温州医学院 临床免疫学检验系列 (28).ppt

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1、实验八循环免疫复合物的检测,概述,免疫复合物：抗原与其相应的抗体结合形成的复合物-组织中固定的免疫复合物（局部免疫复合物）-血液中的循环免疫复合物（circulatingimmunecomplex，CIC）,根据形成免疫复合物的Ag-Ab是已知或未知的将CIC分为两大类：-特异性免疫复合物：如HBsAg-抗HBsAg-非特异性免疫复合物,循环免疫复合物的检测技术分为抗原特异性和非抗原特异性两类。大多数情况下，免疫复合物抗原性质不清或太复杂了，所以前者不常用；后者检测的是血清中CIC的总量，不考虑形成CIC的抗原特异性。,CIC的检测方法,实验目的,本次实验采用聚乙二醇（PEG）沉淀法检测CIC

2、，以此进一步理解CIC检测的基本原理，并熟悉其操作过程和临床意义。,实验原理,PEG是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性，可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉淀，即使浓度很高也不会引起蛋白质变性。不同浓度的PEG能选择性沉淀不同的蛋白质。用终浓度为3040g/L的PEG6000能选择性沉淀CIC。循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来，可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少，浊度的大小用分光光度计测定。,实验材料,试剂：0.1mol/LpH8.4硼酸缓冲液（BBS）、41g/LPEG溶液器材：722分光光度计、0.5cm比色杯、试管标本：待测血清（已1:3稀释）,实验步骤,

3、按照下表加样，此时PEG最终浓度为37.3g/L。,加样后，充分混匀，置41h，置室温10min。用分光光度计在波长495nm下测两管的A值，以BBS调零。,实验结果,记录对照管和测定管的A值待测血清A值测定管A值对照管A值正常血清CIC的A值为0.0430.02（XSD）。大于正常人A值两个标准差或更高者为CIC阳性。,注意事项,不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。20g/LPEG可沉淀较大的CIC，40g/LPEG则沉淀较小的CIC，但浓度大于50g/LPEG选择性沉淀CIC的特性即消失，可能导致假阳性。温度变化对结果影响较大。4时CIC沉淀最佳，室温每升高1，A值下降0.2。,低密度脂蛋白、高球蛋白血症或脂肪含量过高均可使浊度增加，故应空腹采血。样本陈旧或反复冻融等均可影响检测结果，故待测血清一定要新鲜，防止血清污染及聚合IgG形成。通常4冰箱保存不能超过3天，-20保存时间可适当延长。,临床应用,CIC的检测对免疫复合物病（如血清病、SLE）是一种辅助诊断指标，对判断疾病活动和疗效有一定意义。PEG比浊法检测CIC快速、简便，敏感度达20mg/L，但不能区分免疫复合物的大小，且重复性和特异性较差，一般可以用于CIC的筛选。CIC检测方法较多，但实际工作中尚未建立公认有效的单一方法，且没有理想的标准品用于定量试验，最好采用多种方法同时进行，以增加结果的可靠性。,