最新十一章蛋白质的生物合成幻灯片.ppt

《最新十一章蛋白质的生物合成幻灯片.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新十一章蛋白质的生物合成幻灯片.ppt（80页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、十一章蛋白质的生物合成十一章蛋白质的生物合成 引引 言言 一、遗传密码一、遗传密码 19541954年物理学家年物理学家G. GamovG. Gamov首先对遗传密码进首先对遗传密码进行探讨。蛋白质由行探讨。蛋白质由2020种基本氨基酸组成，而种基本氨基酸组成，而mRNAmRNA只含有只含有4 4种核苷酸，由种核苷酸，由4 4种核苷酸构成的序列是如种核苷酸构成的序列是如何决定多肽链中多至何决定多肽链中多至2020种氨基酸的序列的呢？显种氨基酸的序列的呢？显然，在核苷酸和氨基酸之间不能采取简单的一对然，在核苷酸和氨基酸之间不能采取简单的一对一的对应关系。一的对应关系。2 2个核苷酸决定一个氨基酸

2、也只能个核苷酸决定一个氨基酸也只能编码编码1616种氨基酸，如果用种氨基酸，如果用3 3个核苷酸决定一个氨基个核苷酸决定一个氨基酸，酸，4 43 3=64=64，就足以编码，就足以编码2020种氨基酸了，这说明可种氨基酸了，这说明可能需要能需要3 3个或更多个核苷酸编码一个氨基酸。个或更多个核苷酸编码一个氨基酸。 一、遗传密码一、遗传密码 1961年年Francis Crick及其同事的遗传实验及其同事的遗传实验进一步肯定进一步肯定3个碱基编码一个氨基酸，此三联个碱基编码一个氨基酸，此三联体碱基即称为密码子。他们研究体碱基即称为密码子。他们研究T4噬菌体噬菌体 位点位点A和和B两个顺反子变异的

3、影响，这两个基因两个顺反子变异的影响，这两个基因与噬菌体能否感染大肠杆菌与噬菌体能否感染大肠杆菌 株有关。株有关。 他们的研究发现，在上述位点缺失一个核他们的研究发现，在上述位点缺失一个核苷酸产生的突变体，不能感染大肠杆菌苷酸产生的突变体，不能感染大肠杆菌 株。株。 一、遗传密码一、遗传密码 缺失或插入核苷酸引起三联体密码的改变缺失或插入核苷酸引起三联体密码的改变 一、遗传密码一、遗传密码 在理论上，遗传密码可以通过简单的比较在理论上，遗传密码可以通过简单的比较 mRNA的碱基序列及其所编码的多肽的氨基酸的碱基序列及其所编码的多肽的氨基酸序列进行确定，然而在序列进行确定，然而在 20 世纪世纪

4、 60 年代，此年代，此方法不可行，因为当时分离方法不可行，因为当时分离 mRNA 并测定其并测定其序列的方法尚未建立。序列的方法尚未建立。 2.遗传密码的解读 1961年年 Nirenberg 等用大肠杆菌无细胞等用大肠杆菌无细胞体系，外加体系，外加 20 种氨基酸的混合物（其中有一种氨基酸的混合物（其中有一种氨基酸被同位素标记）及种氨基酸被同位素标记）及 poly U，经保温经保温反应后，得到了被标记的苯丙氨酸的多聚体，反应后，得到了被标记的苯丙氨酸的多聚体，从而证明从而证明 poly U起了信使起了信使 RNA 的作用，的作用， UUU是编码苯丙氨酸的密码子。用同样的方是编码苯丙氨酸的密

5、码子。用同样的方法证明法证明 CCC 编码脯氨酸，编码脯氨酸，AAA 编码赖氨酸编码赖氨酸。这样，这三个密码子最早被解译出来了。这样，这三个密码子最早被解译出来了。 2.遗传密码的解读 Nirenberg 和和 Ochoa 等又进一步用两种核苷等又进一步用两种核苷酸或三种核苷酸的共聚物作模板，重复上述实验。酸或三种核苷酸的共聚物作模板，重复上述实验。例如，用例如，用U和和G 随机排列组成的共聚物可以出现随机排列组成的共聚物可以出现 8 种不同的三联体，即种不同的三联体，即GGG，GGU，GUG，UGG，UUG，UGU，GUU，UUU。 酶促合成共聚核苷酸时，根据加入核苷酸底物酶促合成共聚核苷酸

6、时，根据加入核苷酸底物的比例可以计算出各种三联体出现的频率，而标记的比例可以计算出各种三联体出现的频率，而标记氨基酸掺入新合成的肽链的相对量与三联体密码出氨基酸掺入新合成的肽链的相对量与三联体密码出现的频率相符合现的频率相符合 2.遗传密码的解读 UUUGUUGGU2.遗传密码的解读 1964年年Nirenberg等发现在无蛋白质合成的等发现在无蛋白质合成的情况下，三联核苷酸能促进特异的情况下，三联核苷酸能促进特异的tRNA与核糖与核糖体结合。例如，加入体结合。例如，加入pUpUpU促进脯氨酸促进脯氨酸tRNA与之结合，与之结合，pApApA促进赖氨酸促进赖氨酸tRNA与之结合与之结合进一步要

