2022年微生物实验报告.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验微生物试验细菌外形观看细菌分布消毒灭菌名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告细菌外形观看一、试验目的1. 把握光学显微镜油镜的使用及日常保护2. 把握细菌的三种外形3. 把握临床常见细菌的外形及染色4. 把握细菌的特别结构5. 明白支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、试验原理1. 一般光学显微镜油镜的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油,然后转换油镜头2. 从侧面观看并渐渐转动粗调剂器,使油镜头浸没在油滴内,当油镜头几乎接触玻片时

2、停止转动,以免碰撞玻片,用双眼观看目镜,同时调剂细调剂器,直至细菌清晰3. 依据需要调剂显微镜亮度2. 一般光学显微镜的保护1.移动显微镜时,用右手持镜壁,左手托镜座,平端于胸前最2.油镜用毕后,要立刻用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；后,用洁净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去,以免损耗油镜头3. 镜头擦净后,降低接物镜并将其转成八字形,罩好镜罩放入柜内4. 做好使用记录3 微生物学问1 细菌按外形分类：球菌：球形包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等杆菌：杆状包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等螺旋菌：螺旋状包括螺旋菌、弧菌等2 细菌的基本结构细胞壁、细胞

3、膜、细胞质、核质、核蛋白体3 细菌的特别结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌；如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称,胞类；包括原核类、 真核类和非细原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5 真菌 单细胞：圆形、芽生孢子；如：酵母菌2 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽；如：霉菌 6 白假私酵母菌白

4、念生物学性状： G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落 厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定 致病性：皮肤粘膜鹅口疮、内脏感染、 CNS感染 微生物学检查：直接涂片、染色后镜检菌体、芽生孢子、假菌丝7 新型隐球菌 生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜比菌体大 1-3 倍致病性：吸入后侵害皮肤、粘膜等慢性炎症和脓肿；侵袭 CNS亚急性或慢 性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、外围有宽厚荚膜为阳性三、试验材料痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体记号笔： 1 支；大镊子： 1 支；火柴：1 盒；蜡笔： 1 支；试管架：1 个；酒精灯： 1 个；接种环：1 支； Olympus 显微镜： 1 台；显微

5、镜使用记录本：1 个四、试验内容1. 观看细菌三种外形1球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌子弹形、脑膜炎双球菌蚕豆形、四联菌2杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌异染颗粒3螺形菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌弧菌 霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观看细菌的特别结构 芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图 葡萄球菌 staphyloccocus；肺炎双球菌 pneumo coccus；脑膜炎球菌 meningococcus；破 伤风杆菌 Clostridium Tantenus ；霍乱弧菌 vibrio cholera ；芽胞 spore；鞭毛flagellum ；荚膜 c

6、apsule；钩端螺旋体 leptospira 五、试验结果绘 8 幅细菌镜以下图,已交；六、摸索与争论1 显微镜高倍镜使用时看不清晰的常见缘由1 未滴加镜油2 镜头不洁净3 标本放置反了,所以达不到对焦平面4 制片问题：标本太厚、染色误差等3 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告细菌分布一、试验目的1. 把握固体培育基的制备 2. 把握机体常见部位及环境中的细菌采样、培育、及初步鉴定 3. 把握革兰氏染色方法及结果判定二、试验原理1. 培育基：1 细菌生长所需养分物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子

7、2 培育基分类： 1依据养分物质：养分培育基、挑选培育基、鉴别培育基 2依据物理性质：液体培育基、固体培育基和半固体培育基3 细菌在培育基中的生长状况：外表生长、匀称浑浊生长、沉淀生长 2. 革兰氏染色：革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖peptidoglycan 层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小, 通道弯曲, 结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽 聚糖层很薄, 脂肪含量高, 经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过,因而将染料 洗去而被脱色；三、试验材料咽拭子、羊血培育皿：1 套/人；大号一般培育皿：1 块/2 人；载玻片： 1 片/人；A、B 菌：6 套

8、/ 桌； NS：1 份/ 人；滤纸： 1 张 /人；消毒液： 4 套/桌；三角瓶、电天平、养分琼脂、称 药纸、称药勺、量筒：1 套/桌四、试验内容1. 培育基制备 1按产品要求称取养分琼脂 2每试验桌制备 200ml 3高压蒸汽灭菌后,在洁净工作台内倒平皿 4所制备的一般平皿用于空气培育 2. 机体不同部位的细菌采样、培育 1咽部正常菌群的采样、培育 咽拭子擦拭咽部,平行划线法接种于羊血平皿；2手指消毒前后细菌的采样培育未消毒手指平行划线法接种于一般平皿；一般平皿；3. 环境中细菌采样培育 1空气培育同一手指碘酒、 酒精消毒后平行划线法接种于将培育皿打开暴露于空气中,20 分钟后盖好平皿盖儿2

