最新叶绿体色素的提取及理化性质的定稿2精品课件.ppt

《最新叶绿体色素的提取及理化性质的定稿2精品课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新叶绿体色素的提取及理化性质的定稿2精品课件.ppt（26页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热怎么这么热”，于是三，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑五成群，聚在大树下，或站着

2、，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑强子，别跑了，快来我给你扇扇了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边训，“你你看热的，跑什么？看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国

3、已有三千年多年的历史。取材的味道！蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的扇。蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过

4、了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅道，袅一、实验目的及要求一、实验目的及要求n 掌握提取和分离叶绿体中色素的方法掌握提取和分离叶绿体中色素的方法n了解叶绿素的物理和化学性质了解叶绿素的物理和化学性质n皂化反应皂化反应Chla、Chlb 是双羧酸的酯 一个羧基被甲基酯化 可发生皂化反应 另一个羧基被叶醇基酯化 COOCH3 C32H30ON4Mg + 2KOH COOC20H39 COOK C32H30ON4Mg + CH3OH+C20H39OH COOK n取代反应取代反应 卟啉环中

5、的Mg2+可被H+、Cu2+、Zn2+取代，被Cu2+、Zn2+取代后仍保持绿色。用酸处理叶片，H+易进入叶绿体，置换镁原子形成去镁叶绿素，使叶片呈褐色。去镁叶绿素易再与铜离子结合，形成铜代叶绿素，颜色比原来更稳定。 人们常根据这一原理用醋酸铜处理来保存绿色植物标本。n类胡萝卜素类胡萝卜素(Carotenoids)是一类不饱和的四萜类碳氢化合物，胡萝卜素有三种异构体，即-、和 胡萝卜素，其中 胡萝卜素含量最多，也最为重要。 胡萝卜素还具有维生素A的生理活性，其结构是由两分子维生素A在端链失去两分子水结合而成。在生物体内，胡萝卜素受酶催化氧化即形成维生素A。n叶黄素叶黄素(3，3-二羟基-胡萝卜

6、素，lutein，C40H56O2)是一种常见的氧化型的类胡萝卜素。n胡萝卜素和叶黄素的结构式如图6-2CH3H3CRCH3CH3CH3CH3CH3RH3CCH3H3C-胡萝卜素（R=H）叶黄素（R=OH）CH2OH维生素An类胡萝卜素吸收光谱吸收光谱都在蓝紫光部分，所吸收的光能传递给叶绿素用于光合作用，保护叶绿素分子不被氧化或阳光破坏。n叶绿素a和b、胡萝卜素、叶黄素都是难溶于水，易溶于丙酮、乙醇、乙醚、石油醚等有机溶剂溶剂。根据它们在有机溶剂中的溶解特性，可将它们从植物叶片中提取出来。n纸色谱法纸色谱法是分离叶绿体色素最简单的方法，它是以滤纸为惰性支持物，滤纸纤维一般能吸收约20 % 的水

7、分，其中有67 % 以氢键形式与纤维素上的羟基结合，构成纸色谱的固定相。利用混合色素中各个成分物理、化学性质的差别，在展开过程中，被分离组分在展开剂和固定相之间不断进行分配，并以不同的速度移动，达到相互分离的目的。四、实验器材四、实验器材n材料与试剂材料与试剂： 菠菜、空心菜等绿色植物、脱脂棉等、固体碳酸钠或碳酸钙、石英砂、丙酮、石油醚、蒸馏水、饱和NaCl水溶液、醋酸铜结晶、NaOH-甲醇溶液等。n层析液配方：层析液配方： 石油醚20ml+丙酮2ml+苯1mln仪器设备：仪器设备： 天平、水浴锅、镊子、玻璃漏斗、分液漏斗、研钵、有塞试管、等等。五、实验方法与步骤五、实验方法与步骤n 1 1、

8、叶绿体色素的提取、叶绿体色素的提取 （1）将新鲜绿色植物叶片洗净擦干，去叶柄及中脉，将新鲜绿色植物叶片洗净擦干，去叶柄及中脉，称取称取 10g 去中脉的叶片，剪碎置研钵内，加入去中脉的叶片，剪碎置研钵内，加入少许固体碳酸钠和少许固体碳酸钠和10ml乙醇，加少量的石英砂，乙醇，加少量的石英砂，迅速研磨成匀浆，再加迅速研磨成匀浆，再加 10ml乙醇充分研磨提取乙醇充分研磨提取叶绿素。叶绿素。 （2）在玻璃漏斗底部垫一滤纸，将匀浆过滤到烧杯在玻璃漏斗底部垫一滤纸，将匀浆过滤到烧杯中，即为色素提取液。放于暗处备用。中，即为色素提取液。放于暗处备用。n 2 2、纸色谱法分离叶绿体色素、纸色谱法分离叶绿体

