁钢 教授 专业名称：外科学 研究方向：泌尿系肿瘤与循证医学 学位类型：专业学位 所在学院：第一临床医学院 中国 山西 二一五年五月二十日目 录 中文摘要 . 英文摘要 . III 常用缩写词中英文对照表 . V 前 言 . 1 1 材料与方法

2、. 2 1.1 实验材料 . 2 1.2 主要试剂与仪器 . 2 1.3 实验主要测定指标与方法 . 3 1.4 统计分析 . 5 2 结 果 . 7 2.1 HE 染色 . 7 2.2 免疫组化 . 7 2.3 TUNLE . 7 2.4 附图 . 8 3 讨 论 . 24 4 结 论 . 26 参考文献 . 27 综 述 . 29 致 谢 . 40 在学期间 承担 /参与的科研课题与研究成果 . 41 个人简历 . 42 山西医科大学硕士学位论文 I 茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响 摘 要 目的 ： 研究茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡因子的影响，分析茶多酚对精索静

3、脉曲张大鼠生精功能是否具有保护作用。 方法： 青春期清洁 Wistar 大鼠 32 只随机分为四个组 ，每组 8 只： I 假手术组 (仅模拟手术过程 ,不结扎血管 )、 II 模型组 (建立左精索静脉曲张模型 )、茶多酚干预组 2 组（建立精索静脉曲张模型并分别给予不同浓度的茶多酚干预： III 茶多酚低剂量组、IV 茶多酚高剂量组）。建立左侧精索静脉曲张模型 4 周后，假手术组及模型组均给予生理盐水 1ml/100g，茶多酚低剂量组及茶多酚高剂量组分别给予茶多酚 10mg/kg（用生理盐水配置成浓度为 1ml/1mg/100g）、 40mg/kg（用生理盐水配置成浓度为1ml/4mg/10

4、0g）灌胃， 1 次 /日，持续 4 周。 4 周后四组大鼠均处死分别取左侧睾丸组织，检测 HIF-1、 Bcl-2、 bax、 CytC 和 caspase-3 在睾丸组织中的表达及生精细胞的凋亡并计算凋亡指数 (AI)。 结果： 茶多酚干预组大鼠 Bcl-2 表达高于模型组，低于假手术组；茶多酚低剂量组大鼠 Bcl-2 表达低于茶多酚高剂量组，差异有统计学意义（ P0.05）。茶多酚干预组大鼠 HIF-1、 bax、 CytC 和 caspase-3 的表达低于 模型组，高于假手术组；茶多酚低剂量组大鼠 HIF-1、 bax、 CytC 和 caspase-3 的表达高于茶多酚高剂量组，差

5、异有统计学意义（ P0.05）。假手术组 AI 最低，茶多酚干预组 AI 低于模型组，茶多酚高剂量组 AI 低于茶多酚低剂量组，差异有统计学意义（ P0.05）。 结论： 山西医科大学硕士学位论文 II 1、 茶多酚能显著降低精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞的凋亡。 2、 茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精功能有保护作用。 关键词： 精索静脉曲张 ； 生精细胞 ； 茶多酚 ； 凋亡 山西医科大学硕士学位论文 III Effects of tea polyphenols on germ cell apoptosis in rats with experimental varicocele Abstract

6、 Objective: To study the effect of tea polyphenols on germ cell apoptosis and possible protection to spermatogenic function. in rats with experimental varicocele. Methods: Thirty-two adolescent male Wistar rats were randomly divided into four groups: sham-operated group (Group ), experimental left v

7、aricocele group(Group ) (They were both fed with normal saline four weeks later) and two experimental varicocele groups treated with tea polyphenols 10mg/kgd-1 (TP low dose group, Group ) and 40 mg/kgd-1 (TP high dose group, Group ） 2427 ， respectively four weeks later. Experim ental varicocele was

8、induced by partial ligation of the left renal vein (Turner method) in rats. After four weeks, all rats were sacrificed and harvested for left testes to evalu ate the expression of HIF-1,Bcl-2, bax ,CytC and caspase-3 by immunohisto chemistry .The apoptotic index (AI) was calculated as the number of

