植物体内游离脯氨酸的含量测定 .ppt
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1、植物体内游离脯氨酸的含量测定,一、实验目的,学习掌握脯氨酸含量的测定方法,了解逆境条件下,脯氨酸含量的变化情况,认识脯氨酸是一种逆境生理指标,二、实验原理,采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸,不仅大大减小了其他氨基酸的干扰,快速简便,而且不受样品状态(干或鲜样)限制。在酸性条件下,脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物,用甲苯萃取后,此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。,三、材料、仪器设备及试剂,1.材料:受环境胁迫的植物叶片(高温及常温处理的小麦叶片)。2.仪器设备:分光光度计;水浴锅;漏斗;试管数支;滴管。,二、材料、仪器设备及试剂,
2、3.试剂:3%磺基水杨酸水溶液;甲苯;2.5%酸性茚三酮显色液:冰乙酸和6mol/L磷酸以32混合,作为溶剂进行配制,此液在4下23日有效;脯氨酸标准溶液:称取25mg脯氨酸,蒸馏水溶解后定容至250ml,其浓度为100g/ml。再取此液10ml用蒸馏水稀释至100ml,即成10g/ml的脯氨酸标准液。,四、操作步骤,1标准曲线制作(1)取7支具塞刻度试管按下表加入各试剂。混匀后加玻璃球塞,在沸水中加热40min。,四、操作步骤,(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡,以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm下比色。(3)以消光值为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标
3、,绘制标准曲线,求线性回归方程。,四、操作步骤,2样品测定(1)脯氨酸提取取高温和常温处理的小麦叶片0.5g左右,分别置于两支试管中,各加入5ml3%磺基水杨酸溶液,于沸水浴中浸提10min。(注意叶片叶片需浸没在提取液里,可用玻棒搅动)(2)取出试管待冷却至室温后,吸取上清液2ml,加2ml冰乙酸和2ml茚三酮显色液,于沸水浴中加热30min,冷却后加4mL甲苯,剧烈摇动30s,进行萃取,取上层脯氨酸红色溶液于520nm处比色。(用甲苯做空白调零),五、实验报告,结果计算:回归方程:pro(g)=41.873A5200.0094单位鲜重样品的脯氨酸含量:,比较不同处理下样品中脯氨酸含量的变化,并加以解释,六、注意事项,1.叶片需完全浸入提取液,以使提取完全2.比色操作的规范,以免皮肤着色3.甲苯与水不混容,比色皿不可见水,可用甲苯或酒精润洗比色皿4.甲苯用后,比色皿中的溶液需回收。,
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