9、色素(1) 取一张层析滤纸，在中心打一个圆形小孔另取一张取一张层析滤纸，在中心打一个圆形小孔另取一张5-6cm长，长，2-3cm宽的小条滤纸，将叶绿体色素粗提液用滴管沿宽的小条滤纸，将叶绿体色素粗提液用滴管沿长度方向滴在小滤纸条的一边（色素扩散的宽度限制在长度方向滴在小滤纸条的一边（色素扩散的宽度限制在0.5cm以内），风干，重复以内），风干，重复4-5次。次。 风干后沿长度方向卷风干后沿长度方向卷成纸捻。成纸捻。(2) 将纸捻的点样端插入滤纸中心的圆形小孔中，使上端与滤将纸捻的点样端插入滤纸中心的圆形小孔中，使上端与滤纸平齐。立放于培养皿上纸平齐。立放于培养皿上, 培养皿内装有层析液培养皿内

10、装有层析液 ,纸芯的另纸芯的另一端浸入层析液中。一端浸入层析液中。(3) 盖上皿盖盖上皿盖, 静置观察。静置观察。15min左右色素可充分扩展左右色素可充分扩展, 分离结分离结束，在滤纸上可得到各种色素的同心圆环。束，在滤纸上可得到各种色素的同心圆环。 六、叶绿素理化性质的观察六、叶绿素理化性质的观察(1)(1) 光对叶绿素的破坏作用光对叶绿素的破坏作用 在在 2支具塞试管中各放入支具塞试管中各放入2ml上述色素提取液，盖好塞子。上述色素提取液，盖好塞子。一支试管置暗处，一支试管置强光（如太阳光）下，经一支试管置暗处，一支试管置强光（如太阳光）下，经23h后，取出后，取出2支试管观察溶液颜色有

11、无变化，或在分光光支试管观察溶液颜色有无变化，或在分光光度计上测定度计上测定663nm处吸光度值后进行比较。处吸光度值后进行比较。(2) (2) 叶绿素的荧光叶绿素的荧光 取取 2ml上述色素提取液放入一支小试管中，可在窗口与上述色素提取液放入一支小试管中，可在窗口与入射光相垂直的方向观察叶绿素暗红色的荧光入射光相垂直的方向观察叶绿素暗红色的荧光(3) (3) 去镁叶绿素的形成及铜取代作用去镁叶绿素的形成及铜取代作用 取取 12ml上述提取液放入试管中，小心加入上述提取液放入试管中，小心加入 3ml 6mol/L HCl，摇动后静止观察溶液颜色变化？然后向再逐步加入醋，摇动后静止观察溶液颜色变

12、化？然后向再逐步加入醋酸铜结晶少许，把试管在酒精灯下微微加热，观察溶液的颜酸铜结晶少许，把试管在酒精灯下微微加热，观察溶液的颜色有何变化？色有何变化？（4 4）黄色素和绿色素的分离：）黄色素和绿色素的分离： 取取5ml色素乙醇提取液加到已装有色素乙醇提取液加到已装有 10ml石油醚的分液石油醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿分液漏斗的壁小心加入漏斗中，摇动分液漏斗，并沿分液漏斗的壁小心加入 15ml蒸馏水，轻轻转动分液漏斗，加入蒸馏水，轻轻转动分液漏斗，加入48ml饱和饱和NaCl水溶液，水溶液，静止几分钟，待分层清楚后，弃去下面的乙醇一水层。再静止几分钟，待分层清楚后，弃去下面的乙醇一水层。

13、再加入加入 15ml蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的乙醇，弃去水层。然后于色素的石油醚溶液中加入留的乙醇，弃去水层。然后于色素的石油醚溶液中加入5ml30NaOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静止甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静止10min，再加蒸馏水再加蒸馏水8ml，摇动后静置分离，则得到黄色素和绿色色，摇动后静置分离，则得到黄色素和绿色色素层，分别保存于试管中。素层，分别保存于试管中。七、注意事项七、注意事项1、叶绿体色素对光、温度、氧气环境、酸碱及其它氧化剂都非常敏感。色素的提取和分析一般都要在避光、低温及无酸碱等干扰的情况下进行。2、

14、使用低沸点易挥发有机溶剂要注意实验室安全。实验室要保持良好的通风条件，不得靠近明火操作。 3、提取液不宜长期存放，必要时应避光低温保存。八、八、 讨论讨论n研磨叶片提取叶绿体色素时，加入少量碳酸钠有何作用？加多了会出现什么问题？n叶绿素溶液为什么会发荧光？n黄色素和绿色素分离的原理？实验结果部分实验结果部分1、纸色谱分离色素：要求用铅笔绘制出色素经纸色谱分离后的图形，并用注明各色素环的颜色和名称。2、叶绿素理化性质鉴定：要求写出各个项目的实验现象和并分析其中的原因。见下表叶绿素理化性质鉴定结果 实验项目实验现象原 因光对叶绿素的破坏作用叶绿素的荧光观察黄色素与绿色素的分离去镁叶绿素的形成及铜的取代反应实验报告格式实验报告格式一、实验名称一、实验名称 二、实验目的二、实验目的三、实验原理三、实验原理四、主要仪器设备及耗材四、主要仪器设备及耗材五、实验步骤与方法五、实验步骤与方法六、实验结果六、实验结果七、思考与练习七、思考与练习