2022年现代生物技术导论复习总结 .pdf

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1、学习好资料欢迎下载生物技术： 是以生命科学为基础，应用自然科学与工程学原理，设计构建新型物种体系，以提供产品和为社会服务的综合性社会体系。基因工程 ：按照人类的愿望对携带遗传信息的分子进行设计和改造的分子工程，包括基因重组，克隆和表达。候选基因策略： 为确定某种遗传疾病确实是由于基因的缺陷造成的，研究人员要对患者的相应基因进行分析， 若患者体内确实存在缺陷，那么肯定该病确实是由于这一基因的突变造成的，此称为候选基因策略。药物敏感基因： 某些病毒中含有将无害的药物前提体转化为有毒物质的酶，这些没有自身编码，人们称之为自杀基因或药物敏感基因。SD序列 ：一般说在紧靠起始密码子的上游有一段长约6-8

2、 个核酸的序列，是核糖体与MRNA的结合部位称为SD序列。结构域互换 ：为研究基因的调控及基因结构与蛋白质功能间的关系，人们常把相关基因的相类似，具功能的区域互换，然后检查互换后的蛋白质功能。表达图谱： 是只可表达的基因在染色体或基因DNA片段上精确定位， 并且确定各个表达基因之间的距离的一种物理图谱。生物农药： 生物体产生的具有防病，防虫，防杂草虫等功能的一大类物质的总称。限制性片段多态性： 由于限制性内切酶酶切位点的突变而造成的限制性内切酶酶解后产生的DNA片段长度的不同称为。生殖细胞疗法：以生殖细胞为对象的基因治疗方法。简答题1. 质粒作为基因工程的载体应具备哪些条件？（1）具有复制起始

3、点（2）具有抗生素抗性基因（3）具有若干酶单一识别位点（4）具有较小的分子量和较高的分子数2理想生物反应器应具备什么基本条件？（1）制造生物反应器的所采用的材料对细胞必须无毒（2）反应器必须具备良好的传热，传质和混合的功能。 （3）密封性要好，可避免外界微生物污染。（4）对培养环境中多种物理化学参数能自动检测和控制调节，控制精度要高，而且保持环境质量均一。（5）可长期连续运转。 （6）容器内部光滑， 无死角奥， 能耐高压蒸汽消毒，便于操作维修。（8）设备成本低 （9）适合工艺要求，易获最大的生产效率。（10）反应器必须携带各种监控系统。3防治植物病害的微生物的主要作用机理有哪几种？（1）拮抗作

4、用，对病原微生物产生拮抗作用的微生物能像环境中释放一些化学物质，抑制其他微生物的生长。 （2）寄生作用。 有些微生物可寄生在植物病原菌体内，从而干扰和抑制病微生物的正常生活。 （3）竞争作用， 两种微生物之间通过争夺营养物质和生从空间而相互抑制的现象。（4）共生微生物的保护作用，许多植物的共生真菌可形成外生菌根，保护与其共生的植物。4如何构建调查文库，包含几步、（1）用酶切位点极不常见的限制性内切酶酶解纯化人类基因组。（2）分离约200bp 左右的片段。 （3）把这些片段连接到带有大肠杆菌基因supF tRNA的小片段DNA上，然后环化。（4）用 EcoRI 处理上述样品，然后将其克隆到噬菌体

5、载体中，该载体只能容纳约20kb 大小的外援 DNA. 5目前生物技术在医药领域的应用主要包含几个方面，具有哪些优越性？包括： （1）生产基因工程药物（2）生产发酵工程药物（3）生产核酸类药物（4）利用生物体系加工天然药物（5）从海洋生物中提取药物优越性：（1）药物的针对性强，疗效好，副作用小（2）能够将自然界含量极低有效生物活名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 4 页 - - - - - - - - - 学习好资料欢迎下载性物质利用生物体系进行大规模生产。（

6、3）可以对蛋白质药物进行改造，提高疗效，降低毒性，提高稳定性。 （4/ ）开发出新品种的药物治疗过去无法治疗的疾病。（5）可以建立起高效，快速，准确，简便的分子诊断，促进疑难病的早期诊断和治疗。6腺病毒载体是目前常用的基因治疗载体之一，期作为基因治疗载体具有那些优点即不足？优点： （1）腺病毒比较安全（2）腺病毒的宿主范围较广（3）可以在呼吸道和肠道中复制繁殖，所以可以通过静脉注射，口福，喷雾等方法进行基因治疗。（ 4）腺病毒载体中插入的外源基因可大7.5kb 。 （5）腺病毒容易制备，纯化，浓缩，能够满足基因治疗和临床需要。（6）腺病毒的基因结构与功能及生活史目前了解的比较清楚，用他作为载体

7、进行基因治疗比较容易。不足： 1，重组的病毒DNA是以游离的附加体形式存在于细胞中，不能整合到细胞的染色体中，因而基因表达的时间短，不能满足基因承诺过期表达的需要（2）重组腺病毒载体反复使用时，可能诱发集体的免疫反应，从而影响外源基因的表达，进而影响治疗效果。7简述改进型双引物诱变的过程？1将目的基因克隆到M13噬菌体中，提取M13单链 DNA作为 PCR模板。 2。设计两个引物。这两个引物分别与M13同一条单链的不同DNA片段互补，引物1 与目的基因的一部分互补，但含有一个核苷酸的突变，引物2 中含有一个酶切位点，而且有一个核苷酸被诱变，3。对引物 1 的 5端进行磷酸化，然后再DNA 聚合

