血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定作业指导书.doc

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1、血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定血清天门冬氨酸氨基转移酶速率法测定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 Vitros AST 试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物 支撑基片上涂有分析成份的化学干片。 将一滴患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀 地分布并渗透到下面的试剂层。在磷酸吡哆醛的催化作 用下，谷草转氨酶使天门冬氨酸的氨基向-酮戊二 酸转移生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸在草酰乙酸脱 羟酶的作用下生成丙酮酸和二氧化碳。随后丙酮酸被丙 酮酸氧化酶氧化生成乙酰磷酸酶和过氧化氢。最后是过 氧化氢与白色染剂在过氧化物酶的催化下生成一种有色 染剂。在 37用反射仪可以测定白色染剂的氧

2、化率， 然后再将某一线性范围内反射强度变化率转化为以 U/L 为单位的酶活性度。干片支撑层上的短波滤光剂可 以减少入射光在有色染剂形成过程中的影响。 测定方式 ：速率法 波长： 670nm 测试时间和温度 ：37约分钟 反应过程 ： AST，磷酸吡哆醛 天门冬氨酸 + -酮戊二酸草酰乙酸 +谷氨酸 草酰乙酸脱羟酶草酰乙酸 丙酮酸+二氧化碳 丙酮酸氧化酶丙酮酸+磷酸盐+O2 过氧化氢+乙酰磷酸酶 过氧化物酶过氧化氢+白色染剂 有色染剂 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 无特殊。 2.2 样品类型：血清；肝素锂 /钠抗凝血浆。 2.3 标本采集与处理：样品采集后3 天内以 1000g

3、最 少离心 10 分钟，然后吸出血清。特别要注意：样品不 能含细胞物质，因为血小板中AST 活性也很高，既使 离心不足 10 分钟的新鲜血浆与新鲜血清的测试结果相 比都有很大差异。处理样品时要将其当成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 ：血清、血浆室温下最多3 天； 48冷藏最多 1 周；样品冷冻保存可达3 个月。 4 4. . 标标本本的的运运输输 ：样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 ：由于用草酸钾 /氟化钠，枸掾酸 和 EDTA 抗凝的标本结果负偏差 50%，因此不能使用。 此外，因为红细胞中AST 活性很高，溶血标本也不能

4、 使用。 6 6. . 试试验验材材料料： 6.1 测试 AST 所需的物品包括： Vitros 化学定标物 Kit3；Vitros 特制质控液； Vitros 7%BSA 稀释液。 强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成：干片成分： 反应成份是天门冬氨酸 钠；酮戊二酸钠；磷酸吡哆醛钠；磷酸钠； 2（3,5二氧甲基 4羟苯） 4,5二（ 4甲 氨基）咪唑（白色染料） ；氧化丙酮酸；过氧化物酶以 及草酰乙酸脱羟酶。其它成份有酶辅助因子，染色剂， 粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，稳定剂，染料溶剂，滤 色剂，净化剂及聚合物交叉连

5、接剂。干片标记：试剂盒 外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期 限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备 ：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒 打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到 室温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少 要在室温下要放置60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在 室温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒：存储在 -18或低于该范围。说 明：为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时，未开封 的试剂盒在 28（3646oF）下最多可以

6、冷藏三个 月。 在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间 不能超过 2 周，否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2 小时；再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确， Vitros AST 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。 参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存. SOP 文件。 6.1.4 变质指示 ：超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项 ：为避免干片盒打开以前其内包装受 损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品 ：用 Vitros 化

7、学定标物 Kit3。血清、血 浆都用相同的定标液，不过各自的SAVs 值不同。有 关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的 详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控 品.SOP 文件。 6.3 质控品 ：使用 Vitros 特制的质控物品；若使用 其它的一些质控物品，当与别的AST 测试方法比较时 就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的 质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加 剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低， 还会因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源， 稀释温度和复溶活化时间的不同而发生变化；乙烯乙二 醇作稳定剂的质控物品不能

8、使用。 有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器 美国强生厂家 VITROS250 全自动干式生化分析仪。 具体测试程序请参阅操作手册的介绍。 8 8. . 操操作作步步骤骤： 将试剂复温后直接放入仪器，样品编程， 仪器 5 分后自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS250 操作手册 .SOP。具体定标程序：参阅操作手 册的相关章节内容。何时进行定标：在维护和保 养时更换了仪器的重要部件。质控结果持续超出 线性范围内时，详情参阅操作手册。管理条例上 指定的时间，在美国， CLIA 要求至少每 6

9、个月定标一 次。 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制 操作建议： 将质控物质当成生物污染 品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至 少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检 查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的 有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（ IQCT）的内容。在每一批标本中都应把质控血清 做为未知标本进行分析，以2S 为质控警告限， 3S 为 失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生 化室室内质控操作规程 .SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法 ：以用 Vi

