实验二.ppt

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1、实验二,基础培养基、细菌接种及其常用生化反应,培养基的类型,1.按照培养基的成分来分(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。(2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯

2、葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。,2.按照培养基的物理状态分(1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。(3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。,3.按照培养基用途分：(1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求

3、比较苛刻的某些微生物。(2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。(3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。,细菌的分离与接种,1.平板划线接种法本法为最常用的分离培养细菌的方法,通过平板划线后,可使细菌分散生长,形成单个菌落,有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌.其方法是首先将接种环灭菌后,沾取标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分(第一区),将接种环火焰灭菌,待冷却后只通过第一区3-4次后连续划线(为第二区),依次

4、可共划线3-5区,每一区细菌数可逐渐减少,直到分离出单个菌落为止.,2.斜面接种法采用该法目的是进行纯培养.其方法是从平板分离培养物上用接种环挑取单个菌落或者是取纯种,移种至斜面培养基上,先从斜面底部自下而上划一条直线,再从底部开始向上划曲线接种,尽可能密而匀。3、穿刺接种法本法多用于双糖,明胶等具有高层的培养基进行接种.方法是用接种针挑取菌落或培养物,由培养基中央直刺到距管底约0.3-0.5cm处.然后沿穿刺线退出接种针。4.液体接种法其方法是接种环沾取菌种,倾斜液体培养基管,先在液面与管壁交界处研磨接种物(以试管直立后液体能淹没接种物为准),塞好棉塞后轻轻混合即可.,细菌的生化反应,糖发酵

5、试验不同细菌具有发酵不同糖类的酶，因而分解糖类的能力各不相同。有的能分解某些糖产酸，有的则既能产酸又能产气,有的则不能分解,据此可以鉴别细菌。将大肠杆菌、伤寒杆菌、产碱杆菌分别接种于糖发酵管中根据以下现象判定：（1）指示剂仍为紫色不变，表示细菌不分解该糖，用“”表示；（2）指示剂由紫变黄，无气体产生，表示细菌分解该糖，产酸不产气，用“+”表示；（3）指示剂由紫变黄，并有气体产生，表示细菌分解该糖，产酸又产气，用“”表示。指示剂常用溴甲酚紫，pH感应界为5.6-6.6，色调由黄紫。【结果】大肠杆菌伤寒杆菌产碱杆菌,二、吲哚（靛基质）试验某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚（靛基

6、质）。吲哚本身无色，不能直接观察，如与吲哚试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚，即为吲哚试验阳性。本试验常用于鉴别某些肠道杆菌。【材料】1、菌种：大肠杆菌、产气杆菌琼脂斜面1824小时培养物。2、培养基：蛋白胨水培养基。3、吲哚试剂。【方法】1、分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支蛋白胨水培养基中。2、37孵育2448小时后取出，沿管壁加入23滴吲哚试剂于液面上，振摇试管使试剂与培养液混合，然后静置数分种，观看是否变色。阳性者可见上层试剂呈玫瑰红色，仍呈黄色者为阴性。【结果】大肠杆菌+，产生杆菌-,三、硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成H2S.产

7、生的H2S遇培养基中的铅或铁离子，则形成黑褐色的硫化铅或硫化铁沉淀，黑褐色沉淀物越多，表示生成的H2S量越多，因此可间接地检测细菌是否产生H2S。【材料】1、菌种：大肠杆菌、变形杆菌斜面培养物。2、培养基：醋酸铅培养基。【方法】1、分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌于2支醋酸铅培养基内。2、37孵育24小时后观察，穿刺部位呈黑褐色者为阳性，不变颜色者为阴性。【结果】大肠杆菌-，变形杆菌+,四、尿素酶试验某些细菌如变形杆菌具有尿素酶，因此，在含有尿素的培养基中，能分解尿素产生氨，使培养基变碱，此时培养基中的酚红指示剂显红色，借此可鉴别细菌。【材料】1、菌种：大肠杆菌、变形杆菌的1824小时斜面培养物。2、培养基：尿素培养基。【方法】1、分别将大肠杆菌、变形杆菌接种于两支尿素培养基上。2、37孵育24小时观察结果，尿素培养基变红色者为阳性，颜色不变为阴性。【结果】大肠杆菌-，变形杆菌+,