华中农业大学生物化学本科试题库-第18章--基因工程基础.doc

《华中农业大学生物化学本科试题库-第18章--基因工程基础.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《华中农业大学生物化学本科试题库-第18章--基因工程基础.doc（42页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date华中农业大学生物化学本科试题库-第18章-基因工程基础第18章 基因工程基础 (2学时)第18章 基因工程基础单元自测题(一) 名词解释1. 遗传工程 2.生物技术 3.基因工程 4.细胞工程 5.蛋白质工程 6.分子克隆 7.载体 8.转化和转染 9.基因文库 10. cDNA文库(二) 填空1自然界的常见基因转移方式有 、 、 、 。2不同DNA分子间发生的共价连

2、接称为 ，有 、 两种方式。3基因工程的载体必须具备的条件有 、 、 。4基因工程常用的载体DNA分子有 、 、和 。5一个完整的DNA克隆过程应包括 、 、 、 、 。6目的基因获取的途径或来源有 、 、 、 。7基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有 、 、 。8基因克隆真核生物表达体系常见的有 、 、 表达体系。9根据重组体DNA的性质不同，将重组体DNA导入受体细胞的方式有 、 、 等。10如果M13的外源基因被插入到lac Z基因内，则在含有X-gal的培养基上生长时会出现 色菌落，如果在lac Z基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现 色菌落。11当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接

3、触时， 就可以从一个细胞(细菌)转移到另一细胞(细菌)，这种类型的DNA转移称为 作用。12重组DNA技术中常用的工具酶有 、 、 、 。(三) 选择题1下列那种方式保证了免疫球蛋白的多样性?A. 转化 B. 转染 C. 转位 D. 转导 2微切割技术使目的基因可来源于下列那种物质?A. 真核细胞染色体DNA B. 人工合成DNA C. cDNA D. G-文库 3重组DNA技术中常用的工具酶下列那项不是：A. 限制性核酸内切酶 B. DNA连接酶 C. DNA聚合酶I D. RNA聚合酶 4DNA致癌病毒感染宿主细胞后，使之发生癌变是因为发生了：A. 转化 B. 转导 C. 接合 D. 转座

4、 5关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的? A. 基因工程也称基因克隆 B . 只有质粒DNA可作为载体 C . 重组体DNA转化或转染宿主细胞 D. 需获得目的基因6有关质粒的叙述，下列哪项是错误的?A. pB R322含有-半乳糖苷酶的片段基因B. 质粒较易转化C. 质粒的遗传表型可作为转化子的筛选依据 D. pB R322的分子中仅有一个E.coR I 内切酶位点7下列哪项不是重组DNA的连接方式?A. 粘性末端与粘性末端的连接B 平端与平端的连接C . 粘性末端与平端的连接D . 人工接头连接8有关噬菌体的叙述哪项不符合? A. 感染大肠杆菌时仅把D NA注入大肠杆菌内 B. 只有裂解

5、一种生活方式 C . 溶源和裂解两种生活方式可以相互转变 D. 噬菌体是由外壳蛋白和D NA组装而成9D NA克隆不包括下列哪项步骤? A. 选择一个适合的载体 B . 重组体用融合法导入细胞 C . 用连接酶连接载体D NA和目的D NA，形成重组体 D . 用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌10下列哪项不能作为表达载体导人真核细胞的方法? A. 磷酸钙转染 B . 电穿孔 C . 脂质体转染 D . 氯化钙转染11. 下列哪项不能作为基因工程重组体的筛选方法?A. PC R技术B. 宿主菌的营养缺陷标志补救C . 抗药性标志选择D. Southern印迹12关于转化错误的是： A.

6、受体细胞获得新的遗传表型 B. 外源D NA一定整合进受体细胞基因组 C. 自然界中较大的外源D NA转化几率较低 D. 自然界中较大的外源DNA转化几率较高13下列哪种酶是重组DNA技术中最重要的? A. 反转录酶 B. 碱性磷酸酶 C. DNA连接酶 D. DNA聚合酶I 14在分子生物学中，基因克隆主要指： A. DNA的复制 B. DNA的转录 C. DNA的剪切 D. RNA的转录 15在分子生物学中，重组DNA又称为： A. 酶工程 B. 蛋白质工程 C. 细胞工程 D. 基因工程 16cDNA是指： A. 在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B. 在体外经反转录合成的与DN

