2022年生化思考题 .pdf

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1、1 生化实验思考题总汇请学生听从老师安排准备思考题，要求每位同学必须参与。请组长分配全组同学准备，每个人将思考题做成ppt， 将文件发到公用邮箱中或者放在网上，上课提前10 分钟到实验室，下载到讲台计算机桌面指定文件夹 中， 上课时由该位同学讲解。一般情况下不允许优盘拷贝。Biochemistry_ ，密码 120_122 ppt 文件名格式为：实验名 (汇报人姓名 )思考题目录一、总论 1 二、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究1 （亲和层析分离纯化）2 三、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究2 （考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质浓度） 2 四、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究3 （酶活力、 米氏

2、常数、 最大反应速度） 2 五、细胞色素 c 的制备及其含量测定 3 六、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 3 七、免疫印迹 Western blotting 3 八、酶联免疫吸附测定（间接法） 4 一、总论实验前需要了解的实验技术1层析技术：亲和层析，吸附层析，凝胶过滤层析，离子交换层析，了解各种层析技术的原理，使用的仪器2离心技术：低速离心，高速离心，离心应注意的问题3可调式移液器的使用：操作及注意事项4分光光度计的使用：紫外分光光度计，可见分光光度计，酶标仪5酶活力，米氏常数，最大反应速度，比活力的概念及常用的测定方法6测定蛋白质浓度的几种常用方法，了解其原理及其优缺点7聚丙烯酰胺凝胶电泳的

3、原理、分类、介质、染色方法等8. 生物大分子提取制备技术：盐析，盐溶，等电点沉淀，有机试剂沉淀，透析等，了解其原理及操作9. 免疫印迹法（Western blotting）及酶联免疫吸附测定（ELISA ）的原理名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 1 页，共 4 页 - - - - - - - - - 2 二、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究1（亲和层析分离纯化）1. 了解谷胱甘肽转硫酶。2. 在生物大分子提取制备前期，实验材料如何进行预处理，列举几种常用粗提蛋白质的实验

4、方法。3. 层析分离生物大分子的方法有哪些？简单介绍各种方法的原理（列举三种即可， 亲和层析不必细讲） 。4. 亲和层析分离纯化生物大分子的原理，影响亲和层析的几种因素。5. 关于亲和层析配基、载体的选择，载体和配基偶联的条件，应注意哪些问题。6. 亲和层析的洗脱方式有哪几种？7. 本实验中Buffer A 和 B 中各组分的作用是什么？如果使用错误会出现什么后果？8. （1）本次亲和层析实验中应注意的问题有哪些？（2）使用紫外检测仪需要注意什么？主要说明平衡时紫外检测仪和记录仪调整基线的重要性， 层析过程中灵敏度设置的必要性（基线为检测仪没有蛋白质峰出现时的记录线，一般调整为记录纸上右边一大

5、格的位置；在上样时调整紫外检测仪低灵敏度，收集样品时提高灵敏度）。（3）记录仪的纸速对洗脱峰有什么影响？三、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究2（考马斯亮蓝微盘比色法测定蛋白质浓度）1. 定量测定蛋白质含量的常用方法有哪些？简述其适用范围（不必细讲）。2. 紫外吸收法、 双缩脲法、Folin- 酚法测定蛋白质含量的原理是什么？具有什么优缺点？3. 简述考马斯亮蓝显色法的原理和测定方法。考马斯亮蓝G-250 和 R-250 在结构和使用上有何区别？4. 说明可调式移液器的使用注意事项，平行操作的必要性。四、谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究3（酶活力、米氏常数、最大反应速度）1.酶促反应速度的影响因

6、素有哪些？如何测定酶促反应速度？2.简述酶活力、国际单位、比活力的定义。测定酶活力和比活力的意义是什么？3.简述谷胱甘肽转硫酶酶活力测定的原理及测定方法。4.简述测定酶的米氏常数和最大反应速度的方法，说明终止法的操作方法及其优点。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 2 页，共 4 页 - - - - - - - - - 3 五、细胞色素c 的制备及其含量测定（此部分由2 个大组讲， 14 为一组题， 58 为一组题）1.简述离心技术和膜分离技术的基本原理及应用。离心机的使

7、用应注意哪些问题？2.介绍现代生物质谱在蛋白质组学研究中有哪些应用3.测定蛋白质相对分子质量有哪些方法，其优缺点是什么？4.染色质免疫共沉淀Chip 技术的原理及操作步骤5.为什么要对蛋白质脱盐，有哪些方法可以对蛋白质样品进行脱盐处理。6.介绍高通量测序技术及其在现代生物学研究中的应用7.以细胞色素C 为例解释猪心细胞色素C 提取制备每步的基本原理？8.介绍研究蛋白质相互作用的研究方法，并重点介绍其中一种的过程。六、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理？凝胶聚合的催化体系有哪些？2哪些因素影响聚丙烯酰胺凝胶的特性？在实际工作中，如何选择合适的凝胶浓度使蛋白质混合物得到最

8、大限度的分离？净电荷聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的特点是什么？3简述 SDS-PAGE 不连续电泳测定蛋白质相对分子质量的原理。什么是连续系统和不连续系统？有何优缺点？4样品处理液中各组分的作用是什么？染色常用考马斯亮蓝R-250 和 G-250，两种方法有什么异同？七、免疫印迹Western blotting 1.免疫印迹Western blotting 技术的原理，主要过程及其主要应用。2.免疫印迹Western blotting 技术中如何选择一抗和二抗，二抗主要有哪几种类型。3.免疫印迹中转膜液的作用是什么？转移过程中蛋白质的迁移方向如何，为什么？名师资料总结 - - -精品资料欢迎下

9、载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 3 页，共 4 页 - - - - - - - - - 4 4.免疫印迹中封闭液的作用是什么？5.蛋白质从凝胶转印到膜的过程中电流过高有什么影响？6.什么是绿色荧光蛋白GFP 以及 GFP 发现的历史。介绍绿色荧光蛋白GFP 在现代生物学研究中主要应用。7.免疫印迹的显色方法有哪些？各有什么优缺点？8.详细讲解His-tag 或者 GFP-tag 融合蛋白表达纯化的流程及主要应用。八、酶联免疫吸附测定（间接法）1.介绍酶联免疫吸附测定法ELISA 的原理，操作过程及主要应用。2.ELISA 实验中有哪些注意事项？3.什么是磷酸化蛋白及其功能分类，查阅文献资料介绍目前磷酸化肽富集的主要方法及其原理（详细介绍其中1 种方法）。4.什么是糖蛋白及其功能分类，查阅文献资料介绍目前糖蛋白富集的主要方法及原理（详细介绍其中1 种方法）。名师资料总结 - - -精品资料欢迎下载 - - - - - - - - - - - - - - - - - - 名师精心整理 - - - - - - - 第 4 页，共 4 页 - - - - - - - - -