8、酶的作用下进行引物延伸反应，引物2 的新生链的 3端与引物1 的磷酸化后的5端相遇，两端DNA在 T4DNA 连接酶的作用下连接，这样引物 1 不会被新生链所替代。 4. 用来被引物2 诱变时的限制性内切酶微点所对应的内切酶酶解 PCR产物，然后用该酶解产物转化修复缺陷型的大肠杆菌。由于不含有引物2 诱变的DNA都被切割成线性，不能再大肠杆菌中稳定存在，所以得到的转化子都是同时含有1,2 两个突变位点，通常引物2 选择在抗性基因中。8DNA重组技术的步骤有哪些？典型的 DNA重组技术包括以下几个步骤：（1）分离提取供体生物的目的基因，酶连接到另外一个DNA分子上，形成一个重组DNA分子；（2）

9、将这个重组DNA分子导入受体细胞中复制保存，这个过程即为转化；（3）对已经能够吸收重组DNA分子的手提细胞进行筛选和鉴定；（4）将含有重组DNA分子的细胞进行大量培养，并检测外源基因是否表达。9发酵工艺的一般流程是什么，简述之？答：典型的发酵过程和产物纯化是一个连续的过程，可以划分六个基本步骤，（1）种子和发酵生产所需的培养基的制备；（2）培养基和发酵罐以及附属设备的灭菌（3）在种子发酵罐中进行种子培养（4）微生物在最适于产物生产条件下在发酵罐中生长代谢与产物合成（5）产物提取和精制（6）排出的废弃物的处理名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - -

10、 - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 4 页 - - - - - - - - - 学习好资料欢迎下载10核酶具有哪些催化功能？答： （1）催化 RNA裂解（2）催化 RNA分子间的转核苷酰反应（3）催化 RNA的水解反应（4）催化 RNA的连接反应（5）催化淀粉的分歧反应（6）具有肽转移酶活性（7）催化氨基酸与tRNA 之间的酯键的水解反应11. 简述结瘤基因克隆的具体步骤？答：克隆结瘤基因的常用方法是遗传互补法，即用野生性的苜蓿根瘤菌转化不能结瘤的苜蓿突变体，然后筛选出可形成根瘤菌的重组根瘤菌，具体操作如下：（1）用 EcoRI 部分酶解，可产生

11、根瘤菌的苜蓿RNA ，然后插入广宿主范围的黏粒载体pLAFR1的单一 EcoRI 位点上，建立野生型苜蓿根瘤菌基因组文库。（2）基因文库包装列入噬菌体后引入大肠杆菌，然后再基因接合作用转入苜蓿根瘤菌阴性突变体中。 载体上的抗四环素基因可以作为在大肠杆菌苜蓿根瘤菌中的筛选标记。（3）接合作用完成后，对200 到 300 个转化后的苜蓿根瘤菌细胞进行培养，并检测他们在苜蓿根上形成根瘤的能力。（4）从能够形成根瘤的苜蓿植株的根瘤菌中分离出苜蓿根瘤菌基因，找到载体上所带的插入片段，对其进行亚克隆，继续进行分析。（5）分离出根瘤菌基因用它做探针在基因组文库中筛选与其相邻部位的DNA片段，已获得更多的相关

12、基因。12. 人类基因组的研究包括哪些方面？（1）对人的基因组进行分组（2）对人的基因进行标记，即为每条染色体或者更小的区域都找到一些特定的DNA序列作为标记（3）利用已知的标记序列，将克隆的基因组DNA进行排序（4）克隆并测定人的基因组的全部序列（5）具体研究每一个基因的结构；功能；表达和调控等性质13利用核酶治疗的优越性有哪些？答： （1）由于核酶的本质是RNA ，RNA引起有害的免疫排斥反应的可能性更小，从而有效地解决了引入外源蛋白可能造成的免疫排斥反应（2）核酶分子都较小，易于插入表达载体中在基因治疗过程中便于操作。14. 简述用 M13DNA 进行的寡核苷酸介导诱变的过程？答：寡核苷

13、酸介导的诱变又称为定点诱变（1）常用的方法是将基因插入双链形式的M13噬菌体中，分离出单联形式重组载体，与一段合成的寡核苷酸混合，这一寡核苷酸链可以与克隆基因的一段序列互补，但只有要改变的那个核苷酸不同，而且要改变的那个核苷酸由位于寡核苷酸中部，在低温高盐条件下混合，就可以行成配对（2）以寡核苷酸为引物， 以 M13链为模板通过Klenow 片段的作用合成DNA ， 再利用 T4DNA链接酶，使新合成的DNA形成完整的双链，再利用蔗糖梯度离心的方法出去不完整的双链 DNA 名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心

14、整理 - - - - - - - 第 3 页，共 4 页 - - - - - - - - - 学习好资料欢迎下载（3）用含有错配完整的双链M13分子转化大肠杆菌，噬菌体在大肠杆菌中扩增产生噬菌体颗粒，然后噬菌体裂解细胞，形成噬菌斑，然后最初诱变的寡核苷酸引物作为探针通过杂交就可以鉴定出突变体（4）分离出双链M13DNA 后，可将突变的DNA切除， 连接到大肠杆菌表达载体上，就可以在大肠杆菌中表达该变了的蛋白，分离纯化后即可检验突变的效果。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 4 页 - - - - - - - - -