7、A互补的DNA C . 在体外经反转录合成的与RNA互补的RNA D. 在体内经反转录合成的与RNA互补的RNA17聚合酶链式反应常常缩写为： A. PRC B. PER C. PC R D. B C R 18在已知DNA序列的情况下，获取目的基因的最方便的方法是： A. 人工化学合成 B. 基因组文库法 C. cDNA文库法 D. PCR法 19用于PC R反应的酶是： A. DNA连接酶 B. TaqDNA聚合酶 C. 逆转录酶 D. 碱性磷酸酶 20在cDNA技术中，所形成的发夹环可用 A. 限制性内切核酸酶切除 B. 用3外切核酸酶切除 C. 用S1核酸酶切除 D. 用5外切核酸酶切除

8、21，cDNA文库包括该种生物的 A. 某些蛋白质的结构基因 B. 所有蛋白质的结构基因 C. 所有结构基因 D. 内含子和调控区22关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确? A. 具有可诱导性 B. 具有可转移性 C. 细菌生长的任何时期都可以出现 D. 不同细菌出现感受态的比例是不同的 23在简并引物的3端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为 A. Taq酶具有一定的不精确性 B. 便于排除错误碱基的掺人 C. 易于退火 D. 易于重组连接24变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是 A. 氧化物会改变pH值 B. 氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂 C. 氧化物

9、同DNA形成复合物 D. 氧化物在DNA分离后不易除去(四) 是非题1. 基因表达的最终产物都是蛋白质。 2因为密码子是不重叠的，所以基因也是不重叠。3基因有两条链，与mRNA碱基序列相同(仅T代替了U)的链称为正链。4RNA是基因表达的第一产物。5. 在细菌中，一些酶的合成有赖于这些酶的基因的连续表达。6原核生物中tRNA基因的转录是由RNA聚合酶完成。 7毫无例外，从结构基因中的DNA序列可以推出相应的蛋白质序列。8蛋白质的氨基酸序列是由基因的编码区核苷酸序列决定的，只要将基因的编码序列转入细胞，就能合成相应的蛋白质。9利用基因工程的手段，包括基因的定点突变等改造蛋白质分子，使之具有更完善

10、，更符合人类要求的功能，这种技术和学科被称之为蛋白质工程。10基因工程的特点是在分子水平上操作，在细胞水平上表达。11DNA连接酶常用来连接载体DNA和外源性DNA。12质粒不能在宿主细胞中独立自主地进行复制。（五） 问答题1 什么叫基因克隆?简述基因克隆的步骤。2、基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的？3简述重组DNA技术中目的基因的获取来源和途径。4简述互补筛选重组体质粒细菌的原理。5基因工程中重组体筛选的方法有哪些?6基因工程E.coli表达体系的表达载体必须符合哪些标准?7常用的真核表达体系有哪些？常用于细胞转染的方法有哪些？8已知有一mRNA分子，你怎样才能使它翻译出相

11、应的蛋白质？简述其过程。9. 作为基因工程的载体必须具备哪些条件?10简并引物设计的一般原则是什么?11什么是蓝白斑筛选法？12. 什么是基因组文库(genomic library)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?13什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?14自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?15YAC克隆载体常出现哪些问题?六、参考答案(一) 名词解释1遗传工程是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。借用工程技术上的设计思想，在离体条件下，对生物细胞、细胞器

12、、染色体或DNA分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。2生物技术又称生物工艺学，生物工程学。是根据生物学、化学和工程学的原理进行工业规模的经营和开发微生物、动植物细胞及其亚细胞组分，进而利用生物体所具有的功能元件(如基因、蛋白质)等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。它包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等。 3基因工程(gene engineering)又称基因操作(gere emanipulation)、重组DNA(recombinant DNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来

13、源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。4细胞工程(cell engineering)应用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术，以及在体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品，或利用细胞体本身的技术领域。主要内容包括细胞融合、细胞拆合、染色体转移、基因转移、细胞或组织培养等。由于所用细胞的来源不同，细胞工程又分为微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程等。5蛋白质工程(protein engineering)是更

14、广义上的包括酶工程在内的蛋白质修饰操作，通过对蛋白质及酶的化学修饰及基因改造获得具有特殊功能的非天然蛋白质的技术。主要是根据蛋白质的结构和功能间的相互关系，利用基因工程技术，或用化学方法合成基因、改造基因，以便合成新的蛋白质，或改变蛋白质的活性、功能以及溶解性等。6.克隆(clone)意为无性繁殖系。DNA克隆即将DNA的限制酶切片段插入克隆载体，导入宿主细胞，经无性繁殖，以获得相同的DNA扩增分子。故DNA克隆为分子克隆。7.将外源DNA带入宿主细胞并进行复制的运载工具，称为载体（vector）。克隆载体通常是由质粒、病毒或一段染色体DNA改造而成。8.转化和转染 将外源DNA导入宿主细胞，