9、apoptotic cells. Results: The expression of Bcl-2 in the tea polyphenol groups was higher than that of the model group, and it was lower than that of the sham operation group,(P0.05); The expression of Bcl-2 in the TP low dose group was lower than that of the TP high dose group,(P0.05). The expressi

10、on of HIF-1, Bax, CytC and caspase-3 of the tea polyphenol groups was lower than that of the model group, and it was higher than that of the sham operation group,(P0.05); The expression of HIF-1, Bax, CytC and caspase-3 of the TP 山西医科大学硕士学位论文 IV low dose group was higher than that of the TP high dos

11、e group,(P0.05). The AI measurement in the model group was higher than other groups while the TP high dose group was lower than TP low dose group ,(P0.05). Conclusions： These results show that tea polyphenols can reduce the germ cell apoptosis dose-dependently, and suggest it may has a protective ro

12、le in varicocele-induced testicular dysfunction. Key words : Varicocele;Infertility;Tea polyphenols;Apoptosis 山西医科大学硕士学位论文 V 常用缩写词中英文对照表 英文缩写 英文名称 中文名称 AI Apoptosis index 凋亡指数 Bcl-2 Bcl-2 Bcl-2 Caspase-3 caspase-3 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 CytC CytC 细胞色素 C Bax Bcl-2 Assaciated X protein bax ELV experimental l

13、eft varicocele 实验性左侧精索静脉曲张 HIF-1 hypoxia inducible factor-1 缺氧诱导因子 -1 TUNEL Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay 原位末端转移酶标记技术 VC Varicocele 精索静脉曲张 山西医科大学硕士学位论文 1 前 言 精索静脉曲张 （ varicocele,VC） 是 导致男性不育的主要原因之一，在普通男性人群的发病率约为 1520%，在不育症患者中发病率达 3540%1,精索静脉曲张患者合并

14、生精功能异常的几率达 54. 8%2。生精细 胞可能会受到精索静脉曲张的影响而出现异常的细胞凋亡，从而导致精液异常 ,引起男性不育症的发生。细胞凋亡一般情况又可称为细胞的程序性死亡，是生物体新陈代谢的一组基本的分子生物学机制 , 这种机制在精子发生过程中可以起到清除多余或异常细胞的作用，可以调控产生精子的数量 3,4 , 是一种正常的生理现象，但如果生精细胞出现病态的凋亡异常增多 , 则会使精子的生成数量减少 , 从而出现男性的生育功能障碍 5。 生精细胞的凋亡受到多种基因系统的调控，目前经大量研究证实参与生精细胞凋亡的调控因子有 HIF-1、 Bcl-2/bax 基因族、 CytC、 cas

15、pase-3、 Fas/FasL 系统、 P53 基因族、 Hsp70 基因族等，这些凋亡因子的表达对睾丸生精细胞的凋亡起到至关重要的作用。 茶多酚（ Tea Polyphenols， TP）是 茶叶 中所含的各种多酚类物质的统称，可分为黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，其中最主要的成分为儿茶素（黄烷醇类）。 茶多酚是茶叶中具有保健作用的主要成分之一，具有极 强的抗氧化及清除有害自由基的能力。研究表明 6，每人每天茶多酚的摄入量超过 160mg 即可对机体的亚硝化过程产生抑制和阻断作用，超过 480mg 时上述作用达到最强。 茶多酚具有 极强 的 抗氧化 作用，其抗氧化 作用比 BHT（丁基羟基茴香醚） 、 BHA（二丁基羟基甲苯）、异维生素 C 钠（异 VC-Na）、维生素 C（ VC）、维生素 E（ VE）都强，抗氧化效价比VE 高 1020 倍 7，是一种无毒、无 副作用的天然食品氧化剂 8。本实验通过建立精索静脉曲张动物模型，然后给予茶多酚干预，探索茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精功能的作用机制，即凋亡的影响。