10、tros 化学定标物校准仪器后， 在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结 果，以 U/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 国际单位 (U/L) 成人 15-46 女性 14-36 男性 17-59 此参考范围是测试189 位健康成人，然后取靶值 附近 95%的结果计算所得。参考值因性别、年龄、饮食 和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个 实验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 谷草转氨酶在人体的心脏，骨骼肌和 肝脏中活性较高。心肌梗塞，肺栓塞，骨骼肌创伤，酒 精性肝硬化，病毒性肝炎和药物引发的肝炎多造成血清 中谷草转氨酶活性上升。

11、 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围 血清/尿液： 3.0-750U/L。 14.2 精密度：在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测 精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周 围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理 等方面发生变化都会影响结果的重复性。 日间精 密度 血血清清 x (U/L) s (U/L ) CV (%) 室间精密 度 n=31 天 x (U/L ) s (U/L ) CV (%) 样品 1 n=238 290.5 样品 1 290.72.4 样品 2 n=234 2543.1 样品 2 2544.31.7 样品 3 n=236

12、 82727.9 样品 3 82728.83.5 *日间精密度是将 2 至 3 份相同的样品在一天中运 行两次，然后对测试结果进行统计计算。 *室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次， 然后对测试结果进行统计计算。 14.3 方法学比较： 用 Vitros700 仪器和 IFCC 参考方法分别测试相同 血清样品，对比结果显示Vitros 方法的准确度良好。 用 Vitros250 仪器与 Vitros700 仪器测试相同的血清 样品，对比结果显示Vitros250 方法的准确度良好， 血清： Y=1.03X-6.54（r=0.999，N=60，检测范围 15-644U/L） 。 14.4

13、灵敏度：本试剂的检测下限为血清为3U/L。 14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros AST 干片 法均无干扰（偏差 5.4U/L） 。乙酰乙酸 20mg/dl、扑 热息痛 20mg/dL、丙酮 60mg/dL、阿司匹林 35mg/dL、阿昔洛韦 10mg/dL、硫酸舒喘宁 1.84ug/mL、别嘌醇 5mg/dL、三唑安定 0.02mg/dL、 硫酸阿米卡星 40mg/dL、两性霉素 B3.5mg/dL、氨卞 青霉素 200mg/dL、盐酸阿米替林 2.5ug/mL、抗坏血 酸盐 6mg/dL、硫唑嘌呤 1mg/dL、叠氮胸苷 30mg/dL、未结合胆红素 20mg/dL、咖啡因 3

14、5mg/dL、 卡托普利 2mg/dL、卡马西平 12mg/dL、头孢唑啉 400mg/dL、头孢曲松 250mg/dL、氯霉素 25mg/dL、利 眠宁 2mg/dL、盐酸普鲁卡因 10ug/dL、胆固醇 340 mg/dL、西咪替丁 10mg/dL、克林霉素 20mg/dL、可乐 定 0.2ug/mL、可待因 1.7mg/dL、可的素 0.23mg/dL、环孢菌素 4ug/mL、地塞米松 1.35ug/mL、安定 2mg/dL、地高辛 4ug/mL、地尔硫卓 0.2mg/dL、苯海拉明 7mg/dL、安乃近 50mg/dL、多巴 胺 3ug/mL、红霉素 20mg/dL、乙醇 394mg/

15、dL、氟安定 15mg/dL、呋塞米 10mg/dL、焦硫酸盐 50mg/dL、庆大 霉素 12mg/dL、龙胆酸 25mg/dL 等等。 14.6 病人结果可报告范围 ：血清 3-750U/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 ：本法线性上限为血清 750U/L。如果样品中 AST 浓度超出系统的测试线性范 围，请按下列步骤进行稀释：用 7% BSA 稀释样品； 重新测试；将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品 中 AST 的活性；如果样品中AST 的活性仍然超出系统 的线性范围，加大稀释倍数，重新测试，然后将测试结 果乘以新的稀释倍数。 1 16 6. . 病病危危报

16、报警警值值的的处处理理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限为血清750U/L。如果样品中 AST 浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释： 用 7% BSA 稀释样品；重新测试；将测试结果乘以稀释 倍数，就得到原始样品中AST 的活性；如果样品中 AST 的活性仍然超出系统的线性范围，加大稀释倍数， 重新测试，然后将测试结果乘以新的稀释倍数。 17.2 干扰物质：我们对Vitros AST 方法的干扰物质 进行了筛查 ,下列物质在表中所示浓度会引起一定的结 果偏差。在妥拉磺脲浓度为40mg/dL，AST 浓度为 25U/L 时，平均偏差 -16U/L；在乙酰半胱氨酸 （NAC）浓度为 180mg/dL，AST 浓度为 25U/L 时，平 均偏差 -8U/L。有些药物和患者自身状况也会影响 AST 的测试值。 1 18 8. . 补补救救措措施施 ：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行 紧急修理，如一时不能修好，用OLYMPUS AU1000 生 化分析仪测定病人标本。 1 19 9. . 参参考考文文献献 强生厂家提供的方法学手册 2 20 0 其其他他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处理 .SOP 文件处理。