DNA的粗提取与鉴定课件.ppt
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1、材料:鱼卵、猪肝、菜花(花椰菜)、香蕉、鸡血、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌原则上,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是,选用DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大 鸡是真核生物,真核生物的DNA都在染色体上。 鸟类的血细胞核大,DNA多 不需要破除细胞壁 问题:鸡血细胞液在取材之后,到实验前,是否需要特殊处理吗? 柠檬酸钠抗凝问题:鸡血细胞虽然没有细胞壁,但是依然有细胞膜,以你所学的知识,有什么比较简便但是可行的方法可以破碎细胞膜?讨论:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?对于动物细胞我们可以利用细胞的渗透压来破碎细胞,但是很多情况下,人们不得不面对植物材料
2、,那么我们是不是还可以通过加入一定量的蒸馏水来涨破细胞呢? 洗涤剂的作用: 洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团,可以与细胞膜中的蛋白质结合,使之溶解,进而瓦解细胞膜。 食盐的作用: 食盐中主要含有NaCl,有利于DNA的溶解。 过滤:用34层纱布对DNA稀释液进行过滤,滤过蛋白质,收集DNA的粘稠物。 问题:这时的滤液可能含有哪些细胞成分? 主要有DNA、RNA、核蛋白、多糖核蛋白、多糖等 我们应该如何将DNA单独分离出来?DNA溶解在浓度较高的溶解在浓度较高的NaCl溶液溶液中溶液溶液中在在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 0.14 mol/Lmol/L时,时,DNADNA的溶解
3、度随的溶解度随NaClNaCl溶液浓度的增加而逐渐溶液浓度的增加而逐渐降低;在降低;在0.14 mol/L0.14 mol/L时,时,DNADNA溶解度最小;当溶解度最小;当NaClNaCl溶溶液浓度继续增加时,液浓度继续增加时,DNADNA的的溶解度又逐渐增大。溶解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol2 molL L时,时,DNADNA的溶解度的溶解度最大,浓度为最大,浓度为 0 014 mol14 molL L时,时,DNADNA的溶解度最低。利的溶解度最低。利用这一原理,可以使用这一原理,可以使DNADNA在在盐溶液中溶解或析出盐溶液中溶解或析出 用
4、高浓度的盐溶液溶解用高浓度的盐溶液溶解DNA,能,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使低盐浓度使DNA析出,能除去溶析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质解在低盐溶液中的杂质。 缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量,使NaCl溶液的终浓度为0.10.2mol/L,直到溶液中丝状物不再增加时为止。 方案二:直接在滤液中加入嫩肉粉,反应10-15min 嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶 蛋白酶能分解杂质蛋白,但对蛋白酶能分解杂质蛋白,但对DNA没有影响,没有影响,从而使提取的DNA与蛋白质分开 方案三:
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