9、流通纸币或硬币的细菌采样培育4 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告将硬币正反面分别在培育基上充分接触3采样终止后,将培育皿底部朝上放入铁丝筐,统一置培育箱：4. A、B、C 菌鉴定革兰氏染色法1. 细菌涂片制备程序：1取一洁净玻片,火焰上方渐渐通过三次去油2蜡笔画线将玻片分割为 A、B、 C三区域3接种环取生理盐水分别滴入 A、B 两区域各一滴37 18-24 小时4分别取少许 A、B 、C菌 ,与生理盐水充分混匀成菌液,风干后形成菌膜5固定火焰上方渐渐通过三次6革兰氏染色7滤纸吸干水分,油镜观看2.

10、革兰氏染色：1细菌涂片、火焰固定2结晶紫初染 1min 3卢戈氏碘液媒染 1min 495%乙醇脱色 30-40s 5沙黄复染 1min 五、试验结果A：G+,球菌,估计为金黄色葡萄球菌；B：G-,短杆菌,估计为大肠杆菌；六、摸索与争论1 影响革兰氏染色的因素：1细菌本身因素：菌龄：假如菌龄太大,可能显现假阴性2操作因素涂片：取菌应适量,涂片要匀称,假如某个部分菌层太厚,可能在脱色时达不到,会导致局部假阳性固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而显现假阴性；但是固定不够,细菌会在水洗时被冲掉初染：初染时间虽然说是 滴加不匀称可能显现半阴半阳媒染：和初染一样1 分钟,但是可以适当延长,

11、时间太短会显现假阴性；染色脱色：脱色时间不能过长,基本上用酒精滴过之后立刻水冲就可以了,否就简单显现 假阴性复染：复染时间需足够长,否就可能会染不上5 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告消毒灭菌一、试验目的1. 明白试验室常用消毒灭菌方法及其原理 2. 把握试验中所用仪器的使用方法 3. 把握机体常见部位及环境中的细菌培育物的初步鉴定 4. 强化革兰氏染色技能二、试验原理1 口咽部及皮肤正常菌群 鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等 口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体

12、、G-杆菌等皮肤：表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌2溶血类型 溶血：现象：草绿色溶血环 常见菌种：时机致病菌甲链、肺链原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白 溶血：现象：透亮溶血环 常见菌种：致病菌乙链 原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂,血红蛋白释放三、试验材料咽拭子培育物：1 套/ 人；空气、纸币、手指消毒前后培育物：1 套/2；载玻片：1 片/人；NS：1 支/人；滤纸： 1 张/人四、试验内容1. 常用消毒灭菌方法：示教讲解1热力灭菌：1干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤160 , 2 小时2湿热灭菌法：煮沸2%Na2CO3, 105 ；高压蒸汽灭菌103.

13、4kPa , 20 分钟,121,临床运用最广的灭菌方法2. 紫外线 Ultraviolet radiation ：波长 265nm-266nmDNA 吸取光谱杀菌才能最强；紫外光穿透力差,一般只用于不耐 热物品外表的消毒；3. 过滤 filtration 用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌,生素等用于不耐热物质的灭菌血清、毒素、抗滤菌器：薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器 4. 低温 储存菌种冷冻真空干燥法6 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告5常用的化学消毒剂类别作用机制常用种类酚

14、类蛋白变性,细胞膜损耗洗必泰醇类去除脂类,蛋白变性乙醇卤素蛋白变性氯气、碘酊、碘伏重金属盐蛋白变性红汞、硫柳汞、硝酸银醛类蛋白变性福尔马林、戊二醛外表活性剂蛋白变性,细胞膜损耗新洁而灭酸碱类破坏细胞膜、细胞壁,蛋白变性十一烯酸染料干扰氧化、抑制繁衍龙胆紫6试验室常用化学消毒剂：70-75%乙醇 洁净台消毒：来苏水擦拭 防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠2 细菌分布结果鉴定 1观看菌落 2取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观看五、试验结果1. 咽部正常菌群的采样、培育结果：在羊血培育皿上显现四种菌落：（1）数目多,划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、潮湿、透亮、圆形；四周出现草绿色溶血环,发生了不完

