优质课DNA的粗提取与鉴定ppt课件.ppt

《优质课DNA的粗提取与鉴定ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《优质课DNA的粗提取与鉴定ppt课件.ppt（27页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质、蛋白质和脂质等在等在物理和化学性质方面的差异，物理和化学性质方面的差异，提取提取DNADNA，去除其他成分。去除其他成分。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。

2、在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛

3、围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。思考题：思考题：能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？能否选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料？为什么？不能。不能。因为哺乳动物成熟的

4、红细胞中无细胞核因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。2 2、植物细胞、植物细胞植物细胞植物细胞需要先需要先用一定的洗涤剂溶用一定的洗涤剂溶解细胞膜解细胞膜 实 例 ： 提 取 洋 葱 实 例 ： 提 取 洋 葱DNADNA时，在切碎的洋时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分剂和食盐，进行

5、充分的搅拌和研磨，过滤的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液后收集研磨液有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。讨论：如果研磨不充分，会对讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？实验结果产生怎样的影响？有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。思考：加入蒸馏水的目的是什么？加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出DNA思考题：搅拌

6、的目的（注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能过快过猛，防止打碎DNA ）加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出DNA思考：这个步骤过滤获得什么？获得含核物质的滤液（获取含DNA的滤液）（注意：此时释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起，应用34层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质）有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。方案一、在滤液中加入方案一、在滤液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度

7、为2mol/L2mol/L，过滤除去，过滤除去不溶的杂质不溶的杂质，再加入蒸馏水，调节，再加入蒸馏水，调节NaClNaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，过滤除去，过滤除去溶溶液中的杂质液中的杂质，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 思考：加入2mol/L的的NaCl溶液，搅拌溶液，搅拌1min，注意应沿一个方向，注意应沿一个方向，目的是？目的是？目的是使DNA充分溶解思考：过滤溶解有DNA的2mol/L的的NaCl溶液，获得什么？溶液，获得什么？含DNA的滤液思考：这一步过滤的目的是？含DNA

8、的滤液，除去不溶的杂质有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。DNA的析出的析出 将溶液中的将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤与其他杂质分离，这一步骤是实验成败的关键。是实验成败的关键。 加加蒸馏水蒸馏水降低降低NaCl溶液浓度，使溶液浓度，使DNA析出。析出。 实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻轻地沿一沿一个方向个方向不停地均匀搅拌，以利于不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠分子的附着和缠绕。同时绕。同时应注意控制加水量应注意控制加水量，使使

9、NaCl溶液的始终浓度溶液的始终浓度为为0.10.2 mol/L。加水太多、溶液过稀，会使。加水太多、溶液过稀，会使DNA分子又重新溶解。分子又重新溶解。 注意：在析出DNA的黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。思考：加蒸馏水的目的是？调节调节NaCl溶液物质的量为接近溶液物质的量为接近014mol/L，使，使DNA黏黏稠物最大限度的析出稠物最大限度的析出思考：这一步搅拌的目的是？（轻轻地沿一个方向不停地均与搅拌）稀释稀释NaCl溶液溶液,

10、析出析出DNA黏稠物黏稠物思考：这一步过滤含DNA黏稠物的黏稠物的014mol/L的的NaCl溶液，获得什么？溶液，获得什么？获得DNA黏稠物（黏稠物（ 纱布上的纱布上的DNA黏稠物）黏稠物）思考：过滤的目的？获得DNA黏稠物。除去溶液中的杂质黏稠物。除去溶液中的杂质有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？ 1 1、用高盐浓度的溶液溶解、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除，能除去去在高盐中不能溶解的杂质在高盐中不能

11、溶解的杂质； 2 2、用低盐浓度使、用低盐浓度使DNA析出，能除去析出，能除去溶溶解在低盐溶液中的杂质。解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复溶解与析出因此，通过反复溶解与析出DNA，就能，就能够除去与够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。 有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。思考：搅拌的目的(玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌)卷

12、起卷起DNA丝状物，获取含杂质较少的丝状物，获取含杂质较少的DNA有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、

13、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。二苯胺试剂的配制称取1.5g二苯胺，溶于100ml冰醋酸中，再加入1.5ml浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10ml的上述溶液中再加入0.1ml体积分数为0.2%的乙醛溶液。三、操作提示有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾

14、客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 获得含核物质的滤液获得含核物质的滤液 过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 获取纱布上的获取纱布上的DNADNA粘稠物粘稠物 过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2 2mol/LNaCl溶液溶液 得到含得到含DNA的滤液的滤液 本实验中有三次过滤本实验中有三次过滤 , ,获得什么？获得什么？有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。 第一次搅

15、拌加蒸馏水的鸡血细胞液第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出，从而释放出DNA 第二次搅拌加第二次搅拌加2 2mol/LNaCl溶液的滤液溶液的滤液目的是使DNA充分溶解在2 2mol/LNaCl溶液中溶液中 第三次搅拌加蒸馏水至第三次搅拌加蒸馏水至0.140.14mol/LNaCl溶液溶液稀释稀释NaCl溶液溶液, ,析出析出DNA黏稠物黏稠物 第四次搅拌放入第四次搅拌放入2 2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物溶液中纱布上的粘稠物使使DNADNA黏稠物充分溶解在黏稠物充分溶解在2 2mol/LNaCl

16、溶液中溶液中 第五次搅拌体积分数为第五次搅拌体积分数为95%95%的酒精的酒精 实验中有五次用玻璃棒搅拌实验中有五次用玻璃棒搅拌? ?分别有什么作用分别有什么作用? ? 卷起卷起DNA丝状物，获取含杂质较少的丝状物，获取含杂质较少的DNA有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。本实验两次用蒸馏水本实验两次用蒸馏水第一次：第一次：加速了鸡血细胞的破裂加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂)，从，从而释放出而释放出DNA第二次：第二次：调节调节NaCl溶液物质的量为溶液物质的量

17、为014mol/L，使，使DNA黏稠物最大限度的析出黏稠物最大限度的析出本实验两次析出本实验两次析出DNADNA第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI溶液析出溶液析出DNADNA，过滤，过滤除去溶液中的杂质除去溶液中的杂质第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精，获得含杂质较少的的酒精，获得含杂质较少的DNA丝状物丝状物（利用（利用DNA容易酒精溶液，但是细胞中的容易酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精）某些蛋白质则溶于酒精）有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既

18、开放又相互信任的合作环境。实验成功的关键及注意事项1.破碎细胞，释放DNA的过程中，若是血细胞，加水后必须充分搅拌，不应少于5min；若是菜花，则应与研磨液混合，研磨时间不少于10min2.用冷酒精浓缩和沉淀DNA时，所用的95%的酒精必须经过预冷后才能使用3.在用玻璃棒搅拌时，玻璃棒不能直接插烧杯底部，并且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子4.由于玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基业带电荷而被吸附于玻璃表面，故实验中用塑料杯和试管可减少损失有利于学习和创新的组织管理机制，创造充满活力的创新激励机制，以市场为导向，以顾客价值追求为中心的企业文化氛围，依赖既开放又相互信任的合作环境。1.材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够实验现象不明显的原因分析2.加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏3.二苯胺配制时间过长，变成浅蓝色，影响鉴定效果4.析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水一次快速加入，影响实验结果5.实验中有多次搅拌，但是其目的及操作方法是不同的，操作时不注意区分，影响实验结果（注意：搅拌都沿一个方向进行）