2022年植物叶绿素含量测定.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 植物叶绿素含量测定 -无水乙醇提取法摘要：本文是主要是用无水乙醇提取法提取叶绿素以及用比色法测定叶绿素的含量试验的综述；关键词：叶绿素的提取、含量测定、无水乙醇、比色法前言：高等植物光合作用过程中利用的光能是通过叶绿体色素 光合色素 吸取的；叶绿体色素由叶绿素a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素组成；叶绿体色素的提取、 别离和测定是讨论它们的特性以及在光合 中作用的第一步； 叶片叶绿素含量与光合作用亲密相关,是反眏叶片 生理状态的重要指标； 在植物光合生理、 发育生理和抗性生理讨论中 常常需要测定叶绿素含量； 叶绿素含量也是指导作物栽培生产和选育

2、作物品种的重要指标；正文：一、原理 叶绿素不溶于水,溶于有机溶剂,可用多种有机溶剂,如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取；叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长的光有最大吸取, 用分光光度计测定在该波长下叶绿素 溶液的吸光度 也称为光密度 ,再依据叶绿素在该波长下的吸取系数 即可运算叶绿素含量；利用分光光计测定叶绿素含量的依据是Lambert-Beer 定律,即当一束单色光通过溶液时, 溶液的吸光度与溶液的浓度和液层厚度的名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 4 页精选学习资料 - - - - - - - - - 乘积成正比；其数学表达式为：A=K*b*c式中： A 为吸

3、光度； K 为吸光系数； b 为溶液的厚度； c 为溶液浓度；叶绿素 a、b 的丙酮溶液在可见光范畴内的最大吸取峰分别位于663、645nm处；叶绿素 a和 b 在 663nm处的吸光系数当溶液厚度为 1cm,叶绿素浓度为 g.L-1时的吸光度分别为82.04 和 9.27 ；在 645nm处的吸光系数分别为16.75 和 45.60 ；依据 Lambert-Beer定律, 叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度A663和 A645与溶液中叶绿素 a、b 和总浓度a+bCa、Cb 、Ca 十 b,单位为 g.L-1 ,的关系可分别用以下方程式表示：A663=82.04Ca+9.27Cb

4、1A645=16.76Ca+45.60Cb 2解方程 1和 2得：Ca=12.7 A6632.59 A645 3 Cb=22.9 A6454.67 A663 4 Ca十 b20.3 A645 8.04 A663 5 二、试验的材料、仪器、药品1材料：植物绿色叶片；2仪器：分光光度计、比色皿、天平、研钵、滤纸、漏斗、滴管、剪刀、 50ml 容量瓶；三、试验步骤 1叶绿素的提取：用洗衣粉先将叶片外表的油迹和灰尘清洗洁净,晾干后,用电子天平精确称取紫背草叶子,剪碎后放入研钵中；名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 4 页精选学习资料 - - - - - - - - - 向研钵中加入

5、 23ml 95%乙醇,再少许 CaCO3和石英砂,研磨成匀浆,再加入 10ml 无水乙醇,连续研磨至组织变白,在暗处静止 35min；取 1 张滤纸于漏斗中, 用无水乙醇潮湿, 将研磨液沿玻璃板导入漏斗中过滤,用无水乙醇冲洗研钵、研棒以及滤渣数次,滤液移至 50mL容量瓶,最终用无水乙醇定容至50mL,即为提取液；2吸光度的测定： 取洁净比色皿, 留意不要用手接触比色皿的光面,先用少量色素提取液清洗23 次,留意清洗时要使清洗液接触比色皿内壁的全部部分, 然后将色素提取液倒入比色皿中,液面高度约为比色皿高度的 4/5 ,将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉 留意不能擦,再用擦镜纸擦干擦净； 将比

6、色皿放入仪器的比色皿架上,留意不要将溶液撒入仪器内； 第一个位置放盛有无水乙醇的比色皿,做为空白对照；将仪器波长分别调至663、645nm处,以无水乙醇做为空白对比调透光率 100%,分别测定溶液在上述三个波长下的吸光度；每个样 品重复测定 3 次；留意,每次在转换波长时,都要用无水乙醇调透光 率 100%；四、结果运算1结果运算：将 663、645nm处测得的吸光度代入上述原理中的公式3、4、5中运算叶绿素 a、b 浓度和总浓度；并将试验结果记录如下：名师归纳总结 九里香稀释前A645 吸A663 吸叶绿素 a 叶绿素 b 叶 绿 素 总第 3 页,共 4 页光值光值含量- - - - -

7、- -精选学习资料 - - - - - - - - - 稀 释 5倍后紫背叶五、结果分析与试验总结1. 叶绿素提取液所使用的样品总质量不同,所称取的九里香的样品质量为 1g 导致测得其吸光度大于 1,用该组数据运算会导致试验最终 结果误差较大,故现将该种九里香的叶绿素提取液先稀释五倍,再测定,得到了正常的吸光度数值；2. 叶绿素不溶于水,溶于有机溶剂,可用多种有机溶剂如乙醇、丙酮 或二甲基亚砜等研磨提取或者浸泡提群法提取叶绿素；本试验使用的分析纯是乙醇,相对于丙酮乙醇混合液来说,其成效相对较低；3. 对叶绿素含量测定的影响因素可能有：取样的时间地点、 选取的材料、选取的部位、研磨时是否有放入石英砂防止叶绿素被破坏、研磨 是否充分、制取提取液期间是否有避光处理等等；参考文献：上网查阅资料名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 4 页