提取香菇多糖测的实验设计.doc

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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more.-author-date提取香菇多糖测的实验设计提取香菇多糖测的实验设计提取香菇多糖测的实验设计 -生物091班 曹雅淇实验目的：掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。实验原理：在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同

2、时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。 实验用具：离心机 漏斗 铁架台案板、刀 洗耳球 量筒 平底锅 烧杯 98%酒精酒精灯 天平 研钵 电炉子 香菇 石油醚 实验方法步骤：1.样品的处理1）称量：将新鲜的香菇洗净后用托盘天平称量其质量，记为m1；2）切碎：称量后的香菇用刀再案板上尽量切碎；3）研磨：切碎后的香菇再放入研钵中研磨，2、香菇汁液的提取1）加水预热：用量筒量取体积为五倍于香菇质量数的蒸馏水，记体积数为v1,然后倒入铝锅中。随后打开电炉给锅内蒸馏水加热至沸腾；2）装锅：再把研磨后的香菇放进煮沸的蒸馏

3、水中，边煮边搅拌以防香菇粘在锅底。当水分减少时，在适当时候往锅内加适量的蒸馏水，定容至v1；3）出锅：大约煮1.5h后关掉电路的开关，冷却后将香菇汁液倒出，边倒出边进行过滤；3、过滤漏斗下放置一烧杯并使漏斗管贴着烧杯内壁，接着用四层纱布过滤，过滤时尽量把纱布内的和浸到纱布里的汁液过滤到烧杯中，记下过滤后的体积数为v2；4、蒸发浓缩打开电路的开关，使盛有过滤液的烧杯隔着石棉网在电炉上加热蒸发浓缩，直至体积数为=v35、多糖的提取5.1沉淀1）酒精的配置：配置95%浓度的酒精，酒精的量与v3成1：5的比例，记体积为v4。盛装酒精的烧杯并用封口膜密封以免酒精挥发；2）静止沉淀：将配置的酒精与浓缩液混

4、合后静置24h，每隔一定时间观察混合液的变化；5.2离心1）多糖的分离：静止后的多糖混合液分别把上清液倒入烧杯中，剩下用酒精沉淀的絮状物装入烧杯里；2）装瓶：拿一只离心用的瓶子装入絮状物和少许上清液总体积约占瓶子的2/3，并用电子天平称出其质量再拿另一只瓶子装入同等质量的上清液。就这样每两个一组称、装，边称装边及时盖紧瓶盖并在瓶的一侧贴上标签记上组数和酒精浓度。3）离心：合上离心机的开关并打开离心机放入盛有需要离心的瓶子。放入时，一组中的两只瓶子（质量相同的一只絮状物、一只上清液的两只瓶子）的坐位要对称。合上离心机后，4500转/min，10min4）分离：将离心后将瓶内底部沉淀物用玻璃棒置入培养皿中5.3烘干将培养皿放入烘箱内烘干（121，30min）,烘干后的多糖用培养皿称出其质量盖好皿盖避免多糖吸水。-