7、解决的问题是密码子中三个碱基的排列顺序进一步要解决的问题是密码子中三个碱基的排列顺序2.遗传密码的解读 将结合的氨酰将结合的氨酰- - tRNA-三核苷酸三核苷酸-核糖体吸核糖体吸附在硝酸纤维素滤膜上，这样，凡是结合在核糖附在硝酸纤维素滤膜上，这样，凡是结合在核糖体（带特定氨基酸）上的体（带特定氨基酸）上的tRNA分子在通过硝酸分子在通过硝酸纤维素滤膜时被截留下来，而未结合的纤维素滤膜时被截留下来，而未结合的tRNA则则可通过。由于可通过。由于三核苷酸模板只能与一定的三核苷酸模板只能与一定的tRNA对应，而一定的对应，而一定的tRNA又只与特定的氨基酸结合又只与特定的氨基酸结合，所以只要带标记

8、的氨基酸被，所以只要带标记的氨基酸被滤膜，就可以测出滤膜，就可以测出三联体对应氨基酸的密码子。三联体对应氨基酸的密码子。2.遗传密码的解读 利用此系统，通过合成所有利用此系统，通过合成所有64种可能的三联种可能的三联体，测定每种三联体对体，测定每种三联体对20种氨基酸相应的种氨基酸相应的tRNA与核糖体结合的影响，已使与核糖体结合的影响，已使50多种密码子被解多种密码子被解译出来。但还有一些三联体编码的氨基酸不能肯译出来。但还有一些三联体编码的氨基酸不能肯定，需要用其他方法来破译。定，需要用其他方法来破译。 2.遗传密码的解读 与此同时，与此同时，Khorana 应用合成的具有重复应用合成的具

9、有重复序列的多核苷酸如序列的多核苷酸如UCUCUCUC进行体外蛋白质进行体外蛋白质人工合成，发现产物为丝氨酸与亮氨酸交替出现人工合成，发现产物为丝氨酸与亮氨酸交替出现的多肽：的多肽：Ser Leu Ser Leu，说明说明UCU编码丝编码丝氨酸，而氨酸，而CUC编码亮氨酸。编码亮氨酸。 2.遗传密码的解读 当一合成的三联核苷酸重复序列，如当一合成的三联核苷酸重复序列，如 poly（UUC）作模板时，由于阅读框架不同，得到的作模板时，由于阅读框架不同，得到的产物是三种不同的均聚多肽：多聚苯丙氨酸、多产物是三种不同的均聚多肽：多聚苯丙氨酸、多聚丝氨酸和多聚亮氨酸，说明聚丝氨酸和多聚亮氨酸，说明UU

10、C编码苯丙氨酸编码苯丙氨酸、 UCU编码丝氨酸、编码丝氨酸、 CUU编码亮氨酸。编码亮氨酸。 通过分析各种两个和三个核苷酸重复序列编通过分析各种两个和三个核苷酸重复序列编码的多肽，确认了许多密码子的一致性并填补了码的多肽，确认了许多密码子的一致性并填补了遗漏的遗传密码遗漏的遗传密码。 2.遗传密码的解读 UUUGUUGGU2.遗传密码的解读 v 密码的无标点性、无重叠性密码的无标点性、无重叠性 3.遗传密码的特点v 密码子的简并性密码子的简并性一个氨基酸可以有几个不同的密码子的特性一个氨基酸可以有几个不同的密码子的特性。同义密码子：编码同一个氨基酸的一组密码子。同义密码子：编码同一个氨基酸的一

11、组密码子。注意：注意：Trp Trp 和和 MetMet只有一个密码子。只有一个密码子。LeuLeu、ArgArg、Ser Ser 均有均有6 6个密码子。个密码子。ATG CGG AAA TGG CCG AAT GATv 密码子的通用性和例外密码子的通用性和例外 密码子的通用性是指生物细胞共同使用同密码子的通用性是指生物细胞共同使用同一套遗传密码字典。只有在一些线粒体中使用一套遗传密码字典。只有在一些线粒体中使用的遗传密码与通用密码有所区别。所以说遗传的遗传密码与通用密码有所区别。所以说遗传密码基本通用，但非绝对通用。密码基本通用，但非绝对通用。3.遗传密码的特点 v 起始密码子和终止密码子

