2022年银杏叶中银杏黄酮大孔树脂吸附分离性能研究报告.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用银杏叶中银杏黄酮大孔树脂吸附分别性能的讨论近年来,整个世界 特殊是西方发达国家掀 起了一阵绿色浪潮；国际上慢慢形 成了一种共识-得自绿色生命植物的产品往往具有较大 的安全 性；银杏作为 近代植物药开发讨论的热点之一,正处于这一浪潮的前沿；银杏树为银杏科植物银杏Ginkgo biloba.L.又名公孙树,为我国特产植物.银 杏叶提取物GRE主要 含黄酮 ,内酯两 类活性 成分 ,黄酮以山柰酚kaempferal,槲 皮素quercetin,异鼠李素isorhamnetin的甙类化合物为主,内酯以白果内酯及银 杏内酯 A.

2、B.Cgimkgolide A.B.C为主；银杏黄酮具有捕捉游离基,抑制血小板活 化因子PFA扩张冠动脉血管,增加心脑血量等 功效；可用于治疗由于血管 老化, 脑血管供血不足所导致 的外周 循环不 良,眩晕,耳鸣,头痛失眠,短期记忆不良听力 障碍,精神不振等,同时,仍可以用于研制营 养口服液,保健食品与化妆品,其应用日 益广泛有关银杏提取方法报道许多,德国第一提出银杏制剂含量的质量标准:黄酮 糖甙24% 萜 内酯6%和 白果酸2 10-6；为了是银杏产 品能出口创汇,参与 国际市场的大循环,不断探究新的提取方法工艺,讨论并挑选出简洁且高效的工艺 方法以成为这个领域的焦点；目前有关银杏叶的提取工

3、艺主要以乙醇为提取溶剂,由于乙醇系有机溶剂,消耗大、成本高、且生产过程存在易燃等安全隐患,为此我们依据银杏叶 异黄酮有肯定的水溶性,试改用水做提取溶剂,以银杏黄酮为目标,对其银杏黄酮进行了正交提取工艺讨论,并对正确提取工艺得到的提取液进行了大孔吸 附树脂吸附分别性能讨论,以期为银杏叶银杏黄酮的开发利用供应依据；1 材料与仪器 1.1 材料 银杏叶 采自陕西略阳 ,自然干燥,粉碎；1.2 试剂银杏黄酮对比品含量 98%：购自Sigma 公司；大孔树脂LX-38、 LX-1 、D101,AB-8 购自西安蓝小科技开发有限公司；试剂均为分析纯；1.3 仪器 电热恒温水浴锅 H H S21-6C,上海

4、医疗器械五厂 ；电子分析天平 FC204,上海精科实业有限公司；UV -762 紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司 ；旋转蒸发器 上海亚蓉生化仪器厂 ；SHZ-D循环水式真空泵,索式提取器,电热鼓风干燥箱；植物粉碎机FZ102,天津市泰斯特仪器名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用有限公司 2 方法 2.1 银杏叶银杏黄酮、银杏内酯的薄层检测 银杏叶银杏黄酮的薄层检测硅胶薄板制作称取 4g 硅胶 G 置于研钵中,加入0.5%的羧甲基纤维素钠溶液12ml,研磨 15min 后铺于 20 10

5、cm 的洁净玻璃平板上,要求平整无气泡,然后晾干即 可；绽开剂配制取绽开剂 氯仿-甲醇-乙 酸乙酯按 2：1：1 的比例配制 60ml30：15：15）作 为绽开剂；薄板活化：将制好的硅胶薄板在105下活化 30min；点样：点样点距板子底端 1.5cm 左右,全部点样点位于同始终线上,尽可能向中间靠拢,每个点样点点样约20 l,点样点尽可能小；饱和：将板子不没入层析缸内的展层剂中,在展层剂的蒸气中饱和约 0.5h；层析：将板子下端插入展层剂中进行绽开,当展层剂前沿距板子上端约 1.5cm时取出板子,自然晾干；观看：绽开取出晾干后, 喷 5%Alcl3 的乙醇溶液,热风吹干、并在 365nm

6、荧光灯下观看；Rf ；银杏叶银杏内酯的薄层检测硅胶薄板制作称取 4g 硅胶 G 或硅胶 GF254 置于研钵中,加入0.5%的羧甲基纤维素钠溶液 12ml,研磨15min 后铺于20 10cm 的洁净玻璃平板上,要求平整无气泡,然后晾干即可；绽开剂配制名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用取绽开剂 甲苯-丙酮按 7：3 的比例配制 50ml35：15）作为绽开剂；薄板活化：将制好的硅胶薄板在105下活化 30min；点样：点样点距板子底端 1.5cm 左右,全部点样点位于同始终线上,尽可能向中间

