DNA重组技术的基本工具动画很经典副本.ppt

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1、 这些定向改造基因的设想能实现吗？基因工程基因工程生长快、肉质好的转基因生长快、肉质好的转基因鱼鱼( (中国中国) )乳汁中含有人生长激素的乳汁中含有人生长激素的转基因牛转基因牛( (阿根廷阿根廷) )转基因实例转基因实例 基因工程基因工程是指按照人是指按照人们的愿望，进行严格们的愿望，进行严格的设计，并通过的设计，并通过体外体外DNADNA重组和转基因重组和转基因等技等技术，赋予生物以术，赋予生物以新的新的遗传特性遗传特性，从而创造，从而创造出更符合人们需要的出更符合人们需要的新的生物类型和生物新的生物类型和生物产品。由于基因工程产品。由于基因工程是在是在DNADNA分子水平分子水平上进上进

2、行设计和施工的，因行设计和施工的，因此又叫做此又叫做DNADNA重组技术重组技术或基因拼接技术或基因拼接技术。 通俗地说，就是通俗地说，就是按照人们的意愿，按照人们的意愿，把一种生物的把一种生物的某某种基因提取种基因提取出来，出来，加以加以修饰改造修饰改造，然后放到然后放到另一种另一种生物的细胞生物的细胞中，中，定向地改造生物定向地改造生物的遗传性状的遗传性状。 优点：优点： 定向改造生物性状定向改造生物性状 克服远缘杂交不亲和的障碍克服远缘杂交不亲和的障碍 育种周期短育种周期短二、基因工程的诞生二、基因工程的诞生（一）基础理论：（一）基础理论：1 1、DNADNA是遗传物质的证明是遗传物质的

3、证明2 2、DNADNA双螺旋结构和中心法则的确立双螺旋结构和中心法则的确立3 3、遗传密码的破译、遗传密码的破译（二）技术发明：（二）技术发明：1 1、基因转移载体的发现、基因转移载体的发现2 2、工具酶的发明、工具酶的发明3 3、DNADNA合成和测序技术的发明合成和测序技术的发明4 4、DNADNA体外重组的实现体外重组的实现5 5、重组、重组DNADNA表达实验的成功表达实验的成功6 6、第一例转基因生物的问世、第一例转基因生物的问世7 7、PCRPCR技术的发明技术的发明（二）技术发明：（二）技术发明： 1 DNA1 DNA重组技术的基本工具重组技术的基本工具细菌细菌供体细胞供体细胞

4、取出质粒取出质粒取出取出DNA用限制酶切断用限制酶切断DNA用连接酶连用连接酶连接目的基因接目的基因将重组将重组DNA导导入受体细胞入受体细胞扩扩增增限制性内切酶作用过程黏性末端黏性末端平末端平末端3 3、特点特点：特异性特异性 G1234512345 A3,5-磷磷酸二酯酸二酯键键3端5端3端5端磷酸二酯键磷酸二酯键16仔细观察各限制酶仔细观察各限制酶 识别的特定序列有识别的特定序列有何何 特点？特点？限制酶的识别序列限制酶的识别序列限制酶所识别的序列的特点是：限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是呈现碱基互补对称，无论是6个个碱基还是碱基还是4个碱基，都可以找到个碱基，都可以

5、找到一条中心轴线，中轴线两侧的一条中心轴线，中轴线两侧的双链双链DNA上的碱基是上的碱基是反向对称反向对称重复重复排列的排列的 ，称为，称为回文序列回文序列中轴线在G与A之间切割大肠杆菌的一种限制酶(EcoR)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRIEcoRI限制酶的作用限制酶的作用黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割 被限制酶切开的被限制酶切开的DNA两条两条单链的切口，带有几个单链的切口，带有几个伸出的伸出的核苷酸核苷酸，他们之间正好互补配他们之间正好互补配对，这样的切口叫对，这样的切口叫黏性末端黏性末端。SmaISmaI只能识别CC

6、CGGG序列，并在C和G之间切开。中轴线SmaISmaI限制酶的作用限制酶的作用在G与C之间切割SmaISmaI限制酶的切限制酶的切割割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNADNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端平末端。思考思考 在自然界中有一些生物的在自然界中有一些生物的DNADNA可能进入另一种可能进入另一种 生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 那么这类生物为什么没有在长期的进化过程中被外源那么这类生物为什么没有在长期的进化过程中被外源 D

7、NA DNA的入侵而灭绝，它们有何保护机制？的入侵而灭绝，它们有何保护机制？限制酶切割外源限制酶切割外源DNA,DNA,使之失效，使之失效，从而达到保护自身的目的！从而达到保护自身的目的！ 你能推测限制酶存在于原核生物中的你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？作用是什么吗？原核生物易受自然界外源原核生物易受自然界外源DNA的入侵，的入侵，但生物但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。制，以防止外来病原物的侵害。限制酶限制酶就是细就是细菌的一种菌的一种防御性工具，防御性工具，当外源当外源DNA侵入时，会侵入时，会利

