血尿液肌酐Cr测定作业指导书.doc

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1、血血尿尿液液肌肌酐酐 C Cr r 测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 Vitros CREA 试剂是一种干燥，多涂层的，在透明 的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。 将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地 分布。随后，肌酐扩散至试剂层并水解为肌酸。这样生 成的肌酸在肌酸氨基水解酶的作用下转化为肌氨酸和尿 素。肌氨酸又在肌氨酸氧化酶的作用下氧化生成甘氨酸， 甲醛和过氧化氢。最后，过氧化氢催化白色染料生成呈 色剂。 测定方式： 两点比色法 波长： 670nm 测试时间和温度： 37约分钟 反应过程： 肌酐氨基水解酶 肌酐 + 水 肌酸 肌酸氨基水解酶 肌酸

2、+ 水 肌氨酸 + 尿素 肌氨酸氧化酶 肌氨酸 + 氧气 + 水 甘氨酸 + 甲醛 + 过氧化氢 POD 过氧化氢 + 白色染 料 呈色剂 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 样品类型：血清；肝素锂 /钠和 EDTA 抗凝血浆。 定时收集的，稀释后的尿样。 2.3 标本采集与处理： 2.3.1 血清和血浆样品 特别要注意的是：不要用注射营养液的针管采集样 品。样品采集后 4 小时内要离心标本，吸出血清。处 理时要将其当成生物污染品。 2.3.2 尿液样品 定时或随时采集的尿液。测试前将1 份样品加 20 份试剂级别的水进行稀释。将测试结果乘 以 21，就得到原始样品中

3、尿素氮的浓度。冷藏的样品 不能立即测试。处理样品时要将其当成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆室温下最多5 天；冷藏 最多 30 天；冷冻保存可超过30 天。尿液样品室温下 最多 3 天；冷藏最多 5 天；-18可长期保存。 4 4. . 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要 求，标本放置时间过长。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 Cr 所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit1；Vitros 特制质控液； Vitros 7%BSA 稀释

4、液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项 目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分： 反应成份有肌酐氨基水解 酶，肌酸氨基水解酶，肌氨酸氧化酶，过氧化酶和白色染 料。其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂，稳定剂， 表面活性剂，螯合剂及交叉连接剂。干片标记：试剂盒 外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期 限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打 开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室 温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少要 在室温下要放置 60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室 温下放置 30

5、 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪 器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小 时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在 -18或低于该范围。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间 不能超过 2 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros Cr 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参 见 VITROS250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP 文件。 6.1.4 变质指示：超

6、过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损， 不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品：用 Vitros 化学定标物 Kit 1。血清，尿 液都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值不同。有 关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详 情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品. SOP 文件。 6.3 质控品：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用 其它的一些质控物品，当与别的GLU 测试方法比较时 就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的 质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加 剂的质控物

7、品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使 用。 有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化分析仪。 具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具体定标程序：参阅操作 手册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和 保养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超 出线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例 上指定的时间

8、，在美国， CLIA 要求至少每 6 个月定标 一次。 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。 1 11

9、1. . 计计算算方方法法： 以用 Vitros 化学定标物校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 mmol/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 国际单位 (mol/L) 血清/血浆 男性 62-106 女性 71-133 尿液 24 h 尿样 7000- 25000mol/day* 此参考范围是测试一批健康成人，然后取靶值附近 95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食和地 域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验 室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义： 血清和尿液中的肌酐是正常人体肌肉 组织代谢的产物，与

10、饮食变化无关。男性血清肌酐含量 高于女性。由于尿肌酐主要通过肾小球排泄，不被肾小 管重吸收，所以测定血清和尿液中的肌酐浓度可以检查 肾小球的通透率。 急性或慢性肾衰竭，尿路阻塞，肾血流减弱，休 克，脱水，横纹肌炎都可造成血清肌酐浓度上升。虚 弱和肌肉量减少可造成肌酐浓度降低。运动会使肌酐 廓清率升高，但当尿量减少时该指标不可靠。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围：血清 4-1238mol/L；尿液 :：84- 30639mol/L（乘以稀释倍数 21 倍的结果）。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器

11、维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精密 度 血清血清 x (mo l/L) s (mol /L) CV (%) 室间精 密度 n=20 天 x (mol/ L) s (mol /L ) CV (%) 样品 1 n=79 870.9 样品 1 870.91.4 样品 2 n=78 5234.4 样品 2 5238.81.8 日间精密 度 尿液尿液 x (mo l/L) s (mol /L) CV (%) 室间精 密度 n=22 天 x (mol/ L) s (mol /L) CV (%) 样品 1 n=88 616097.8 样

12、品 1 6160168.82.7 样品 2 n=88 8830135 样品 2 8830211.12.6 样品 3 n=88 12373 257.3 样品 3 12373491.94.0 样品 4 n=88 18827 218.5 样品 4 18827398.62.1 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。 14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和高效液相色谱参考方法分别测 试相同血清或尿样品，对比结果显示Vitros 方法的 准确度良好。用 Vitr

13、os250 仪器与 Vitros700 仪器测 试相同的血清 /尿液样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度良好，血清：Y=1.03X- 7.07（r=0.999，N=52，检测范围 80-1176mol/L） ； 尿液： Y=1.04X-439.35（r=0.999，N=59，检测范围 2714-27793mol/L） 。 14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清4mol/L； 尿液:：84mol/L（乘以稀释倍数 21 倍的结果）。 14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros CREA 干 片法均无干扰（偏差 0.1mg/dL，352mol/L 时， 在经过复查等确认手段处

14、理后应及时向临床主管医生汇 报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限为血清1238mol/L；尿液： 30639mol/L（乘以稀释倍数 21 倍的结果）。如果样 品中 Cr 浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤 进行稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA 稀释。尿液 用生理盐水。重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就 得到原始样品中 Cr 的浓度。 17.2 干扰物质 ：血清/血浆：肌酸：当肌酐浓度为 1.5 mg/dL (133 umol/L) ，肌酸大于 8 mg/dL（707 umol/L）时，结果就会出现 DP 标志 （因为肌酸浓度太高引起底物缺乏

15、） 。没有 DP 标志， 则是因为肌酸浓度小于 0.15 mg/dL(13 umol/L)。当 肌酐浓度为 14 mg/dL (1237umol/L) ，肌酸大于 1 mg/dL（88umol/L）时，结果就会出现 DP 标志。而 没有 DP 标志的结果偏差小于 2 %。脯氨酸：患者注 射含脯氨酸的营养液会使结果升高 0.2 mg/dL (18 umol/L)。因此，不能用静脉注射营养液的针管采样。 多巴酚丁胺（强心药）：静脉注射多巴酚丁胺时采集的 样品会有明显的负偏差。 83 ug/mL 的多巴酚丁胺会使 原先 4.8 mg/dL 的肌酐浓度降至 2.7 mg/dL。利多卡 因：由于利多卡因和N-乙基甘氨酸（ NEG）代谢的影 响，使用利多卡因做长期治疗的病人，结果会升高至多 1.0 mg/dL(88 umol/L)。 安乃近为 1.13umol/L 当肌酐浓度为 88umol/L 时， 结果平均偏差为 -53umol/L。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧 急修理，如一时不能修好，则用OLYMPUS AU1000 生化 分析仪测定病人标本。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。