7、靠拢,每个点样点点样约20 l,点样点尽可能小；饱和：将板子不没入层析缸内的展层剂中,在展层剂的蒸气中饱和约 0.5h；层析：将板子下端插入展层剂中进行绽开,当展层剂前沿距板子上端约 1.5cm 时取出板子,自然晾干；观看： 先 喷细 水雾定 位后 170 加热 30 分钟 ,如有 银杏 内酯存 在 , 在波长 254nm 下显现苍黄色荧光斑点,银杏内酯 B 的 Rf=0.23 左右；2.2 络合分光光度法测定银杏黄酮的含量 a. 标准曲线的制备 精确 秤取 芸香 叶 甙 rutin芦 丁） 30mg, 用 30%乙醇 溶 液 溶 解并 定容至 100ml,摇匀,放置 5 分钟后,加 入 0.

8、7mlAlNo331:20,6 分钟后加入 5ml 1mol/L 的 NaoH 溶液并摇 匀,用 30%的 乙醇补充至刻度线,10 分钟后于 510nm 进行比色测定；用 UV-265 可记录分光光度计测定结果如下毫升013579浓度值 mg/ml00.0120.0360.0600.0840.108OD 值b.样品的制备及测定 预备称取 2 克银杏叶粉碎至粉末,放置于索氏提取管中；加约 150ml 甲醇热 回流至回流液无色,减压浓缩至小体积、定容至 150ml,摇匀待测,从中移取 5ml 到 25ml 中的容量瓶中,按标准曲线的测定方法加样,并用 UV-265 紫外分 析仪测定其浓度；精确产品

9、 50mg,用 30%乙醇溶液溶解并定容至 100ml；结果 标准曲线如下:名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 7 页精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用测定结果：2.3 大孔树脂静态吸附试验表 1吸附树脂的物理性能比表面积 /m2/g 孔径/nm 型号极性LX-38 LX-1 D101 AB-8 2.3.1树脂的处理和再生：将树脂放入蒸馏水中,溶胀后浮选,用1moL/L 的 NaOH 溶液浸泡 4h,用蒸馏水洗至中性,然后用 0.5moL/L 的 HCl 溶液浸泡 3h,用蒸馏水洗至中性；用95%乙醇浸泡 24h,不断搅拌,用蒸馏水

10、洗至无白色混浊,并且无醇味；用蒸馏水浸泡待用；树脂简洁再生可用含量为95%的乙醇洗至无色,即可使用,经多次使用的树脂吸附杂质较多,颜色较深,可用酸碱处理再生后使用；2.3.2银杏叶样液制备称取银杏叶 100g,加 600ml 75%酒精超声提取30min,用 4 层纱布粗滤得粗滤液,残渣再加入500ml75%酒精超声提取30min,用 4 层纱布粗滤得粗滤液,合并两次粗滤液,在用滤纸或离心过滤得银杏叶提取液；银杏叶提取液减压浓缩至无醇味,加65温水至 400 ml 进行水沉,静置过夜,次日下层为油状膏子保留备检,上层液过滤并定容至 400 ml,得银杏叶样 液/ 树脂的量；2.3.4 树脂脱附

11、率的测定将上述经过 24 h 静态吸附银杏黄酮的树脂分别出来,吸干表面水分,然后名师归纳总结 加入 70%的乙醇 20.0 ml ,在 25, 120 r/min 的条件下振荡脱附2 h；测定脱附第 4 页,共 7 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用液中银杏黄酮的量,按下式运算脱附率；脱附率 %=洗脱出的银杏黄酮/加入的银杏黄酮-未吸附的银杏黄酮100%；不同树脂对银杏黄酮的吸附量和解吸试验结果见表；表 大孔树脂静态吸附及解吸性能型号 吸附量 /mg/g 解吸率 /% LX-38LX-1 D101 AB-8 从表 可看到 4

