DNA琼脂糖凝胶电泳分析.ppt

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1、 实验原理实验原理琼脂糖为链状多糖 绳状琼脂糖束大网孔型 凝胶 分离、鉴定、纯化DNA影响DNA迁移率的因素：DNA分子的大小、构 象，凝胶浓度，电压，电泳缓冲液的组成缓冲液pHDNA Pi，DNA带负电荷，迁移率与 分子量对数成反比DNA分子构象影响迁移率：共价闭环DNA线 状DNA开环DNA溴化乙锭（EB）DNA：紫外光下 红色荧光电泳仪电泳仪电泳槽电泳槽缓冲液缓冲液琼脂糖琼脂糖凝胶槽凝胶槽梳子梳子取液器取液器溴酚蓝溴酚蓝琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，EB凝胶板的制备：加梳子，倒胶样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝加样：加样端为负极（黑）电泳：5V/cm观察：紫外灯下观察，照相相关琼脂糖凝

2、胶电泳分离材基因组DNA ，按常规提取，置-20 保存备用。Agarose 、限制性内切酶EcoR为上海生工生物工程有限公司产品。从凝胶中小量回收DNA 片段的试剂盒为上海华舜生物工程有限公司产品，1 kb DNA Ladder为MBI 产品。方配制0.8 %琼脂糖凝胶，电泳缓冲液为1 TAE，电压为5 V/ cm ，电泳1 h ，用溴化乙锭或LIGHTBLUE Dye 显色。2 和3(分别约为10 、7、4.5 kb)之后有很多的较小片段(从大约3.5 kb 到100 bp不等)。在日光下(用LIGHTBLUE Dye 显色)分别切取含有单一目的片段1、2、3 的胶条用试剂盒回收DNA 分子，为了获得足够量的目的DNA 而同时上样4 条泳道。结束结束