尿液或脑脊液总蛋白焦酚红钼酸盐测定法作业指导书.doc

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1、尿尿液液或或脑脑脊脊液液总总蛋蛋白白焦焦酚酚红红钼钼酸酸盐盐测测定定法法作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 蛋白质和焦酚红 /钼酸盐生成红色复合物，显色强 度与蛋白质浓度成正比。 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：尿液或脑脊液。 3 3. . 标标本本存存放放 尿液的稳定性： 2025保存可稳定 1 天，28保存至少可稳定 2 天；脑脊液的稳定性： 2025保存可稳定 1 天，48保存可稳定 6 天， -20保存可稳定 6 个。 4 4. . 标标本本运运输输 常温条件下运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准 细菌污染的标本。 6 6

2、. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能尿液或脑脊液总蛋白测定试剂盒（货号： 102109910021 试剂： 450ml标准品 13ml） 6.1.1 试剂组成 试剂： 焦酚红 60mol/L 钼酸钠 40mol/L 表面活性剂 适量 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28， 若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻！。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应 采取必要的预防措施使用试剂 6.2 校准品：使用

3、 DiaSys 公司提供的总蛋白 （200mg/L）校准品对自动分析仪进行校准，具体参见 生化检验校准品和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：每批样品检测时，使用DiaSys 公司提 供的总蛋白（ 200mg/L）校准品进行内部质量控制。具 体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析

4、1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把总蛋白 （200mg/L）校准品做为未知标本进行分析，以2S 为 质控警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在 控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以总蛋白（ 200mg/L）校准品校准仪 器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的 检测结果，以 mg/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 2,3： ：尿液： 24141mg/24h；脑脊液 500mg/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参

5、考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1,2 在多数肾脏疾病中可观测到尿液总蛋白浓度升高 （蛋白尿）。肾病可导致肾小球渗透性增加或肾小管再 吸收能力下降。导致肾后的蛋白尿原因有感染，出血或 泌尿管的恶性疾病。尿液蛋白水平升高可能与生理或心 理压力和其他急性病症如发烧有关。 对于脑脊液，颅内压升高（如脑瘤，脑内出血或脑 外伤） ，炎症（特别是细菌性脑膜炎）和多发性硬化症 时可检测到较高的蛋白水平。脑脊液总蛋白/血清总 蛋白比率上升反映了血液与脑脊液屏障的渗透性升高。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 203000mg/L。 14.2 精密度： 批内精密 度 n=

6、20 x (mg/L) s (mg/L) CV (%) 天间精 密度 n=20 x (mg/L) s （mg/L) CV (%) 样品 1 1785.232.94 样品 1 1703.942.32 样品 2 4505.101.14 样品 2 4499.682.16 样品 3 156427.61.77 样品 3 148442.52.86 14.3 方法学比较：本公司的尿液总蛋白试剂盒(y)与 某商品化试剂盒 (x)，同时对 69 个样品进行检测，将 检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.02x+2.20mg/L；r=0.990。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为20mg/L。 14.

7、5 病人结果可报告范围： 203000mg/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法的检测范围为 203000mg/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用 9g/L 氯化钠溶液作 1+1 稀释，重新测定，结果乘以 2。如果样品测定值低于20mg/L，需加大样品用量 (例如 50L 样品+1000L 试剂)。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法的检测范围为203000mg/L。当样品测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1+1 稀释，重新测定，结果乘以2。如果样品测定值低于 20m

8、g/L，需加大样品用量 (例如 50L 样品+1000L 试剂)。 17.2 干扰物质：尿液中的干扰成分引起的误差2%。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1. Johnson AM, Rohlfs EM, Silverman LM. Proteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.

9、P.477-540. 2. Felgenhauer K. Laboratory diagnosis of neurological diseases. In: Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH- Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.1308-26. 3. Boege F. Urinary proteins. In: Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlag

10、sgesellschaft; 1998.p.382-400. 4. Orsonneau JL, Douet P, Massoubre C, Lustenberger P, Bernard S. An improved Pyrogallol red-molybdate method for determining total urinary protein. Clin Chem 1989;35:2233-6. 5. Watanabe N, Kamei S, Ohkubo A, Yamanaka M, Ohsawa S, Makino K et al. Urinary protein as measured with a pyrogallol red-molybdate complex. Manually and in a Hitachi 726 automated analyzer. Clin Chem 1986;32:1551-4. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。