徒手切片制作方法.doc

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1、一、目的要求 徒手切片法是观察植物内部结构的简易制片法.所需的仪器用具简单，药品经济，操作方便，费时较短，且易于保持材料的天然色泽和活体结构,必要时，也可经过脱水、染色制成永久制片而保存.但是徒手制片对于体积过小，质地太软或太硬的材料，则难于处理,同时,也不能制成连续切片,这些均为不足之处。 二、材料、用品 1、用品 显微镜、剃头刀（或刀片)、毛笔、镊子、培养皿、染色皿（或小酒杯）、吸管、载玻片、盖玻片、吸水纸。1番红水溶液（或50酒精溶液），0。5固绿95%酒精溶液，70、85%、95%酒精，纯酒精、二甲苯和中性树胶或加拿大树胶等。 三、方法与步骤 1、选材 所用材料不宜太软或太硬。一般植物

2、幼嫩的根茎或一些植物的叶片、叶柄等均可使用此法。质地较薄的材料，如叶片,可沿主脉两侧切成宽约56毫米，长11.5厘米的小块，夹在夹持物（如胡萝卜根或马铃薯块茎等)中进行切片.使用夹持物时,先将夹持物的中央切成两半，然后将切好的材料夹入，合拢夹持物进行切片，也可将叶片卷成筒状再切。 2、切片 （1） 盛清洁的水于培养皿中。然后用左手的拇指及食指、中指夹住材料，拇指的位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米，材料的切面必须保持水平方向。（2） 右手执刀(剃头刀或刀片），平放在左手食指之上,刀口向内，自左前方向右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向内平切。 (3) 拉切的速度宜快,一次切

3、下,不要中途停顿或似拉锯式,以免损伤材料或切得不平.(4) 切片过程中，如发现由于用力不均而使材料表面倾斜时，必须立即削平.(5) 刀片或剃刀必须锋利，材料及切片均需经常沾水，以保持材料湿润、润滑。 (6) 切下的薄片可随时涮入培养皿的水中，以备观察；等切到相当数量后；再选择其中最薄的透明度最大的做成临时玻片观察。如想短期保存，可用水或甘油封藏。如希望长期保存所切的材料,则还要经过以下几个步骤做成永久玻片标本。 3、固定 挑选出符合要求的切片，用毛笔移入盛有70%酒精的染色皿中进行固定.固定时间为16分钟或更长时间. 4、染色、脱水、透明 （1）用吸水管吸去70酒精，染以1番红（50酒精溶液）

4、约30分钟。 （2）再用吸管吸去番红,换用70%8595酒精进行冲洗、脱水,每级酒精35分钟。 （3)复染色。吸去酒精，用0.5%固绿（95酒精溶液）进行复染色，时间为0.5分钟。 (4)冲洗、脱水。用95酒精冲洗1次，时间10秒.后移入纯酒精中脱水23次，每次35分钟. （5）透明.吸去纯酒精,放入1/2二甲苯-1/2纯酒精溶液中脱水和透明1次，时间5分钟。 （6）吸去脱水透明液，换以纯二甲苯透明2次，时间5分钟。 5、封片、贴标签 将已透明材料用镊子或解剖针轻挑于清洁的载玻片上,滴上中性树胶,盖上盖玻片进行干燥. 在已封好的切片左边贴上标签，注明材料名称、制作日期和制作者姓名等项，以便查考

5、.较好的切片，其木质化的细胞壁和细胞核可染成红色，细胞质和纤维素的壁则常被染成绿色，红绿相衬，有利于观察、分辨植物体的内部结构。 现将徒手切片制片的简要步骤归纳如下: 选材切片固定（70酒精）1番红（50%酒精溶液)染色70酒精冲洗脱水(85酒精、95酒精）0.5%固绿（95%酒精溶液)复染色冲洗(95酒精1次)进一步脱水（纯酒精23次)透明(1/2纯酒精十1/2二甲苯及纯二甲苯各二次)封片(中性树胶）贴标签。 附：药品的简单配方 (1)1%番红:于蒸馏水或50酒精100毫升中溶入番红粉末l克，过滤后使用。 （2）0。5%固绿：95酒精100毫升中加入固绿粉末0。5克。 徒手切片方法的改进徒手

6、切片技术运用在植物学实验教学中的历史较为悠久， 在石蜡切片之前, 基本上使用徒手切片。它的优点在于可以观察新鲜材料组织和细胞的天然色彩, 看到活体细胞结构状态, 所以徒手切片运用在植物学实验教学中比较普遍。为了克服传统徒手切片技术中的不足， 我们进行了改进, 改为皮套加刀片.这种切片方法切片速度快， 软硬质材料都可以切， 不需要任何夹物， 既经济适用， 又简单易行。1 材料用品双面刀片1 个,直径11。5 cm 的乳胶管, 毛笔、培养皿、载玻片、盖玻片、吸水纸, 质量分数1%的中性红染液或红墨水，新鲜的植物根、茎、叶、花药和子房等。2 切法将直径11.5 cm 的乳胶管剪成3。5 cm 长的一

7、段, 用剪子从中间剖开扣在右手的大拇指上， 注意皮套一定要高于拇指, 把要切的植物材料， 紧贴在皮套的外侧.如果是叶可以把它卷紧, 所切的材料不可过长， 大约22.5 cm 即可。此时用食指与中指和拇指一起把材料捏住, 幼嫩的材料捏时不可用力过猛, 以免损坏组织细胞.右手的拇指和食指捏住双面刀片的一侧, 手腕端平, 把刀片的前端与要切的材料保持垂直相接状态， 先切平材料， 然后用腕力向内连续切片， 刀片只要搭住材料就可以垂直切片.另外还可以用同样的方法将双面刀片的先端与材料搭住、垂直、从右向左推切， 如此连续切下去, 然后用毛笔将切得薄而透明的材料刷入培养皿的水中,避免干燥。3 染色、封片把载

8、玻片和盖玻片用纱布擦拭干净, 放在实验台上, 加上1 滴中性红染液或红墨水， 用毛笔在培养皿中选择薄而透明切片沾到染色液上， 用解剖针轻轻拨入染色液中， 大约30 s 后， 吸去染色液, 加1 滴清水封片。为了防止气泡的产生, 用左手拇指与食指拿住盖玻片的两侧, 使盖玻片的基部与滴液先接触， 右手握解剖针挑着盖玻片从左向右徐徐放下盖玻片， 使气体从一侧排出， 如果有多余的水溢出, 可用吸水纸吸干,再进行下一步的镜下观察.4 镜检镜下观察时, 对好光源， 让视野光线均匀一致， 放上临时切片, 从低到高进行观察.一个好的皮套切片,镜下观察有4 点标准： 材料完整， 薄而透明； 镜下结构清晰； 无气泡； 封藏剂合适。通过染色后的材料， 凡是死细胞均被染成红色， 而生活细胞仍然保持活体的自然色彩。