最新医学分子生物学-序精品课件.ppt

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1、基本内容基本内容 第一篇第一篇 基因基因 第二篇第二篇 蛋白质蛋白质 第三篇第三篇 细胞信号转导的分子机制（略）细胞信号转导的分子机制（略） 第四篇第四篇 细胞增殖、分化与细胞凋亡的分子机制细胞增殖、分化与细胞凋亡的分子机制 第五篇第五篇 分子生物学实验技术分子生物学实验技术载体载体(vector)(vector) 载体载体是携带靶是携带靶DNADNA片段进入宿主细胞进行扩增和表片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。达的工具。 质粒（质粒（plasmid)plasmid)为最常用的载体。细菌染色体外为最常用的载体。细菌染色体外小型双链环状小型双链环状DNADNA复制子，对细菌的某些代谢活动复制

2、子，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型有一些作用。质粒载体是在天然质和抗药性表型有一些作用。质粒载体是在天然质粒基础上人工改造拼接而成，其不仅可以在细菌粒基础上人工改造拼接而成，其不仅可以在细菌中复制，同时在添加真核细胞复制信号和启动子中复制，同时在添加真核细胞复制信号和启动子后，可构建成真核细胞复制表达的穿梭质粒，用后，可构建成真核细胞复制表达的穿梭质粒，用途非常广泛。途非常广泛。 其他载体：其他载体：噬菌体、粘粒、病毒等噬菌体、粘粒、病毒等基因研究的几种重要分析方法基因研究的几种重要分析方法 限制性内切酶酶谱分析限制性内切酶酶谱分析 核酸分子杂交核酸分子杂交 核苷酸序列分析核苷酸序列分析限制

3、性内切酶谱限制性内切酶谱 利用内切酶的功能对基因组或单个基因进行酶切，利用内切酶的功能对基因组或单个基因进行酶切，经过多种酶（至少三个）的多个切点的反复比较，经过多种酶（至少三个）的多个切点的反复比较，可以得到某一基因的酶切图谱。可以得到某一基因的酶切图谱。 如在某些疾病（特别是遗传病）时，基因结构或如在某些疾病（特别是遗传病）时，基因结构或碱基序列发生变化（突变、缺失、插入），此时碱基序列发生变化（突变、缺失、插入），此时酶切图谱会有改变。利用限制性片段长度多态性酶切图谱会有改变。利用限制性片段长度多态性（RFLPRFLP）进行分析。）进行分析。核酸分子杂交（核酸分子杂交（hybridiza

4、tion)hybridization) 具有一定同源性的两条单链在一定条件下（适宜具有一定同源性的两条单链在一定条件下（适宜的温度和离子强度等），可按碱基互补原则退火的温度和离子强度等），可按碱基互补原则退火形成双链，杂交过程是高度特异性的。形成双链，杂交过程是高度特异性的。 杂交的双方是待测序列（靶序列）和探针，通常杂交的双方是待测序列（靶序列）和探针，通常探针是经过标记的（同位素、生物素、化学发光探针是经过标记的（同位素、生物素、化学发光物质），靶序列可以是克隆的基因片段，也可以物质），靶序列可以是克隆的基因片段，也可以是基因组，可以在体外进行（杂交膜上），也可是基因组，可以在体外进行（杂

5、交膜上），也可以在细胞内进行（原位杂交）。以在细胞内进行（原位杂交）。 cDNAcDNA芯片为杂交检测的一个发展。芯片为杂交检测的一个发展。核苷酸序列分析核苷酸序列分析 （sequencing)sequencing)测序分析测序分析是基因研究中最精确的分析，所以又称为是基因研究中最精确的分析，所以又称为一级结构分析。一级结构的了解是进一步分析基一级结构分析。一级结构的了解是进一步分析基因结构和功能关系的前提，同时对基因表达、调因结构和功能关系的前提，同时对基因表达、调控的研究也是非常重要的。控的研究也是非常重要的。 主要方法是主要方法是sangersanger提出的酶法（末端终止法）提出的酶法（末端终止法）和和MaxamMaxam、GilbertGilbert提出的化学降解法。提出的化学降解法。 现在在此基础上将测序工作自动化，大大加快现在在此基础上将测序工作自动化，大大加快了测序的速度，正是有了自动测序技术，才能提了测序的速度，正是有了自动测序技术，才能提前完成了人类基因组的测序工作。前完成了人类基因组的测序工作。Thanks!15 结束语结束语