12、起始密码子和终止密码子 在在6464个密码子中，有个密码子中，有3 3个密码子不编码任何个密码子不编码任何氨基酸，从而成为肽链合成的终止信号，称为氨基酸，从而成为肽链合成的终止信号，称为终止密码子或无义密码子，它们是终止密码子或无义密码子，它们是UAAUAA、UAGUAG、UGAUGA。其余的其余的6161个密码子均编码不同的氨基酸，个密码子均编码不同的氨基酸，其中其中AUGAUG既是既是MetMet的密码子，又是肽链合成的起的密码子，又是肽链合成的起始信号，称为起始密码子。始信号，称为起始密码子。v 密码子的摆动性密码子的摆动性 密码子的专一性主要是由前两位的碱基决定密码子的专一性主要是由前

13、两位的碱基决定，而第三位碱基有较大的灵活性。，而第三位碱基有较大的灵活性。3.遗传密码的特点二、二、 mRNAmRNA mRNAmRNA的功能结构的功能结构 mRNAmRNA上能够编码一条多肽链合成的区段叫做编码区。上能够编码一条多肽链合成的区段叫做编码区。原核生物原核生物 mRNAmRNA：其一条其一条mRNAmRNA链可编码多个多肽链，称为多顺反链可编码多个多肽链，称为多顺反子的子的mRNAmRNA。 编码区的第一个密码子必定是编码区的第一个密码子必定是AUGAUG，最后一最后一个密码子必定是个密码子必定是UAAUAA或或UAGUAG或或UGAUGA，从第一个密码从第一个密码子到最后一个密

14、码子之间间隔子到最后一个密码子之间间隔3 3n n个核苷酸。个核苷酸。3非编码区5非编码区编码区非编码区编码区非编码区编码区二、二、 mRNAmRNA真核生物真核生物mRNAmRNA：其一条其一条mRNAmRNA链只能编码一个多肽链，称为单顺反子的链只能编码一个多肽链，称为单顺反子的mRNAmRNA。编 码 区5非编码区帽子PolyA尾巴3非编码区 mRNAmRNA的功能结构的功能结构 三、三、 核糖体核糖体 19551955年，年，Paul ZamecnikPaul Zamecnik通过实验确认核糖体是蛋通过实验确认核糖体是蛋白合成的场所。他将放射性同位素标记的氨基酸注射白合成的场所。他将放

15、射性同位素标记的氨基酸注射到小鼠体内，经短时间后取出肝脏，制成匀浆，离心到小鼠体内，经短时间后取出肝脏，制成匀浆，离心后分成细胞核、线粒体、微粒体和可溶部分。发现微后分成细胞核、线粒体、微粒体和可溶部分。发现微粒体中的放射性强度最高，若将微粒体部分进一步分粒体中的放射性强度最高，若将微粒体部分进一步分级分离，可在核糖体中大量回收到所掺入的放射性，级分离，可在核糖体中大量回收到所掺入的放射性，这说明核糖体是合成蛋白质的部位。这说明核糖体是合成蛋白质的部位。 1. 1. 核糖体的存在部位核糖体的存在部位 三、三、 核糖体核糖体 真核生物的核糖体一部分在细胞质中呈游离真核生物的核糖体一部分在细胞质中

16、呈游离状态，另一部分与内质网结合，形成粗面内质状态，另一部分与内质网结合，形成粗面内质网。此外在其线粒体和叶绿体中也有核糖体。网。此外在其线粒体和叶绿体中也有核糖体。原核生物的核糖体存在于细胞质中；原核生物的核糖体存在于细胞质中；核糖体是一个巨大的核糖核蛋白体 2. 2. 核糖体的组成核糖体的组成核糖体核糖体rRNArRNA蛋白质蛋白质原核生原核生物物7070S S3030S S1616S S2121种种5050S S2323S S、5S5S3131种种真核生真核生物物8080S S4040S S1818S S30-3230-32种种6060S S2828S S、5S5S、5.8S5.8S36

17、-5036-50种种 三、三、 核糖体核糖体2. 2. 核糖体的组成核糖体的组成 三、三、 核糖核糖体体A three-dimensional model for the E.coli ribosomemRNAmRNA结合部位：结合部位： 大小亚基之间存在一条细沟，用于接纳大小亚基之间存在一条细沟，用于接纳mRNAmRNA； 此外，小亚基的此外，小亚基的1616S rRNAS rRNA可以与可以与mRNAmRNA相相互作用，从而参与互作用，从而参与mRNAmRNA与核糖体的结合。与核糖体的结合。 3. 3. 核糖体上的活性部位核糖体上的活性部位(1) (1) 结合部位结合部位 三、三、 核糖体

