正交设计多糖提取实验方案.docx

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1、正交设计多糖提取实验方案 多糖正交实验方案 基本提取工艺流程： 黄精、百合干燥粉碎石油醚脱脂2次加水热提提取液过滤水浴浓缩离心取上清加入Sevag试剂脱蛋白操作取上层水层加无水乙醇沉淀收集沉淀用水溶解过滤除杂质重复1次醇沉收集沉淀加水溶解定容成为贮备液。 精密量取贮备液加水稀释定容供测多糖含量。 精密量取贮备液置锥形瓶水浴蒸干干燥3h冷却后称重，计算浸膏得率。 一、提取过程的正交方案： 1、称取黄精、百合各10g干燥至恒重粉碎成粗粉（过筛）（置于圆底烧瓶中）加入5倍量（100ml）石油醚水浴50加热回流1h，共2次，进行脱脂及除去小分子糖弃液留渣，药渣晾干（置于培养皿中于通风处过夜晾干，或置于

2、圆底烧瓶中水浴上加热至能轻松倒出）（按照正交设计表的要求）加适量蒸馏水，于适宜温度，水浴加热回流提取规定次数合并提取液减压抽滤水浴浓缩（90）至固定量30ml（浓缩过量时补足体积）4000r/min离心10min（注射器抽取）取上清液 2、置于锥形瓶中加入Sevag试剂（氯仿：正丁醇=5:1）约等量置于恒温水浴振荡器50振荡15min改置于分液漏斗中静置20min以上待其分层后，取最上层（从上口倒出）重复操作2次置于广口瓶，加醇处理，加入4倍量的无水乙醇（预冷过）冰箱冷藏过夜使其沉淀减压抽滤，收集沉淀（连同滤纸一起）用20ml蒸馏水溶解过滤除去水不溶物重复1次加醇沉淀，减压抽滤收集沉淀，加少量

3、蒸馏水溶解，加水稀释定容至50ml容量瓶中，成为贮备液。 3、精密量取1ml贮备液，加至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，定容摇匀。供测定多糖含量。 4、精密量取10ml贮备液，置于（已干燥并精密称重的）小锥形瓶中，水浴蒸干，于105烘箱干燥3h，取出迅速置于玻璃干燥器内冷却30min，迅速称重，计算浸膏得率。 浸膏得率=（干浸膏重量/药材质量)（50/10) x 100% 注意事项： 1、粉碎不用太细，20-40目均可。脱脂时圆底烧瓶可选择500ml或1000ml的。 2、9份水浴浓缩条件应一致，置于水浴锅盖面上，注意不要打翻。 3、离心后取上清液时，用注射器抽吸，每编号用一支。 4、精密量取操作，用移液器或移液管 5、制备浸膏的小锥形瓶，约50ml规格的。应洁净，105干燥2-3h至恒重，迅速取出，置于玻璃干燥器内冷却30min后，带手套操作，迅速称量，记录空瓶重量。 6、加醇沉淀时，应置于磁力搅拌器上，在搅拌下缓慢加入无水乙醇。在抽滤时再取回搅拌子。 多糖提取正交因素表 水平温度 （）提取时间 h 料液比提取次数 1 70 1 1:8 1 2 80 1.5 1:10 2 3 90 2 1:12 3 三、多糖脱蛋白及醇沉正交试验方案