8、用限制酶利用限制酶将外源将外源DNA切割掉，切割掉，以保证自身的以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源割外源DNA、使之失效，使之失效，从而达到从而达到保护自身保护自身的的目的。目的。寻根问底寻根问底为什么限制酶不剪切细菌本身的为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其的细胞，其DNADNA分子中分子中不具备这种限制酶不具备这种限制酶的识别切割序列的识别切割序列，或者，或者通过甲基化酶将甲通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶基转移到所识别序列的

9、碱基上，使限制酶不能将其切开不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的种限制酶也不会使自身的DNADNA被切断，并被切断，并且可以防止外源且可以防止外源DNADNA的入侵。的入侵。 基因的针线：基因的针线：DNA连接酶连接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割用同种限制酶切割两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能

10、拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来起来，注意：注意：DNADNA连接酶可连接双链连接酶可连接双链DNADNA中的中的DNADNA单链缺口，单链缺口，但不能连接单链但不能连接单链DNADNA！把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键DNADNA连接酶的作用连接酶的作用 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用所用DNADNA连接酶是否可以不加选择

11、？连接酶是否可以不加选择？连接黏性末端连接黏性末端连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端分类分类作用作用E.coli DNA连接酶连接酶连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶是一回事吗？聚合酶是一回事吗？T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用1、种类：、种类：2、作用部位：、作用部位：两类两类Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶 （扶手）（扶手）（梯子）（梯子）A A T T GA A T T GC CA AA AT TT TA AA AT TT TDNA聚合酶聚

12、合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用返回返回DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶相相同同点点作用实质作用实质化学本质化学本质不不同同点点模板模板作用对象作用对象 作用结果作用结果用途用途都能催化形成都能催化形成磷酸二酯键磷酸二酯键都是蛋白质都是蛋白质不需要不需要需要需要形成完整的重形成完整的重组组DNA分子分子形成形成DNA的一条的一条链链基因工程基因工程DNA复制复制DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶的比较聚合酶的比较只能将只能将单个核苷单个核苷酸酸连接到已有的连接到已有的DNADNA片段上，形片段上，形成磷酸二酯键成磷酸

13、二酯键在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体载体。基因工程的载体被喻为基因工程的载体被喻为：分子运输车分子运输车作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？载体的作用载体的作用载体的必载体的必要条件要条件载体的种类载体的种类阅读课本第阅读课本第6页页“分子运输车分子运输车”运载

14、体运载体的相关内容，填写下表的相关内容，填写下表自主学习自主学习质粒质粒病毒：病毒：、动植物病毒等。、动植物病毒等。 有标记基因的存有标记基因的存在，可用含青霉在，可用含青霉素的培养基鉴别。素的培养基鉴别。有切割位点有切割位点能复制并带着能复制并带着插入的目的基插入的目的基因一起复制因一起复制质粒质粒裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，之外，并具有并具有自我复制能力自我复制能力的很小的双链环状的很小的双链环状DNA分子。分子。最常用运载体最常用运载体质粒质粒 实际上实际上在基因在基因工程操作中，工程操作中，真正被用作载真正被用作载体的质粒，都体的质粒

15、，都是在天然质粒是在天然质粒的基础上进行的基础上进行过人工改造的。过人工改造的。课本知识回顾课本知识回顾 基因工程又叫做基因工程又叫做 或或 。通俗地说，就。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物是按照人们的意愿，把一种生物的某种的某种 提取出来，加以提取出来，加以 _，然后放到另一种生，然后放到另一种生物的细胞里，物的细胞里， 改造生物的遗传性状。改造生物的遗传性状。基因拼接技术基因拼接技术DNA重组技术重组技术基因基因修饰改造修饰改造定向地定向地DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具“分子手术刀分子手术刀” “分子缝合针分子缝合针” “分子运输车分子运输车”限制限制（性核酸内切）（

16、性核酸内切）酶酶DNA连接酶连接酶基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体原核生物中分离纯化出来原核生物中分离纯化出来特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键粘性末端粘性末端平末端平末端1、种类：、种类：2、作用部位：、作用部位：两类两类连接黏性末端连接黏性末端Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶磷酸二酯键磷酸二酯键连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端通常有三种通常有三种:作为载体的条件：作为载体的条件： 在进行基因工程操作中在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是真正被用作载体的质粒都是在在 质粒质粒噬菌体衍生物噬菌体衍生物动植物病毒动植物病毒天然质粒天然质粒人工改造人工改造的的能自我复制；有切割位点；能自我复制；有切割位点；有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离基础上进行过基础上进行过在基因工程中，切割运载体和在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的含有目的基因的DNA片段，需片段，需使用（使用（ ） 同种限制酶同种限制酶 B. 两种限制酶两种限制酶 同种连接酶同种连接酶 D. 两种连接酶两种连接酶