18、核糖体3. 3. 核糖体上的活性部位核糖体上的活性部位tRNAtRNA结合部位：有结合部位：有2 2个个 氨酰基部位（氨酰基部位（A A位）位） 氨酰氨酰tRNAtRNA的结合部位的结合部位 肽基部位肽基部位 （P P位）位） 正在延长的多肽基正在延长的多肽基 tRNA tRNA的结合部位；的结合部位； tRNA tRNA的这两个结合部位有一小部分在的这两个结合部位有一小部分在3030S S亚基内，大部分在亚基内，大部分在5050S S亚基内。亚基内。 三、三、 核糖体核糖体催化肽键形成的部位：催化肽键形成的部位： 称为肽基转移酶，又叫转肽酶。位于大亚基上。称为肽基转移酶，又叫转肽酶。位于大亚

19、基上。 1992 1992年发现该活性是由年发现该活性是由2323S rRNAS rRNA提供的。提供的。 3. 3. 核糖体上的活性部位核糖体上的活性部位(2) (2) 催化部位催化部位催化催化GTPGTP水解的部位：水解的部位： 位于大亚基上，在核糖体移位期间将位于大亚基上，在核糖体移位期间将GTPGTP水解成水解成GDPGDP和和PiPi。(1) (1) 结合部位结合部位 三、三、 核糖体核糖体 四、四、tRNAtRNAThe general structure of tRNA molecules 四、四、tRNAtRNA 被特定的氨酰被特定的氨酰- -tRNAtRNA合成酶所识别。合成

20、酶所识别。 识别识别mRNAmRNA链上的密码子，这是因为链上的密码子，这是因为tRNAtRNA上有上有3 3个特定碱基组成的一个反密码子与个特定碱基组成的一个反密码子与mRNAmRNA链链上的密码子配对，保证氨基酸按上的密码子配对，保证氨基酸按mRNAmRNA的碱基的碱基顺序入号。顺序入号。 tRNAtRNA将多肽链联结在核糖体上。将多肽链联结在核糖体上。tRNA的功能 五五、辅助辅助因子因子 在蛋白质合成体系中，还有溶解在胞质中的蛋在蛋白质合成体系中，还有溶解在胞质中的蛋白质，在蛋白质合成的不同阶段起作用，分别有：白质，在蛋白质合成的不同阶段起作用，分别有： 起始因子（起始因子（IFIF）

21、：原核生物中有原核生物中有IF1IF1、IF2IF2、IF3IF3延长因子（延长因子（EFEF）：原核生物中有原核生物中有EF-TuEF-Tu、EF-TsEF-Ts、EF-GEF-G终止因子（终止因子（RFRF）：原核生物中有原核生物中有RF1RF1、RF2RF2、RF3RF3 五五、辅助辅助因子因子 ATPATP、GTPGTP、MgMg2+2+第二节第二节 蛋白质的生物合成蛋白质的生物合成一、氨基酸的活化一、氨基酸的活化 游离氨基酸掺入多肽链以前必须活化即氨游离氨基酸掺入多肽链以前必须活化即氨基酸与特异基酸与特异tRNA形成氨酰形成氨酰-tRNA。原因有两原因有两个：第一，蛋白质的合成依赖于

22、个：第一，蛋白质的合成依赖于tRNA的接头的接头作用，以保证正确的氨基酸得到整合，每个氨作用，以保证正确的氨基酸得到整合，每个氨基酸为了参与蛋白质合成必须共价连接到基酸为了参与蛋白质合成必须共价连接到tRNA分子上。第二，氨基酸与分子上。第二，氨基酸与tRNA之间形成之间形成的共价键是一个高能键，它使氨基酸和正在延的共价键是一个高能键，它使氨基酸和正在延伸的多肽链末端反应形成新的肽键，因此伸的多肽链末端反应形成新的肽键，因此, 这这一氨酰一氨酰-tRNA的合成过程被称为氨基酸的活化的合成过程被称为氨基酸的活化1.1.氨酰氨酰- -tRNAtRNA的形成的形成 氨基酸的活化是指氨基酸与氨基酸的活

23、化是指氨基酸与tRNA相连相连，形成氨酰，形成氨酰-tRNA的过程。的过程。 氨基酸的活化在细胞质中进行。反应由氨基酸的活化在细胞质中进行。反应由氨酰氨酰-tRNA合成酶（又称氨基酸活化酶）合成酶（又称氨基酸活化酶）催化。催化。1.1.氨酰氨酰- -tRNAtRNA的形成的形成氨基酸羧基通过酸酐键与氨基酸羧基通过酸酐键与AMP上的上的5 -磷酸基相连磷酸基相连 氨酰氨酰- -tRNAtRNA合成酶：合成酶： 此酶具有较高专一性，能有效识别此酶具有较高专一性，能有效识别tRNAtRNA和和相应的氨基酸。相应的氨基酸。 此酶具有校对功能。此酶具有校对功能。1.1.活化一个氨基酸消耗活化一个氨基酸消

