2022年酶活力计算公式 .pdf

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1、固态发酵漆酶活性测定：酶液制取： 5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮， 200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心 20min。 上清用 0.45 m 滤纸过滤，于 -20保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。 酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液； pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液； 0.2mL 1mmol/L 的 ABTS 420nm处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：5g0.5mL100mLLT36000V10)g(/U3420酶总ODVNN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终

2、体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm 。100mL/(0.5mL5g)：固态变成液态的稀释倍数精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 6 页液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液； pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液； 0.2mL 1mmol/L 的 ABTS LT36000V10)

3、g(/U酶3420总ODVNN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm 。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 6 页固态发酵锰过氧化物酶MnP 活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔2 d 取 5 g 发酵物于250 mL 三角瓶中，加入 100 mL H2O， 在 200 r / mi

4、n 的摇床中振荡提取3 h， 之后 5000 r/min离心 20min。 用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP 酶活性。 在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol / L 的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在238 nm 紫外光处，测定反应4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。 每分钟使 1 mol/L 的 Mn2 +转化为 Mn3

5、 +所需的酶量为 1 个酶活力单位 ( U) 。(238 = 6.5mM-1-1) 此实验固态发酵 MnP 活性计算公式：5g0.4mL100mLLT6500V10)(/U3238酶总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm处 Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 -

6、 - - - - - -第 3 页，共 6 页液态发酵锰过氧化物酶MnP 活性测定：锰过氧化物酶 MnP活性测定在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol / L 的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在238 nm 紫外光处，测定反应4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。 每分钟使 1 mol/L 的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的

7、酶量为 1 个酶活力单位 ( U) 。(238 = 6.5mM-1-1) 此实验固态发酵 MnP 活性计算公式：LT6500V10)(/U酶3238总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm处 Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 6 页固态发酵木质素过氧化物酶LiP 活性测定：

8、酶液制取：5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮， 200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心 20min。 上清用 0.45 m 滤纸过滤，于 -20保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM， pH 3.0 ，0.1mL 10mM 藜芦醇， 0.4mL 酶样品。在 301下温浴 5min 后，于反应加入 0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应， 以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液， 以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测 OD310( 310= 9.3 103M- 1cm-

9、 1)处反应 5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵 LiP 活性计算公式：5g0.4mL100mLLT9300V10)(/U酶3310总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm处摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归

10、纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 6 页液态发酵木质素过氧化物酶LiP 活性测定：测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM， pH 3.0 ，0.1mL 10mM 藜芦醇， 0.4mL 酶样品。在 301下温浴 5min 后，于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应， 以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液， 以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测 OD310( 310= 9.3 103M- 1cm- 1)处反应 5min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵 LiP 活性计算公式：LT9300V10)(/U酶3310总ODVNmLN：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mLOD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm处摩尔吸光系数 (L/molcm) T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 6 页