课题1_微生物的实验室培养.ppt

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1、划分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途物理性质物理性质化学成分化学成分天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基用途用途鉴别培养基鉴别培养基培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质, ,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生长的生长, ,

2、促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长物的生长培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品, ,用以鉴别不同用以鉴别不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种类微鉴别不同种类微生物生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基消毒消毒灭菌灭菌概念概念指使用指使用较为温和较为温和的物理或化的物理或化学方法仅杀死学方法仅杀死物体表面或内物体表面或内部一部分部一部分对人体有害的微生对人体有害的微生物物( (不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子) )指使用指使用强烈强烈的理化因素的理化因素杀死杀死物

3、体内外所有物体内外所有的微的微生物，包括芽孢和孢子生物，包括芽孢和孢子常用方常用方法法煮沸消毒法、巴氏消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消化学药剂消毒法、紫外线消毒法毒法灼烧灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌适用对适用对象象操作空间、液体、双手等操作空间、液体、双手等接种环、接种针、玻璃接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等器皿，培养基等2、常用消毒和灭菌方法、常用消毒和灭菌方法煮沸消毒法：煮沸消毒法：巴氏消毒法：巴氏消毒法：化学药剂消毒法：化学药剂消毒法：紫外线消毒法：紫外线消毒法：灼烧灭菌灼烧灭菌 100100；5-6min5-6min；部分细胞和

4、芽孢；部分细胞和芽孢7575，30min30min；8080，15min15min；牛奶；牛奶干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌消毒消毒灭菌灭菌酒精，氯气酒精，氯气灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌箱干热灭菌箱高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅煮沸煮沸消毒消毒法法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂（化学药剂（70%酒精等）酒精等）紫外线紫外线针对不耐高温的液体针对不耐高温的液体接种室、超净工作台接种室、超净工作台灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌接种工具（接种环等）接种工具（接种环等）吸管、培养皿等玻璃器皿吸管、培养皿等玻璃器皿实验操作者的双手实验操作者的双手培养基培养基1 1、消毒方法

5、、消毒方法2、灭菌方法、灭菌方法n平板划线法平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。步稀释分散到培养基的表面。n在划线培养后，可以分离到由在划线培养后，可以分离到由一个细胞一个细胞繁繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌菌落落根霉根霉 曲霉曲霉 青霉青霉将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，并却接种环，并打开棉塞打开棉塞 将试管口通过火焰将试管口通过火焰 .将已将已_的接种环伸的接种环伸

6、入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。盖上皿盖。注意不要划破培养基注意不要划破培养基。.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划操作，在三、四、五区域内划线。线。注意不要将最后一区的划注意不要将最后一区的划线与第一区相连。线与

7、第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。入培养箱中培养。 倒置倒置2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法n稀释涂布平板法稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。n在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成养基表面形成单个的菌落单个的菌落。稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.将分别盛有将分别盛有9mL水的水的6支

8、试管灭菌，支试管灭菌，并按并按101106的顺序编号。的顺序编号。2.用移液管吸取用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3.从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注稀释液，注入入102倍稀释的试管中，重复第倍稀释的试管中，重复第2步的操作。步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：注意： 移液管需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口

9、和移液管离火焰12cm处处.,12h-24h。四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保如果未接种的培养基在恒温箱中保温温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出作是符合

10、要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。本课题知识小结本课题知识小结:

11、 :课堂练习课堂练习n1.1.下列有关平板划线操作的叙述，不正确的下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是（是（ ）nA.A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基和培养物。能存在的微生物污染培养基和培养物。nB.B.每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种。划线结束后，接种环上残留的菌种。nC.C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液。接来源于菌液。nD.D.划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死

12、接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。作者。 C课堂练习课堂练习n2.如图是微生物平板划线示意图，划线如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为的顺序为12345。下列操作方法正确的。下列操作方法正确的是（是（ ）nA.操作前不用做任何处理。操作前不用做任何处理。nB.划线操作须在火焰上进行。划线操作须在火焰上进行。nC.在在5区域中才可以得到所需菌落。区域中才可以得到所需菌落。nD.在在12345区域中划线前后都要对接种区域中划线前后都要对接种环灭菌。环灭菌。 D 课堂练习课堂练习n3.3.为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是（，下列有关叙述不正确的是（ ）nA.A.对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。的方法。nB.B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体培养基上。培养基上。nC.C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异。临时保藏的菌种容易被污染或产生变异。nD.D.对于需要长期保存的菌种，可以采用对于需要长期保存的菌种，可以采用-4 -4 低温保藏的方法。低温保藏的方法。 D