24、耗2 2分子分子ATPATP。1 1）识别识别mRNA的起始密码子为的起始密码子为AUG，而而AUG对应的氨基酸为对应的氨基酸为Met。2 2）有两种甲硫氨酸专一性的有两种甲硫氨酸专一性的tRNA： tRNAfmet只与起始密码子结合只与起始密码子结合 tRNAmmet只与肽链内部的只与肽链内部的AUG有关有关在原核生物中，多肽链起始的氨基酸均为甲在原核生物中，多肽链起始的氨基酸均为甲酰甲硫氨酸酰甲硫氨酸。 2. 2. 起始氨酰起始氨酰tRNAtRNA的形成的形成在真核生物中，多肽链起始的氨基酸均为甲在真核生物中，多肽链起始的氨基酸均为甲硫氨酸硫氨酸tRNAimet只与起始密码子结合只与起始密

25、码子结合 tRNAmet只与肽链内部的只与肽链内部的AUG有关有关 2. 2. 起始氨酰起始氨酰tRNAtRNA的形成的形成原核生物中的原核生物中的fMet-tRNAfMet-tRNA的合成的合成Met + ATP + tRNA Met tRNA + AMP + PPi甲硫氨甲硫氨( (蛋氨蛋氨) )酰酰tRNAtRNA合成酶合成酶原核生物中的原核生物中的fMet-tRNAfMet-tRNA的合成的合成 Met-tRNA Met-tRNA在转甲酰酶的作用下，在在转甲酰酶的作用下，在其其MetMet的的- -NHNH2 2上甲酰化。上甲酰化。fMet tRNA在翻译的起始阶段，还需有在翻译的起始

26、阶段，还需有3 3种蛋白质因子种蛋白质因子 起起始因子始因子( (IF)IF)的参与，即的参与，即IF1IF1、IF2IF2、IF3IF3。 此时核糖体的此时核糖体的P P位被起始氨酰位被起始氨酰- -tRNAtRNA占据，占据，A A位空着位空着，等待能与第二个密码子匹配的氨酰，等待能与第二个密码子匹配的氨酰- -tRNAtRNA进位。进位。 起始复合物的结构：起始复合物的结构： 二二、多肽链合成的过程、多肽链合成的过程1. 起始 指核糖体与指核糖体与mRNAmRNA及起始氨酰及起始氨酰- -tRNAtRNA结合成起始结合成起始复合物复合物(1) 核糖体的小亚基核糖体的小亚基30S与与mRN

27、A结合结合 小亚基识别小亚基识别mRNA上翻译的起始信号，上翻译的起始信号，并结合在这个部位，它的并结合在这个部位，它的P位正好落在起始位正好落在起始密码子密码子AUG处。形成处。形成“小亚基小亚基 - mRNA”二二元复合物。元复合物。1. 起始 起始氨酰起始氨酰-tRNA与与mRNA上的起始密码上的起始密码子结合（通过反密码子与密码子之间的碱基互子结合（通过反密码子与密码子之间的碱基互补配对），形成补配对），形成“小亚基小亚基 mRNA fMet-tRNA”三元复合物三元复合物(2) 起始氨酰起始氨酰-tRNA结合上去结合上去 形成起始复合物，即形成起始复合物，即“核糖体核糖体 mRNA

28、fMet-tRNA”三元复合物三元复合物(3) 大亚基结合上去形成大亚基结合上去形成70S起始复合物起始复合物1. 起始 这一阶段是在这一阶段是在fMet（或肽链）的或肽链）的C末端逐个的末端逐个的添加添加aa，使肽链不断延伸。使肽链不断延伸。每延伸一个每延伸一个aa，需要经历三步：需要经历三步： 1 1）进位）进位与与A位处的密码子相对应的位处的密码子相对应的aa-tRNA进入核糖体的进入核糖体的A位位2. 肽链的延长2. 肽链的延长2 2）转肽）转肽P位位tRNA上的甲酰甲硫上的甲酰甲硫氨基转移至氨基转移至A位位tRNA上上的的aa的氨基上，形成肽的氨基上，形成肽键。键。3 3）移位）移位

29、核糖体在核糖体在mRNA上向上向3端移动端移动一个密码子的距离，这样，原一个密码子的距离，这样，原P位空载的位空载的tRNA离开了核糖体离开了核糖体，原，原A位的肽酰位的肽酰- tRNA落在落在P位，而位，而A位空了出来。位空了出来。2. 肽链的延长 通过以上三步，完成了氨基酸的一轮添通过以上三步，完成了氨基酸的一轮添加。每延伸一个氨基酸，需要消耗加。每延伸一个氨基酸，需要消耗 2 分子分子GTPGDP。（。（进位和移位）进位和移位） 此过程还需要一些蛋白质因子的参与，此过程还需要一些蛋白质因子的参与，称为延长因子（称为延长因子（EF） 随着核糖体在随着核糖体在mRNA上从上从 53 方向方向