15、从而改变细胞遗传性状，称为转化；将病毒DNA直接导入细跑，称为转染。9.基因文库 基因文库是指整套基因组DNA片段分子克隆的总体。基因文库的构建包括基因组DNA的随机片段化、载体DNA的制备、重组体DNA的体外包装、重组噬菌体感染大肠杆菌、基因文库的鉴定和扩增等步骤。 10. cDNA文库 细胞全部mRNA的cDNA克隆之总体，称为cDNA文库。(二) 填空1接合作用 转化作用 转导作用 转座 2基因重组 位点特异的重组 同源重组 3. 能独立复制 便于检测 可导入宿主细胞 4质粒DNA 噬菌体DNA 病毒DNA 5. 目的基因的获取 基因载体的选择与构建 目的基因与载体的拼接 重组体导入受体

16、细胞 筛选与鉴定出阳性克隆 6化学合成法 基因组DNA cDNA 聚合酶链式反应 7抗药性标志选择 标志补救 分子杂交 8酵母 昆虫 哺乳动物细胞 9转化 转染 感染 10白 蓝 11质粒DNA 接合作用 12限制性核酸内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶I 反转录酶 (三) 选择题1. D2. A3. D4. A5. B6. A7. C8. B9. B10. D11. A12. D13. C14. A15. D16. A17. C18. D19. B20. C21. C22. C23. B24. B(四) 是非题：1错2错3对4对5对6错7错8错9对10对11对12错(五) 问答题1. 基因克

17、隆(gene cloning)是指含有单一DNA重组体的无性系或指将DNA重组体引进受体细胞中，建立无性系的过程。一个完整的基因克隆过程包括：a目的基因和载体的选择。b. 限制性内切酶处理的基因和载体。c目的基因与载体的连接。d重组体导入受体细胞。e筛选转化细胞。 2大分子量的DNA会含有许多特殊限制性内切核酸酶的限制位点，因此用一种限制酶处理一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的DNA片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全部片段与用同种限制酶处理过的载体分子混合时(图A141)，每个片段将插入一个不同的载体分子(比如一个质粒)，同样地，当用这些质粒转化宿主细胞时

18、，每个宿主细胞将只接收一个质粒DNA分子而筛选出的含重组质粒的每个菌落实际上会含有某一特异的供体DNA片段的多个拷贝。一旦带有待研究的特定基因的克隆被确认了，此重组DNA分子可从宿主细胞中提取出来进行纯化。3. 目的基因的获取主要有以下几种途径：化学合成法：已知某种基因的核苷酸序列或根据某种基因产物的aa序列推导出该多肽链编码的核苷酸序列，再利用DNA合成法合成。基因组DNA：一个细胞或病毒所携带的全部遗传信息，或整套基因的全部DNA片段。从基因组DNA文库中获得。cDNA文库。聚合酶链式反应PCR(polymerase chain reaction)。4. M13噬菌体的基因间隔区插入E.c

19、oli的调节基因及Lac Z-半乳糖苷酶基因的N-端146个aa残基编码基因，其产物为-半乳糖苷酶的-片段。而突变型Lac-E.coli可表达-半乳糖苷酶的-片段(酶的C-端)，单独的-片段及-片段均无-半乳糖苷酶的活性，当含有Lac Z的M13噬菌体转化Lac-E.coli细菌时，-片段及-片段共同表达，宿主Lac-E.coli细菌才有-半乳糖苷酶活性，使特异的作用物变为兰色化合物，(生长的细菌为兰色)这就是-互补。可用于重组体的筛选。如果目的基因插入Lac Z基因内，则Lac Z不表达，为白色菌落。5重组体的筛选方法有：直接法(direct selection)：针对载体携带的某种或某些标

20、志基因和目的基因而设计的筛选方法称直接法。其特点是：直接测定基因或基因表型。A抗药性标志筛选：如克隆载体携带有某个(些)抗药基因，如：ampr、tetr等。只有被转化的细菌才能在含有该抗生素的培养基上生长，并形成菌落，使转化菌与非转化菌区别开。如重组体中的外源性基因插入到标志性基因内，标志性基因则失活，通过有或无抗菌素培养基对比培养，即可区分单纯载体转化菌和重组体(含目的基因的载体)转化菌。如：将目的基因插入tetr基因中，该载体就失去tetr抗药性，但仍有apmr抗药性，被转化的细菌(含重组体)可在含有apmr培养基生长，而不能在tetr培养基生长。也叫插入灭活法。B补救标志(rescue