15、全溶血即 溶血；（2）数目较多,划线沿线都有；较小；乳白色、光滑、潮湿、半透亮、圆形；（3）少,只显现在四个点；中型；乳黄色、光滑、半潮湿、不透亮、外形不规章；在此种菌落下方的培育基显现了透亮溶血环,发生了完全溶血即 溶血；（4）1 个菌落；较大；乳白色、光滑、潮湿、半透亮、圆形；粘稠；取 1、2、3进行革兰氏染色,结果如下 ; G+,链球菌,依据不完全溶血推断,为甲型链球菌；（1）（2）G-,球菌,细胞个体小,外形像金黄色葡萄球菌,但是染色为阴性；（3）G-,球菌；2. 手指消毒前后细菌的采样培育结果：1消毒前：仅显现 2 个菌落,较小；乳白色、光滑、潮湿、有光泽、圆形；革兰氏染色结果：G-

16、,杆菌2消毒后：无菌落显现；3. 硬币正反面的细菌采样培育结果：1正面 三种菌落：113 个菌落；较小；乳白色、光滑、潮湿、有光泽、圆形；和手指消毒前的菌落一样；21 个菌落；较大；白色、光滑、潮湿、近似圆形；35 个菌落；较大；中心乳黄色边缘颜色变浅、光滑、潮湿、中间凸、不规章、边缘光滑 取其中 2、3进行革兰氏染色,结果如下：7 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告2G-,杆菌；和手指消毒前的细菌一样3G-,链杆菌；外形较大,外形像炭疽芽胞杆菌,但是没有芽孢且染色为阴性；2反面 两种菌落：12 个；较

17、大,乳白色、光滑、潮湿、有光泽、圆形；2多个,沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、潮湿、透亮；4. 空气培育结果平皿放开在试验室的窗台上放置了约 平皿显现了五种菌落：20 分钟,当时阳光照在上面：111 个；中等大小；白色、光滑、潮湿、半透亮、圆形22 个；较大；四周白色,中间有一个透亮圈,光滑、潮湿、中间凹的圆饼状31 个；较大；四周黄色,中间有一个透亮的圆形区域,半潮湿、没有光泽41 个；较大；边缘橘黄色,中心偏白、明显凸起、干燥、外形不规章51 个；较大；边缘透亮,中心乳黄色,光滑、潮湿、半透亮、圆形 取其中 3、4进行革兰氏染色,结果如下：3G-,杆菌；和手指消毒前、硬币正面菌

18、落2的细菌一样4显现三种细菌：G-,双球菌 G+,双球菌 G-,梭菌 5 八个取样染色结果取样细菌来源染色结果细菌外形1 咽部G+ 链球菌2 咽部G- 球菌3 咽部G- 球菌4 手指消毒前G- 杆菌5 硬币正面G- 杆菌6 硬币正面G- 链杆菌7 空气试验室窗台G- 杆菌8 空气试验室窗台G- 双球菌G+ 双球菌G- 梭菌六、摸索与争论1 巴氏消毒法的利用巴氏消毒法是一种低温消毒法,包括：低温保护法：62.8 摄氏度保护30 分钟；高温瞬时法：71.3 摄氏度作用15-30 秒；该法适用于食品的消毒；现主要应用于乳制品；2 为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低？课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿

19、热消毒法要高,下到达的灭菌成效可以与干热法相同,分析缘由如下：（ 1）湿热中蛋白吸取水份,更易凝固变性；说明湿热灭菌法可在较低的温度（2）水分子的穿透力比空气大,更易匀称传递热能,在干热状态下,由于热穿透力较差,微生物的耐热性较强,必需长时间受高温的作用才能到达灭菌8 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 微生物试验报告的目的（3）蒸汽潜热大,每1 克水由气态变成液态可释放出529 卡热能,可快速提高物体的温度；3 细菌分布试验结果争论咽部正常菌群主要为：溶血和非溶血性链球菌、球菌等, 不同人由于个体差异和取样部位差异,

20、所得菌种也有所不同手的消毒是有效的, 消毒后细菌明显削减了；同时手上的菌是许多的,所以需要常洗手；手上较常见的是四联球菌；硬币上的菌也相对较多,由于它经受的环境许多；在咽部、 硬币和未消毒的手上,都得到了一种很像大肠杆菌的革兰氏阴性杆菌,说明这种菌分布特别广泛；4 空气培育取样染色时,为什么得到三种菌？图 1 空气培育取样革兰氏染色10*100 一般认为, 菌落形成是一个菌落到培育基上并增殖而来,但是在空气培育得到的菌落取样染色时,发觉了三种外形完全不同的菌如图 1,较大的双球菌和梭菌为革兰氏阴性,较小的双球菌为革兰氏阳性；可能的缘由有：（1）取样的污染,该菌落被两次取用,可能遭到污染（2）在特别小的概率下,三个不同的菌掉到了同一处,同时这三种菌的生长互不影响甚至互利,于是形成了混合菌群；（3）三个菌落在生长过程中由于靠得很近而融合了；9 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 9 页