第三课时--动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

《第三课时--动物细胞融合与单克隆抗体.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第三课时--动物细胞融合与单克隆抗体.ppt（27页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、2.2.22.2.2动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体植物细胞植物细胞 A A（番茄）番茄）植物细胞植物细胞 B B（马铃薯）马铃薯）去除细胞壁去除细胞壁原生质体原生质体 A A原生质体原生质体 B B原生质体融合原生质体融合杂种细胞杂种细胞杂种植株杂种植株( (番茄马铃薯番茄马铃薯) ) 1、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？ 2、植物体细胞杂交诱导原生质体融合、植物体细胞杂交诱导原生质体融合 常用的方法有哪些？常用的方法有哪些？3、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？

2、方法吗？无需，因为动物细胞无细胞壁。无需，因为动物细胞无细胞壁。物理方法：离心、振动、电激；化学方法：聚乙二醇物理方法：离心、振动、电激；化学方法：聚乙二醇物理法：电激、振动、离心等物理法：电激、振动、离心等化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEGPEG）生物法：灭活的病毒（最常用）生物法：灭活的病毒（最常用）4、为什么灭活的病毒能作为诱导剂？、为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。融合过程融合过程细胞膜融合细胞膜融合 细胞质融合细胞质融合

3、 细胞核融合（细胞融合完成的标志）细胞核融合（细胞融合完成的标志） 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞准备细胞准备（两亲本细胞混合培养）（两亲本细胞混合培养）细细胞融合胞融合杂种细胞选择杂种细胞选择杂种细胞克隆杂种细胞克隆（一）（一）. . 动物细胞融合过程动物细胞融合过程融合后试管中有几种细胞融合后试管中有几种细胞的存在？的存在？AB5种：AA BB AB A AA BB

4、AB A B B选择培养基选择培养基：亲本细胞死亡，自融细亲本细胞死亡，自融细胞死亡，胞死亡，Only杂种细胞杂种细胞存活存活取材：胚胎或幼龄动物取材：胚胎或幼龄动物的器官组织的器官组织细胞杂交：细胞杂交：不同基因型的细不同基因型的细胞之间的融合就是胞之间的融合就是细胞杂交细胞杂交。 产生杂交细胞（产生杂交细胞（or杂种细胞），即具有原杂种细胞），即具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。（三）（三）. . 结果结果2.最重要最重要的用途是制备单克隆抗体。的用途是制备单克隆抗体。（四）（四）. . 意义意义（二）（二）. .原理：原理：细胞膜的流动性。细胞

5、膜的流动性。 1.细胞融合技术突破了有性杂交的局限，细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。使远缘杂交成为可能。抗体：能够与抗原发生特抗体：能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差体的特异性差提示提示1 1：对：对B B细胞进行细细胞进行细胞培胞培养，

6、可养，可行吗？行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：问题：如如何大量生产单克隆抗体何大量生产单克隆抗体？请尝试设？请尝试设计一个方案。计一个方案。2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术单单克克隆隆抗抗体体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞又能大量繁殖的细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞能无限增能无限增殖殖一个一个浆细胞只分泌浆细胞只分泌一种一种特异性抗体特

7、异性抗体设计方案：设计方案：（一）（一）. .单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念 由由单个单个B B淋巴淋巴细胞（浆细胞）经过细胞（浆细胞）经过克隆克隆形成的形成的细胞群细胞群，这一细胞群所产生的，这一细胞群所产生的化学性质单一、特化学性质单一、特异性强异性强的抗体称为单克隆抗体。的抗体称为单克隆抗体。 （二）（二）. .单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程为什么给小鼠注射特定的为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 会有几种两两融合方式？会有几种两两融合方式？ 杂交瘤细胞是如何筛选出杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？来的？有何特点？ 是否所有的杂交瘤细胞都是否所有的杂交瘤细胞都能产

8、生专一性抗体？能产生专一性抗体？ 如何大规模进行培养得到如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？大量的单克隆抗体？BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞（二选）：选（二选）：选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞第二次筛选第二次筛选：在：在“多孔培养板上多孔培养板上”培养培养杂交瘤细杂交瘤细胞系列胞系列每孔只放一个杂交瘤细胞每孔只放一个杂交瘤细胞克隆化培养克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗

9、单一抗体检测体检测”，“检测阳性检测阳性”的孔内即是所需要的杂的孔内即是所需要的杂交瘤细胞交瘤细胞BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞（二选）：选（二选）：选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？序是？ 2.3单克隆抗体的应

10、用单克隆抗体的应用（1）诊断试剂）诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏特异性强，灵敏度高，并能大量制备。度高，并能大量制备。人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白 ，妊娠第8天，在血清和尿中可以检测到抗人绒毛膜促性腺激素单克抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体隆抗体某人得了肝炎，但是不确定是甲肝（甲肝病毒引起），乙肝（乙肝病毒引起）还是丙肝（丙肝病毒引起），如何确定？取肝细胞提取物，用抗甲肝病毒的单克隆抗体与其反应取肝细胞提取物，用抗甲肝病毒的单克隆抗体与其反应单克隆抗

11、体纯度高、特异性强，所以能准确地识单克隆抗体纯度高、特异性强，所以能准确地识别各种抗原物质的细微差异别各种抗原物质的细微差异由于由于肿瘤细胞表面有特异性抗原可与单克隆抗体结合肿瘤细胞表面有特异性抗原可与单克隆抗体结合，因而这，因而这种抗体跟放射性同位素结合物就不断积累在肿瘤上。应用常规种抗体跟放射性同位素结合物就不断积累在肿瘤上。应用常规核医学显示微仪器扫描病人身体，就可以在摄影底片上得到放核医学显示微仪器扫描病人身体，就可以在摄影底片上得到放射活性图像，射活性图像，放射活性密集的区域即肿瘤所在部位放射活性密集的区域即肿瘤所在部位。 甲胎蛋白，癌甲胎蛋白，癌胚抗原等蛋白胚抗原等蛋白质是癌细胞细

12、质是癌细胞细胞膜上特有的胞膜上特有的蛋白质，正常蛋白质，正常细胞不含有细胞不含有 利用同位素标记的单克隆抗体可定位诊断肿瘤，心血管畸形等疾病“生物导弹生物导弹” 单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。（二）（二）. .单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导

13、细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势第第1 1次筛选得到杂交瘤次筛选得到杂交瘤细胞（有多种）。细胞（有多种）。第第2 2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。1 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有不仅具有B B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因细胞分泌抗体的能力，

14、而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体而可以获得大量单克隆抗体 例：已知细胞增殖时合成例：已知细胞增殖时合成DNA有有D和和S两条途径，两条途径，其中其中D途径能被氨基喋呤阻断。途径能被氨基喋呤阻断。 人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般的合成途径，但一般不分裂增殖。不分裂增殖。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增途径，但能不断分裂增殖，殖， 将两种细胞在培养液中混合，加聚乙二醇促融，将两种细胞在培养液中混合，加聚乙二醇促融，在培养液中有在培养液中有 种细胞。种细胞。 加入氨基喋呤后，使加入氨基喋呤后，使D合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有D合成合成途径的途径的 及其彼此融合的细胞不能增殖。及其彼此融合的细胞不能增殖。 人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞中可利人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞中可利用淋巴细胞中的用淋巴细胞中的S途径合成途径合成DNA而增殖。从培养液中分而增殖。从培养液中分离出杂交细胞。离出杂交细胞。如何筛选出培养液中的杂交瘤细胞？如何筛选出培养液中的杂交瘤细胞？5骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