30、滑动，新生链从滑动，新生链从 N端端C端端 延伸。延伸。mRNA上上的核苷酸序列被的核苷酸序列被“翻译翻译”成多肽链上的氨基成多肽链上的氨基酸序列酸序列2. 肽链的延长三、肽链合成的终止与释放三、肽链合成的终止与释放 当核糖体在当核糖体在mRNA上由上由53移动至终止移动至终止密码子（密码子（UAA、UAG、UGA）时，由于没有与时，由于没有与之相应的之相应的tRNA，终止因子终止因子RF进入进入A位。位。 1 终止因子使肽基转移酶的活性转变为水解终止因子使肽基转移酶的活性转变为水解酶活性酶活性 (肽基不再转移到氨酰肽基不再转移到氨酰tRNA上，而是转上，而是转移给水分子移给水分子)，从而将肽

31、酰，从而将肽酰tRNA水解。这样肽水解。这样肽链被释放。链被释放。2 空载的空载的tRNA也离开核糖体。也离开核糖体。3核糖体的大小亚基解离并离开核糖体的大小亚基解离并离开mRNA。4四、多肽链合成的能量消耗四、多肽链合成的能量消耗蛋白质的生物合成是个高耗能过程。蛋白质的生物合成是个高耗能过程。仅翻译过程，其能量消耗情况如下：仅翻译过程，其能量消耗情况如下：NTP高能磷酸键高能磷酸键氨基酸的活化氨基酸的活化ATP2/aa2/aa肽链合成的起始肽链合成的起始GTP1 1肽链的延伸肽链的延伸GTP2/2/轮轮aaaa添加添加肽链合成的终止肽链合成的终止 0 0例：例：以游离的氨基酸为原料，起始合成

32、一个以游离的氨基酸为原料，起始合成一个100肽，至少需要消耗多少肽，至少需要消耗多少ATP？（注：注：ATPAMP折算成折算成2个个ATP，GTP折算成折算成ATP）解法一：解法一：分阶段累计分阶段累计 2100 1 299 399五、多肽链合成的能量消耗五、多肽链合成的能量消耗解法二：以解法二：以aa为单位累计为单位累计 每个游离的氨基酸参入到正在合成的多肽链每个游离的氨基酸参入到正在合成的多肽链中，至少需要消耗中，至少需要消耗 4 个高能磷酸键（活化个高能磷酸键（活化 2个；氨酰个；氨酰tRNA进入进入A位位 1个；核糖个；核糖体移位体移位 1个）。个）。 但起始的氨基酸要少消耗但起始的氨

33、基酸要少消耗1个个GTP（可理解可理解成它直接进入成它直接进入P位，不要移位）位，不要移位） 4n1 41001五、多肽链合成的能量消耗五、多肽链合成的能量消耗 六、多肽链合成的速度六、多肽链合成的速度 蛋白质的生物合成的速度极快。在最适蛋白质的生物合成的速度极快。在最适条件下，合成一条含条件下，合成一条含400个氨基酸残基的多个氨基酸残基的多肽链大约只要肽链大约只要10秒钟。秒钟。 多核糖体：在一条多核糖体：在一条mRNA链上，可以有链上，可以有多个核糖体同时进行翻译，每个核糖体上多个核糖体同时进行翻译，每个核糖体上都附着一条正在延长的多肽链，越靠近都附着一条正在延长的多肽链，越靠近mRNA

34、的的3端的核糖体上的肽链越长。这端的核糖体上的肽链越长。这种结构叫做多核糖体。种结构叫做多核糖体。 多核糖体：在一条多核糖体：在一条mRNA链上，可以链上，可以有多个核糖体同时进行翻译，每个核糖体有多个核糖体同时进行翻译，每个核糖体上都附着一条正在延长的多肽链，越靠近上都附着一条正在延长的多肽链，越靠近mRNA的的3端的核糖体上的肽链越长。这端的核糖体上的肽链越长。这种结构叫做多核糖体。种结构叫做多核糖体。 mRNA上核糖体的多少，视上核糖体的多少，视 mRNA 链长链长而定。一般每隔而定。一般每隔40个核苷酸有一个核糖体。个核苷酸有一个核糖体。多核糖体的结构可大大提高多核糖体的结构可大大提高

35、mRNA的翻译效率。的翻译效率。 六、多肽链合成的速度六、多肽链合成的速度 多肽链的折叠是指从多肽链氨基酸序列多肽链的折叠是指从多肽链氨基酸序列形成正确的三维结构的过程。形成正确的三维结构的过程。 蛋白质二硫键异构酶（蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase）和肽基脯氨酸异构酶（和肽基脯氨酸异构酶（peptidyl prolyl isomerase）参与蛋白质的折叠过程。参与蛋白质的折叠过程。 前者能加速蛋白质正确二硫键的形成。前者能加速蛋白质正确二硫键的形成。后者则加速脯氨酸亚氨基肽键的顺后者则加速脯氨酸亚氨基肽键的顺-反异反异构化。构化。 七、多肽链合成后

