血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定作业指导书.doc

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1、血血清清丙丙氨氨酸酸氨氨基基转转移移酶酶I IF FC CC C 推推荐荐方方法法 测测定定作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 国际临床化学学会 (IFCC)推荐的紫外连续监测法。 ALT L-丙氨酸 + -酮戊二酸 丙酮酸 + L-谷氨酸 丙酮酸 + NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O 加入磷酸吡哆醛（ P-5-P）是为了稳定 ALT 活性， 避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性 偏低。 (如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)1 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备： 12 小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3

2、3. . 标标本本存存放放： 3 天内的活性损失： 28保存： LDH（乳酸脱氢酶） 10%；1525保存： 17%；标本稳定性： -20保 存至少可稳定 4 周。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂 申能 ALT 测定试剂盒（货号： 141 27017170 1 试剂 1 664ml 试剂 2 616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： Tris 缓冲液 pH 7.5 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L LDH（乳酸脱氢酶） 12

3、00U/L 试剂 2（R2）： a-酮戊二酸 15mmol/L NADH 0.18mmol/L 磷酸吡哆醛试剂： Goods 缓冲液 pH9.6 0.7mmol/L 磷酸吡哆醛 0.09mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于28，若 无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用

4、DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪操作规程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水

5、平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 ALT 校准值 校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告 可靠的检测结果，以U/L 报告。 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 4 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U/L 1035U/L 男性 41U/L 1050U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3

6、. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ： ：丙氨酸氨基转移酶（ ALT）旧称谷 丙转氨酶（ GPT） ，天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧 称谷草转氨酶（ GOT） 。它们是氨基转移酶类的典型代 表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反 应。ALT 是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。 而 AST 水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损 害等都有关。因此同时进行ALT 和 AST 的检测，可用 于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT 比率用 于肝病的鉴别诊断。比率 1 和严重肝病有关，常见慢性肝病。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围 480

7、0U/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 不含磷酸吡哆醛 批内 精密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 天间 精密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 22.80.703.08 样品 1 22.21.386.22 样品 2 42.60.681.60 样品 2 44.81.172.62 样品 3 99.30.920.92 样品 3 1011.021.00 含磷酸吡哆醛 批内 精密度 n=2

8、0 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间 精密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 33.30.992.96 样品 1 33.81.253.71 样品 2 72.11.361.88 样品 2 72.02.042.83 样品 3 1331.761.32 样品 3 1282.772.16 14.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛 本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 78 个样品进行 ALT 活力检测，将检 测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.00 x+0.00U/L；r=0.999。 含磷酸吡哆醛 本公司含磷酸吡哆

9、醛的试剂盒(y)与某商品化试剂 盒(x)，同时对 80 个样品进行 ALT 活力检测，将检测 结果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.00 x+0.00U/L；r=0.994。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为4U/L。 14.5 病人结果可报告范围 4U/L-800U/L 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理 本法对 ALT 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.16,在 365nm 为 0.08。 当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠 溶液作 1：9 稀释，重新测定，结果乘以10。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理

10、理 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 ALT 活力检测的最大 A/min 在 340、334nm 为 0.16,在 365 nm 为 0.08。当样品测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液作 1：9 稀释，重新测定，结果乘以10。 17.2 干扰物质 ：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白浓 度4.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察 到干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Thomas L.

11、 Alanine aminotransferase(ALT), Aspartate aminotransferase(AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.55-65. 2.Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistr

12、y. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 3.Bergmeyer HU, Horder M, Rej R. International Federation of Clinical Chemistry (IFCC) Scientific Committee, Analytical section: approved recommendation (1985) on IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes.

13、 Part 3. IFCC method for alanine aminotransferase(L-alanine: 2-oxoglutarate aminotransferase, EC 2.6.1.2). J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24:481-95. 4. Lorentz K, Rohle G, Siekmann L. Einfuhrung der neuen Standardmethoden 1994 zur Bestimmung der katalytischen Enzymkonzentrationen bei 37. DG Klinische Chemie Mitteilungen 1995;26:190-2. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。