血清肌酸激酶CKDGKC推荐方法测定作业指导书.doc

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1、血清肌酸激酶血清肌酸激酶 CKDGKCCKDGKC 推荐方法测定作业指导书推荐方法测定作业指导书 1.1.实验原理实验原理 德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC) 推荐的连续监测法。 ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATP ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖 -6-磷酸 葡萄糖 -6-磷酸+NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸 +NADPH+H+ NADPH 在 340nm 处有特异吸收，通过测定NADPH 生成速率计算出 CK 活性。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 稳定性

2、： 28保存稳定 7 天; 1525保存稳定 1 天;-20保存稳定 4 周（避光保 存） 。3 天内的活性损失： 28保存 24 小时或 1822保存 1 小时至少损失 10%。 CK 己糖激酶(HK) (G6P-DH) 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 利德曼 CK 测定试剂盒（试剂1 664ml 试剂 2 616ml） 6.1.1 试剂组成： 试剂 1（R1）+试剂 2（R2）： 咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L 磷酸肌酸 30mmol/L 葡萄糖 2

3、0mmol/L N-乙酰半胱氨酸（ NAC） 20mmol/L EDTA-Na2 2mmol/L ADP 2mmol/L NADP 2mmol/L 二腺苷 -5-磷酸 10mol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（ G6P-DH） 1500U/L 已糖激酶（ HK） 2500U/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28， 若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入

4、口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质

5、量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 CK 校准值校 准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可 靠的检测结果。不使用校准品进行CK 活力检测，可 以直接使用 A/min 均值乘以计算因子得到结果，但 是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算CK 活力的计算因子见下表： A A/ /m mi in n因因子子 = = C CK K 活活力力 U

6、 U/ /L L 计算因子（ 37）： 340nm 4127 334nm 4207 365nm 4729 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 1：（U/L） 成人：女性 24167 男性 24190 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。 根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1、2 2 ： ：肌酸激酶（ CK）主要由存在于肌 肉中的同工酶（ CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK- B）组成。在血清中CK 形式为 CK-MM，CK-MB，CK-BB 和巨酶等的二聚物。在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观 测到 CK 活力的升高。

7、 CK 和 CK-MB 一起检测有助于心 肌梗死的诊断和监视。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围 1200U/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 1593.182.00 样品 1 49.51.052.12 样品 2 2201.540.70 样品 2 1571.631.04

8、 样品 3 5083.690.73 样品 3 2282.311.01 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 71 个样品进行 CK 活力检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.98x+0.02（U/L） ；r=1.000。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。 14.5 病人结果可报告范围： 5-1200U/L。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 CK 活力的线性上限为1200U/L，当测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+

9、10 稀释，重新测定，结果乘以11。 17.2 干扰物质 ：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白 2.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察到 干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Stein W. Creatine kinase (total activity)， creatine kinase isoenzymes and variants. In: Thomas L ed. Clinical laboratory diagno

10、stics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80. 2.Moss DW， Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA， Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 3.Recommendations of the German Society for Clinical Ch

11、emistry. Standardization of methods for the estimation of enzyme activities in biological fluids: Standard method for the determination of creatine kinase activity. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:255-60. 4. Lorentz K， Rohle G， Siekmann L. Introduction of new standard methods 1994 for the determination of catalytic enzyme concentrations at 37. DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995;26:290-3. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。