12、 种树脂中树脂的吸附量最大,最小,在实际生产应用中,对树脂要求不仅要求吸附量大,而且要求解吸率要高,以保证有效成分的最大回收；在这 2 种树脂中树脂不仅具有大的吸附量,而且具有较高的解吸率,因此认为树脂是富集纯化银杏黄酮较为抱负的吸附材料；2.3.5大孔吸附树脂解吸特性的考察按 2.3.3 项的方法得到吸附饱和的树脂5 份,分别精确加入 20 mL 的 15%、30%、45%、 60%和 75%的乙醇溶液进行解吸 ,运算不同浓度乙醇溶液对银杏黄酮的解吸率；挑选洗脱剂不仅要求具有使大孔树脂溶胀,减弱被吸附物质与树脂之间的吸附力,而且要求可溶解被吸附物质,本试验选用洗脱剂为乙醇,考察不同乙醇溶液浓

13、度对银杏黄酮的解吸成效,结果见图 1；60% 75% 洗脱剂浓度15% 30% 45% 解吸率 % 将表做图图洗脱剂浓度对银杏黄酮解吸的影响60%的洗脱液基本上由图 可以看出, 15%和 30%的洗脱液解吸率较低,而可以将银杏黄酮完全从树脂上解吸下来,从纯化的纯度角度和节省试剂用量的角度考虑,应选用60%乙醇作为洗脱剂,没有必要使用75%的乙醇作为洗脱剂；2.3.6 pH 对树脂吸附成效的影响精确称取预处理好的用滤纸吸干表面水份的湿树脂5 份,每份 1.0 g,装入名师归纳总结 50mL 具塞锥形瓶中,分别加入用2mol/L 的盐酸和 2mol/L 氢氧化钠调剂pH 值第 5 页,共 7 页-

14、 - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 个人资料整理 仅限学习使用的溶液 20mL,在摇床上振摇 18-24 h,测定吸附后溶液中银杏黄酮的量；pH 值3.5 4.5 5.5 6.5 7.5 吸附量将表做图由图可以看出 , pH 值在 4.5-5.5 之间 ,树脂对银杏黄酮的吸附量是最大的,因为银杏叶黄酮类化合物分子中含有酚羟基、羧基,呈弱酸性 ,酸性化合物在酸性溶液中易吸附；此外 ,酸性条件下有利于葡萄糖苷型异黄酮水解成苷元型 ,更简洁被树脂所吸附；酸性太强 ,树脂的吸附性能会受到影响 ,吸附率下降；碱性增强 ,会使异黄酮的亲水性增强 ,从而使吸附量下降；2

15、.4 大孔树脂动态吸附试验2.4.1动态吸附透过曲线的测定吸附材料选取树脂,采纳16 mm 300 mm 的玻璃层析柱作为吸附柱,称取预处理好的树脂 20 g,湿法装柱,取银杏叶样液 g/ml）300mL,用 2mol/L 的盐酸将黄酮供试液调 pH 值为 进行上样,上样流速掌握在 23 mL/min,每 50 mL 接一管,测定流出液中银杏黄酮浓度,绘制动态吸附透过曲线；流出液体积ml 50 100 150 200 250 300 流出液浓度mg/ml将表做图由图可以看出 ,当上样液体积达到100mL 时,原料液中银杏黄酮开头透过树脂柱 ,当体积达到 200mL 时,树脂柱达到饱和吸附；2.

16、4.2动态脱附解吸曲线测定称取预处理好的树脂20 g,湿法装柱,用 2mol/L 的盐酸将银杏黄酮供试液调 pH 值为 进行上样,上样流速掌握在 2-3 mL/min ,上样量为 300 mL,上样结束后用 200mL 的蒸馏水进行洗涤,以除去水溶性杂质,然后用 75%的乙醇进行洗脱,每 50mL 接一管,测量流出液中银杏黄酮浓度,绘制动态脱附解吸线；洗脱剂体积ml 20 40 60 80 100 120 流出液浓度mg/ml将表做图由图 可以看出 ,用 100 mL 75%的乙醇进行洗脱 ,可基本上将银杏黄酮完全解吸下来 ,洗脱峰集中、对称 ,无明显拖尾现象 ,起到了很好的富集和回收的作用；2.4.2洗脱产物中银杏黄酮纯度的测定= 银杏黄酮含量 /固形物重量100 % 纯度 % 洗脱溶剂解吸率 % 45%乙醇75%乙醇从表 可看出 ,产物银杏黄酮 45%乙醇解吸纯度较高 ,解吸率相对低一些；用树脂纯化前原液中 纯度为 %,经树脂纯化后的解吸产物中 纯度为 %,提高了倍,说明树脂对 起到了较好的富集、纯化作用；3 结果与分析4 结论名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 7 页