36、的加工七、多肽链合成后的加工1. 多肽链的折叠多肽链的折叠 Structure and function of the GroEL-GroES complexGroEL GroES GroEL 多肽链的修饰是指多肽链中氨基酸残多肽链的修饰是指多肽链中氨基酸残基被切除或在氨基酸残基中添加和改变一基被切除或在氨基酸残基中添加和改变一些基团些基团, ,从而使多肽链形成具有一定高级结从而使多肽链形成具有一定高级结构和生物活性的蛋白质分子的过程。构和生物活性的蛋白质分子的过程。 2. 多肽链的修饰多肽链的修饰 (1) 末端氨基的去甲酰化和末端氨基的去甲酰化和N-甲硫氨酸的切除甲硫氨酸的切除 原核细胞多肽

37、原核细胞多肽N-末端的甲酰甲硫氨酸的甲酰末端的甲酰甲硫氨酸的甲酰基可在去甲酰酶的催化下被除去。基可在去甲酰酶的催化下被除去。 在原核和真核细胞中多肽在原核和真核细胞中多肽N-末端的甲硫氨末端的甲硫氨酸均可被氨肽酶除去。酸均可被氨肽酶除去。 原核细胞究竟采取去甲酰基还是去甲酰甲硫原核细胞究竟采取去甲酰基还是去甲酰甲硫氨酸，常决定于邻近氨基酸。如果第二个氨基酸氨酸，常决定于邻近氨基酸。如果第二个氨基酸是是Arg，Asn，Asp，Glu，Ile或或Lys，则以前者则以前者为主，如果第二个氨基酸是为主，如果第二个氨基酸是Ala，Gly，Pro，Thr或或Val，则以后者为主。则以后者为主。 (2) 一

38、些氨基酸残基侧链被修饰一些氨基酸残基侧链被修饰 有些氨基酸没有相应的遗传密码，而是在有些氨基酸没有相应的遗传密码，而是在肽链从核糖体释放后经化学修饰形成的。如胶肽链从核糖体释放后经化学修饰形成的。如胶原蛋白中含有大量的羟脯氨酸和羟赖氨酸，分原蛋白中含有大量的羟脯氨酸和羟赖氨酸，分别是脯氨酸和赖氨酸经羟化而成的。有些蛋白别是脯氨酸和赖氨酸经羟化而成的。有些蛋白质中的天冬酰胺、丝氨酸和苏氨酸发生糖基化质中的天冬酰胺、丝氨酸和苏氨酸发生糖基化形成糖蛋白，丝氨酸磷酸化成为磷酸丝氨酸。形成糖蛋白，丝氨酸磷酸化成为磷酸丝氨酸。 (3) 二硫键的形成二硫键的形成 多肽链的半胱氨酸残基可在蛋白质二硫键多肽链的

39、半胱氨酸残基可在蛋白质二硫键异构酶的作用下形成二硫键，肽链内或肽链间异构酶的作用下形成二硫键，肽链内或肽链间都可形成二硫键，二硫键在维持蛋白质的空间都可形成二硫键，二硫键在维持蛋白质的空间构象中起了很重要的作用。构象中起了很重要的作用。 (4) 多肽链的水解断裂多肽链的水解断裂 许多具有一定功能的蛋白质如酶、激素蛋许多具有一定功能的蛋白质如酶、激素蛋白，在体内常以无活性的前体肽的形式产生，白，在体内常以无活性的前体肽的形式产生，这些前体在一定情况下经体内蛋白酶的水解切这些前体在一定情况下经体内蛋白酶的水解切去部分肽段，才能变成有活性的蛋白质，如胰去部分肽段，才能变成有活性的蛋白质，如胰岛素原变

40、成胰岛素，胰蛋白酶原变为胰蛋白酶岛素原变成胰岛素，胰蛋白酶原变为胰蛋白酶等。等。 无论是原核还是真核细胞都是一个高度有序无论是原核还是真核细胞都是一个高度有序的结构，新生的蛋白质要被准确地运送到细胞的的结构，新生的蛋白质要被准确地运送到细胞的各个部分，如溶酶体、线粒体、叶绿体、细胞质各个部分，如溶酶体、线粒体、叶绿体、细胞质和细胞核等，以更新其结构组成和维持其功能和细胞核等，以更新其结构组成和维持其功能, , 这一过程称为蛋白质的定位。这一过程称为蛋白质的定位。 八、蛋白质的定位八、蛋白质的定位 多肽的转运有两种类型即共翻译转移（多肽的转运有两种类型即共翻译转移（co-translationa