21、marker)筛选：如克隆基因能够在宿主菌表达，且表达产物与宿主菌的营养缺陷互补，那么就可以利用营养突变菌株进行筛选，这就是标志补救。如：酵母咪唑甘油磷酸脱水酶基因表达产物与细菌组氨酸合成有关。当酵母DNA与噬菌体载体结合后，在转染或感染组氨酸缺陷型大肠杆菌，在无组氨酸的培养基中培养，只有含重组体的细菌能生长(因有咪唑甘油磷酸脱水酶)。再如：-互补也是一种标志补救。C.杂交法：利用32P标记的探针与转移到硝酸纤维素膜上的转化子DNA或克隆的DNA片段进行分子杂交，直接选择鉴定目的基因。如：原位杂交Southern blotting(DNA-DNA杂交)。免疫学方法(非直接法)：是利用特异抗体与

22、目的基因的表达产物相互作用进行的筛选。分为：免疫化学法和酶免疫检测分析。免疫化学法：原理为将培养的转化子菌落，经氯仿蒸汽裂解，释放抗原，再将固定有抗血清(目的基因编码蛋白特异的免疫血清)的聚乙烯膜覆盖在裂解菌落上，在膜上形成抗原抗体复合物，再与125I-IgG反应，最后放射自显影，检出阳性菌落。6含有大肠杆菌适宜的选择标志，具有强的启动子，含有适当的翻译控制序列，含有合理设计的多接头克隆位点。7. 真核表达体系常见的有：酵母，昆虫，哺乳类动物细胞等。重要的是将重组体导人细胞。即转染(将表达载体导人真核细胞的过程)。常见的转染方法有：磷酸钙转染、DEAE葡聚糖介导转染、电穿孔、脂质体转染、显微注

23、射等。8已知有一mRNA分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质呢?其过程如下：首先以mRNA分子为模板，进行反转录，合成cDNA，再合成双链cDNA，扩增后与载体连接形成重组体，转染表达载体，筛选出克隆，进行基因表达即可。9作为基因工程的载体必须具备的条件是：能独立自主复制、易转化、易检测(含有抗药性基因等)。10(1)选择保守区设计简并引物； (2)选择简并性低的氨基酸密码区设计引物； (3)注意密码的偏爱性； (4)使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用1520个碱基。 (5)由于TaqDNA聚合酶在PCR扩增时容易掺人错误碱基，所以设计的引物，其3端尽量使用具有简并密码的氨基酸。11

24、这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5-溴4氯3引哚D半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插入lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac的宿主菌后，在含有5溴4氯3引哚D半乳糖苷(X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。12基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：(1)高分子量染色体DN

25、A的制备；(2)体外重组连接；(3)包装蛋白的制备；(4)重组体的体外包装；(5)将重组DNA导人寄主细胞；(6)筛选。 基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库(gene p001)是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。13同mRNA互补的DNA称为cDNA。cDNA文库是以某一生物的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成一互补的DNA,IIp第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到的双链DNA称为

26、cDNA。选用适合的载体，将合成的cDNA重组导人寄主细胞，经筛选得到的cDNA克隆群称为cDNA文库。由于cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。 由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性，有些则需要特殊的环境条件。所以，cDNA文库是不可能构建得十分全，也就是说任何一个cDNA文库都不可能包含某一生物全部编码基因。cDNA文库与基因组文库的主要差别是： (1)基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列，cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因； (2)基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响

27、；cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列，因它受发育和调控因子的影响； (3)基因组文库中的编码基因是真实基因，含有内含子和外显子；而cDNA克隆的是不含内含子的基因。14. 基本内容包括： (1)删除一些非必要的区段及对宿主有不良影响的区段，削减载体的分子量，使载体具有更大的容纳外源片段的能力。 (2)加上易于选择或检测的标记。 (3)限制性内切核酸酶的酶切位点的改造，便于外源基因插入到载体中的特定位置。 (4)加上一些调控元件，有利于克隆基因的表达。(5)安全性改造，限定载体的宿主范围。15(1)YAC有嵌合现象，一个YAC中克隆的DNA片段可能来自两个或多个不同的染色体。在基因组文库中，嵌合体占克隆总数的550。由特定的染色体构建的文库，嵌合体占克隆总数的515。 (2)YAC内部有重组现象，插人的DNA较大，序列发生重排，导致和原来染色体的序列不一致，重组很难检出。 (3)YAC还有缺失现象，影响YAC文库的代表性。 (4)YAC结构和酵母天然染色体结构相似，使用常规方法不易将YAC和酵母天然染色体分开。 (5)构建好的YAC转化原生质化的酵母菌，转化效率低。 (6)建好库后保存方便，但要筛选某个基因时工作量大。-