血清乳酸脱氢酶DGKC推荐方法测定作业指导书.doc

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1、血血清清乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶 D DG GK KC C 推推荐荐方方法法 测测定定作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 德国临床化学学会 (DGKC)推荐的连续监测法 3 3 。 LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为 NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成 正比。 L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 3 天内的活性损失： 28保存： 8%；1525保存： 2%。 4 4. . 标标本本运运输输：

2、常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能 LDH 测定试剂盒（ 141 3207170 1 试剂 1（664ml） ，试剂 2（616ml） LDH 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： N-甲基-右旋糖酐缓冲液 325mmol/L L-乳酸 50mmol/L 试剂 2（R2）： NAD+ 10mmol/L 6.1.2 试剂准备 试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 ：试剂保存于 28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示 当试剂有看得见的微生物生长，有

3、 浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质， 不能继续使用。 6.1.5 注意事项 试剂中含叠氮钠（ 0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品 使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校 准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品 和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品. SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操

4、作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 LDH 校准值 校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告 可靠的检测结果。 不使用校准品进行LDH 活力检测，可以直接使用 A/min 均值乘以计算因子得到结果，但

5、是这样所得结 果的可靠性不如使用校准品。计算LDH 活力的计算因 子见下表： A/min因子 = LDH 活力 U/L 底物起始的反应（ 37） 样品起始的反应 （37） 340 nm 10080 8095 334 nm 10275 8250 365 nm 18765 15000 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 1 U/L 女性 男性 成人： 135215 135225 儿童： 130 天 145765 125735 31 天1 年 190420 170450 13 岁 165395 155345 46 岁 135345 155345 79 岁 140280 145300 1012

6、岁 120260 120325 1315 岁 100275 120290 1618 岁 105230 105235 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ： ：乳酸脱氢酶（ LDH）由五种不同的 同工酶组成，催化L-乳酸与丙酮酸的相互转换。LDH 存在于人体所有组织的细胞质中，在肝、心和骨骼肌中 含量较高，在红细胞、胰腺、肾和胃中含量较低。在多 种病理情况下出现LDH 活力的升高，如心肌梗死、癌 症、肝脏疾病、血液疾病或肌肉疾病。由于LDH 缺乏 器官特异性，因此在鉴别诊

7、断时，有必要作LDH 同工 酶和其它酶类的测定，如碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移 酶和天门冬氨酸氨基转移酶。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 5-1200U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内 精密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间 精密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 1782.001.12 样品 1 1701.620.95 样品 2 1872

8、.121.14 样品 2 1762.481.41 样品 3 5662.270.40 样品 3 5663.610.64 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与 IFCC 参考 方法(x)，同时对 79 个样品进行 LDH 检测，将检测结 果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.97x+5.9U/L；r =0.997。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。 14.5 病人结果可报告范围： 5-1200U/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法对 LDH 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.08。 当样品

9、测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠 溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 LDH 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.08。当样品测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，甘油三酯浓 度 22.6mmol/L 时没有观察到干扰。血红蛋白浓度 0.5g/L 会影响检测结

10、果。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.89-94. 2.Moss DW, Henderson AR. Digestive enzymes of pancreatic origin. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of

11、 clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 3. Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemie. (German Society for Clinical Chemistry). Recommendation for the determination of the catalytic concentration of lactate dehydrogenase at 37. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:897-9. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。