41、l translocation）和翻译后转移（和翻译后转移（post-translational translocation）。）。 蛋白质的定位蛋白质的定位(Protein translocation)主主要由要由共翻译转移为特征，首先在游离核糖体上共翻译转移为特征，首先在游离核糖体上合成一段称为信号肽（合成一段称为信号肽（signal peptide）的肽的肽段，该信号肽指令核糖体结合到粗面内质网膜段，该信号肽指令核糖体结合到粗面内质网膜上，然后肽链边合成边进入内质网腔，经初步上，然后肽链边合成边进入内质网腔，经初步加工和修饰后，部分多肽以囊泡形式被运往高加工和修饰后，部分多肽以囊泡形式被

42、运往高尔基体，再经进一步的加工和修饰后被运往质尔基体，再经进一步的加工和修饰后被运往质膜、溶酶体或被分泌到胞外。膜、溶酶体或被分泌到胞外。 1. 共翻译转移共翻译转移 信号肽通常在被转运的多肽链的信号肽通常在被转运的多肽链的N端，长度为端，长度为10 40个氨基酸残基不等，氨基端至少含有一个氨基酸残基不等，氨基端至少含有一个带正电荷的氨基酸个带正电荷的氨基酸; 序列中心为含有序列中心为含有10 15高度疏水的氨基酸残基高度疏水的氨基酸残基，如丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和苯，如丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。丙氨酸。 在信号肽的在信号肽的C末端有一个可被信号肽酶识别的位末端有一

43、个可被信号肽酶识别的位点，当蛋白质运送到目的地后，信号肽即被信点，当蛋白质运送到目的地后，信号肽即被信号肽酶切去。号肽酶切去。八、蛋白质的定位八、蛋白质的定位1. 共翻译转移共翻译转移 d. 在信号肽酶识别位点上游常有一疏水性较在信号肽酶识别位点上游常有一疏水性较强的强的5肽，信号肽酶切点上游的第一个肽，信号肽酶切点上游的第一个( 1)及第及第3个个( 3)氨基酸常为具有一个小侧链的氨基酸常为具有一个小侧链的氨基酸（如丙氨酸）氨基酸（如丙氨酸） 1. 共翻译转移共翻译转移 人生长激素人胰岛素原牛血清蛋白原小鼠抗体链鸡溶菌酶蜂毒蛋白果蝇胶蛋白玉米蛋白酵母转化酶人流感病毒 M A T G S R

44、T SQ E G S AF P T M A L W M R L L P G P D P A A AF V N M K W V T F I S S S A Y SR G V H M K V L S T A I P H I M SD V Q M K S P K GK V F M K F L V N S Y IY AA P E M K D P A S GC K D19 M A A K S A S A A T AS I F OG K S S M TA K K GD Q I L L L A F G L L C L P W L L L A L L A L W L L L F L L Y L L L L I

45、 L V L C F LL A A LV A L V F M V V Y IL L V V A V I A C M L I G F A I F C L I M L L G LM L L A F L F L L A F A A IAMA L L V L L Y A F V A切点一些真核细胞的信号肽的结构一些真核细胞的信号肽的结构 信号肽是如何被识别的信号肽是如何被识别的?含有这种顺序的蛋白质又是含有这种顺序的蛋白质又是怎样被运过粗面内质网膜的怎样被运过粗面内质网膜的? 1. 共翻译转移共翻译转移 Blobel等已证明，有一种被称为信号识别颗粒（等已证明，有一种被称为信号识别颗粒（signal

46、recognition particle SPR）的核糖核蛋的核糖核蛋白与合成分泌蛋白的核糖体结合到粗面内质网膜白与合成分泌蛋白的核糖体结合到粗面内质网膜上密切相关。上密切相关。 SPR的相对分子质量为的相对分子质量为325 kD，是由一种是由一种300个核苷酸的个核苷酸的RNA分子分子(名为名为7SL RNA)和和6个不同的多肽链组成的。个不同的多肽链组成的。SPR存在于细存在于细胞质中，其上有两个关键部位，即胞质中，其上有两个关键部位，即信号肽识别部信号肽识别部位位和和翻译暂停功能域翻译暂停功能域。 信号肽的识别及多肽进入内质网的过程信号肽的识别及多肽进入内质网的过程 1. 共翻译转移共翻译转移 信号肽的识别及多肽进入内质网的过程信号肽的识别及多肽进入内质网的过程 虽然线粒体和叶绿体均具有各自的基因虽然线粒体和叶绿体均具有各自的基因组，但只编码其自身的一小部分蛋白质。大组，但只编码其自身的一小部分蛋白质。大部分线粒体和叶绿体的蛋白质是由细胞核基部分线粒体和叶绿体的蛋白质是由细胞核基因组编码的，并在细胞质游离核糖体上被完因组编码的，并在细胞质游离核糖体上被完整合成后，通过新生肽的信号序列直接运往整合成后，通过新生肽的信号序列直接运往目的地目的地( (线粒体和叶绿体线粒体和叶绿体) )，这种转运方式属，这种转运方式属于翻译后转移。于翻译后转移。 2. 翻译后转移翻译后转移