细胞生物学实验.pptx

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1、细胞生物学考试复习提纲,下一页是复习提纲，几乎涵盖了所有我的出题内容，当然题目表述方式可能不太一样。请注意我留给你们的作业，认真看一下，应该会有类似的活题。还留了几页ppt给你们，都是试题中可能涉及的内容，当然还有一些内容没留，你们花个几分钟就能通过各种途径找到答案,常用的细胞生物学显微镜的分类。什么是显微镜分辨率，公式是什么？哪些因素决定显微镜分辨率。每种类型显微镜的光源，光路。什么叫荧光？免疫荧光实验原理及流程。荧光显微镜，激光共聚焦显微镜的光路，特点及异同。扫描电子显微镜和透射电子显微镜的不同。什么叫模式生物？有哪些模式生物？它们的特点是什么？细胞核染料有哪些？细胞质染料有哪些？扫描电子

2、显微镜的成像原理？什么是二次电子？简述透射电子显微镜的样品制备步骤什么是物镜？物镜的组成及分类,光源：能发射光波的物体。真空中对应的波长范围：390nm760nm相应光色：紫、蓝、青、绿、黄、橙、红可见光的波长范围：红620nm-760nm橙592nm-620nm黄578nm-592nm绿500nm-578nm青464nm-500nm蓝446nm-464nm紫400nm-446nm,光源、聚光器,载物台、样品,物镜,目镜,显微镜的一些基本概念,5,原理：荧光物质中的电子吸收特定波长光的能量，使其由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。用途：1、利用生物本身的自发荧光观察细胞或细胞

3、器荧光素2、利用带有荧光标记的抗体观察及追踪蛋白质时空定位情况3、定量分析,荧光显微镜观察,载物台,入射光、激发光、吸收光、Excitationlight,荧光、发射光、发射光、Emissionlight,荧光显微镜和普通显微镜的光路比较与分析,光源、聚光器,载物台、样品,物镜,目镜,普通显微镜,荧光显微镜,荧光显微镜染色的途径,一：直接染色法：利用化学染色剂，对要观察的物质或细胞器进行染色，并进行荧光观察(Dapi，PI,anilineblue等)。Dapi:可以染DNA，起到标记细胞核的作用。Ex:358nmEm:461nmPI:可以染DNA和RNA。Ex:535nmEm:615nmani

4、lineblue（苯胺蓝）:可以染B-1,3葡聚糖，可以标记植物的筛管、小孢子母细胞、四分体和花粉管。Ex:395nmEm:495nm,二，融合蛋白法,利用可以发出荧光的蛋白质与目的蛋白融合，来追踪目的蛋白的“行踪”目前较为常用的荧光蛋白质有GFP(GreenFluorescenceProtein)mCherry,DsRedYFP,要研究的蛋白质,荧光蛋白质,免疫组织化学和免疫荧光实验,要研究的蛋白质,标记蛋白质,荧光一抗,要研究的蛋白质,标记蛋白质,荧光二抗,激光共聚焦显微镜的光路解析,光源、聚光器,载物台、样品,物镜,目镜,电子显微镜系统,扫描电子显微镜系统,透射电子显微镜系统,电镜不同于

5、光镜的特点：,加述电压电子波长(A)(KV)(经相对论校正),10.38820.22450.173100.122200.0859300.0698400.0601800.04181000.03705000.014210000.00687,电子的波长,D=0.61/nsin,磁透镜的光学性质,磁透镜的聚焦原理磁透镜的缺陷像差电磁透镜的景深和焦长,扫描电子显微镜的简称为扫描电镜，英文缩写为SEM(ScanningElectronMicroscope)。它是用细聚焦的电子束轰击样品表面，通过电子与样品相互作用产生的二次电子、背散射电子等对样品表面或断口形貌进行观察和分析。现在SEM都与能谱（EDS）组

6、合，可以进行成分分析。所以，SEM也是显微结构分析的主要仪器，已广泛用于材料、冶金、矿物、生物学等领域。,一束细聚焦的电子束轰击试样表面时，入射电子与试样的原子核和核外电子将产生弹性或非弹性散射作用，并激发出反映试样形貌、结构和组成的各种信息，有：二次电子、背散射电子、阴极发光、特征X射线、俄歇过程和俄歇电子、吸收电子、透射电子等。,二次电子：Secondaryelectron，二次电子是指被入射电子轰击出来的核外电子。由于原子核和外层价电子间的结合能很小，当原子的核外电子从入射电子获得了大于相应的结合能的能量后，可脱离原子成为自由电子。如果这种散射过程发生在比较接近样品表层处，那些能量大于材料逸出功的自由电子可从样品表面逸出，变成真空中的自由电子，即二次电子。二次电子来自表面5-10nm的区域，能量为0-50eV。它对试样表面状态非常敏感，能有效地显示试样表面的微观形貌。,什么是二次电子,祝大家考试顺利！,