酶活力计算公式 .docx

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1、精品名师归纳总结固态发酵漆酶活性测定：酶液制取： 5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮， 200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心 20min。上清用 0.45 m 滤纸过滤，于 -20储存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。 酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液。 pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液。 0.2mL 1mmol/L 的 ABTS420nm处测定吸光值的变化。此试验固态发酵漆酶活性运算公式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U / gNV总OD 420103100mL可编辑资料 - -

2、- 欢迎下载精品名师归纳总结V酶36000TL0.5mL5g可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结N：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm 处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm。100mL/0.5mL 5g：固态变成液态的稀释倍数可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液。 pH=4

3、.5 0.5mL粗酶液稀释液。 0.2mL 1mmol/L 的 ABTS3可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U/gNV总OD42010可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结N：酶液稀释倍数V酶36000TL可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm 处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm。可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结固态

4、发酵锰过氧化物酶 MnP 活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中，加入 100 mL H2O，在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h，之后 5000 r/min离心 20min。用滤纸过滤后，取滤液用于测定 MnP 酶活性。在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L pH 45 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol/ L 的 H2O2 溶液 0. 1 mL 启动反应。在238 nm 紫外光处，测定反应 4 mi

5、n 内OD238 差值。在对比组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2 O2 溶液，其他反应物不变。 每分钟使 1 mol/L的 Mn 2 +转化为 Mn 3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位 U 。 238 = 6.5mM-1-1此试验固态发酵 MnP 活性运算公式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U/mLNV总OD238103100mL可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结V酶6500TL0.4mL5gN：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm

6、 处吸光度的增加值6500: 238nm 处 Mn 2 +转化为 Mn 3 +摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/0.4mL 5g：固态变成液态的稀释倍数可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结液态发酵锰过氧化物酶 MnP 活性测定： 锰过氧化物酶 MnP活性测定在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L pH 45 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol2 +3 +/ L 的 H2O2 溶液 0. 1 mL 启动反应。在238

7、 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内OD238 差值。在对比组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2 O2 溶液，其他反应物不变。 每分钟使 1 mol/L的 Mn转化为 Mn所需的酶量为 1 个酶活力单位 U 。 238 = 6.5mM-1-1此试验固态发酵 MnP 活性运算公式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U/N：酶液稀释倍数mLNV总V酶6500OD238T10 3L可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm

8、处吸光度的增加值6500: 238nm 处 Mn 2 +转化为 Mn 3 +摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结固态发酵木质素过氧化物酶LiP 活性测定：酶液制取： 5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮， 200 r/min 摇 3h， 之后 5000 r/min 离心 20min。上清用 0.45 m 滤纸过滤，于 -20储存滤液，取 能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。 测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM， pH 3.0，0.1mL 10mM 藜芦醇

9、， 0.4mL 酶样品。在 30 1下温浴 5min 后，于反应加入 0.1mL10mM H 2O2 启动酶促反应， 以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液， 以蒸馏水代替3- 1- 1H2 O2 溶液作对比，测 OD310 310= 9.3 M10cm处反应 5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位 U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此试验固态发酵 LiP 活性运算公式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U/mLNV总OD310103100mL可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结V酶9300TL0.4mL5g可编辑资料 - -

10、- 欢迎下载精品名师归纳总结N：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm 处摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/0.4mL 5g：固态变成液态的稀释倍数可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结液态发酵木质素过氧化物酶 LiP 活性测定：测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM， pH 3.0，0.1mL 10mM 藜芦醇， 0.4mL 酶样品。在 301下温浴 5min 后，

11、于反应加入 0.1mL10mM H 2O2 启动酶促反应， 以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液， 以蒸馏水代替H2 O2 溶液作对比，测 OD310 310= 9.3 3M1-01cm- 1处反应 5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位 U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此试验固态发酵 LiP 活性运算公式：可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结U/mLNV总V酶9300OD310T10 3L可编辑资料 - - - 欢迎下载精品名师归纳总结N：酶液稀释倍数V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积 mL V 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm 处摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm可编辑资料 - - - 欢迎下载